1、 天大天發BET-48G系列細菌內毒素分析儀操作規程 1.儀器組成及開機 1. 1儀器組成 細菌內毒素測定儀主機、計算機、打印機、 EasyBET軟件。 1. 2 .試驗環境要求 安裝在沒有明顯空氣流動的潔凈的工作間， 無菌、無塵、低溫。 1. 3開機 翻開細菌內毒素測定儀主機的電源開關， 翻開計算機，啟動EasyBET軟件。 2 操作方法 2. 1軟件啟動，雙擊軟件圖標翻開軟件，軟件首先搜索內毒素測定儀，找到后顯示該儀器 的型號。如果儀器未聯機那么不能進行檢測操作。 2. 1. 1用戶登錄 登錄過的用戶選好檢驗員，輸入密碼，點擊確定即可進入；沒登錄過的 用戶輸入檢驗員名稱，設置好密碼點擊【添

2、加新檢驗員】即可進入。 2. 1. 2進入主畫面 待儀器右上角溫度顯示為 37 0.3 C時，即可進行試驗設置和檢測。 MBS* ! 正莊M映Hl#中跟嘉己林! ICKf jRrt 暴 # g 沖更程 |剪補事MB月|財心內竟蛔 2. 2標準曲線的可靠性試驗 2. 2. 1標準品系列濃度溶液準備 在進行標準系列的制備時， 2至10倍的稀釋方法都可以 使用， 將細菌內毒素標準品用細菌內毒素檢查用水按等比例稀釋如 2倍稀釋，5倍稀釋 等，制備成一個至少包含三個標準濃度的標準系列溶液， 例如，0.5、0.25、0.125、0.06、 0.03Eu/ml系列或5、1、0.2、0.04Eu/ml系列，每

3、個標準濃度在檢測時最少要做三個平 行管，稀釋步驟參照凝膠法標準品稀釋步驟。 2. 2 . 2檢測軟件設置 用鼠標點擊【新試驗】出現【試驗設置向導】畫面，首先填寫鯊試 f IUIL 岷了期拍訝骨MT網站- :MsZi.xTlETr 圖1 -Iffl M| - 曹E嚴；囂琴 *阿阿K14尊K事甘智主行*另害1膈*- 劑批號、內毒素批號、檢查用水批號，選中【做新標準曲線】 ，填寫初始濃度、稀釋梯度、 濃度點數、平行管數，然后用鼠標點擊【自動設置標準曲線】 ，在表格中出現所設置的數據。 鼠標點擊【陰陽性對照】畫面，選中【陰性對照】 ，填寫平行管數， 鼠標點擊【試管位置選擇】，點擊【自動選擇】后點擊【開

4、始檢測】 ，程序設置完畢, 該文件存在【檢品管理中心】的標準曲線內，該標準曲線以【鯊試劑批號】 +【內毒素批號】 +【當前時間】作為文件名存盤，也可在畫面底列【保存文件名】處改動，自行輸入名稱， 但要事先建好該文件夾。 出現如下畫面: ZE7EARM-#4E!ZIS i :(S *開叫 EF S端A K 的- U,EM，E II 雄 m印內內#5； - X t34 忐iz c= 圖5 該文件存在【檢品管理中心】的標準曲線內。該標準曲線以【鯊試劑批號】 +【內毒素 批號】+【當前時間】作為文件名存盤，也可在畫面底列【保存文件名】處改動，自行輸入 名稱，但要事先建好該文件夾。 2. 2. 3試驗檢

5、測 2.2.3.1 溶解分狀裝鯊試劑 根據用量溶解鯊試劑，如使用多支鯊試劑，將溶解的鯊試劑 混合在一起，分裝到無熱原的儀器專用檢測管內，每支檢測管內 0.1ml 要求沒有氣泡。 2.2.3.2 加樣取稀釋好的內毒素系列濃度溶液，根據所設定管數分別參加有鯊試劑的小 試管中0.1ml ,注意加樣前應混合溶液 30秒，且每個濃度點加樣前應更換加樣頭。另取細 菌內毒素檢查用水做陰性對照。 LEk LCDD 記景 也1 林二&歇 批號 福程伯斯附恫內 fW KE收垣 i 3.眄塞標 2眄章標惟 ir- 1 日眄章標佐 p 125- IP 125 p. Cffi23 |p.35 pn 1 P a

6、圖3 圖4 當的翻開檢二立件 ,，標雁曲 tns.Tja._n I ooma LCD 責 加 F IBK 、 手 jguitm 財蜒.r 險互 X I5t 柄 內 | j=：- 水 |由D3KI .DL 1 IQ LIM 有雁割攜 7 LgT-i+bLflC+tLflC*2+dLs|C*3 pEOD 菱空白？MS : 2.2.3.3 檢測每個濃度點在加完樣后應立即用封口膜封口，放入細菌內毒素測定儀設定 位置，儀器自動開始檢測。 待標準曲線最后一個濃度的 ODf直超過預設值后，用鼠標點擊【手 動停止檢測】，停止數據采集。點擊標準曲線坐標畫面，生成并儲存標準曲線，計算出相關 系數。 2.2.3.4

7、 試驗報告打印 點擊【報告打印預覽】，在報告打印預覽畫面點擊【打印】即可。 圖6 2. 3供試品干擾預試驗 2. 3. 1供試品溶液制備：將供試品溶液用細菌內毒素檢查用水稀釋成所選擇的系列濃度， 同時制備系列濃度的供試品陽性管和陽性管， 供試品陽性管外加內毒素標準品濃度和陽性管 標準品濃度相同，標準品濃度為所選用標準曲線的中間濃度。 2. 3. 2檢測軟件設置 用鼠標點擊【新實驗】出現試驗向導畫面，首先填寫鯊試劑批號、 內毒素批號、檢查用水批號，點擊【供試品設置】 ，選擇供試品名稱，所做供試品管的稀釋 倍數；填寫供試品批號、 稀釋倍數所選擇的系列濃度最小稀釋倍數 、平行管數。選中【回 收率管】

8、，填寫外加內毒素濃度、供試品稀釋組數、稀釋梯度，點擊自動設置，在表格中 出現所設置數據，例如【稀釋倍數】為 10;【供試品稀釋梯度】為 2;【供試品稀釋組數】為 4。那表格顯示供試品10 , 20, 40, 80四個稀釋倍數下回收率管及供試品管的試驗設置。如 測定單一濃度的試驗，【供試品稀釋組數】填寫【1】。 圖7 鼠標點擊【陰陽性對照】畫面，選中【陰性對照】 ，填寫平行管數，選中【陽性對照】，填寫 平行管數。鼠標點擊【試管位置選擇】 ，點擊【自動選擇】后點擊【開始檢測】 ，程序設置 完畢。文件存在所選的【供試品名稱】目錄下，以【供試品批號 +當前時間】為該試驗文件 名。標準曲線試驗可以和供試

9、品試驗一同進行，在軟件設置時，進入新試驗畫面后，首先按 照標準曲線試驗設置2.2.2 ，再進入供試品設置2.3.2 。 2.3.3試驗檢測 根據用量溶解鯊試劑，如使用多只鯊試劑將溶解的鯊試劑混合在一起， 分裝到無熱原的儀器專用檢測管內，每只檢測管內 0.1ml 要求沒有氣泡。取稀釋好的供 試品系列濃度溶液、供試品陽性系列溶液、陽性標準品溶液，根據所設定平行管數分別參加 有鯊試劑的小試管中 0.2ml 沒有氣泡，注意加樣前應混合溶液 30秒，且每個濃度點加樣 前應更換加樣頭。另取細菌內毒素檢查用水做陰性對照， 每個濃度點在加完樣后應立即用封 口膜封口，放入分析儀設定位置，儀器自動開始檢測。試驗完

10、成后，用鼠標點擊【手動停止 檢測】，停止數據采集。在【標準曲線】處選擇標準曲線后，計算機自動計算出結果。 2. 3. 4試驗報告打印：鼠標點擊【報告打印預覽】 ，在報告打印預覽畫面點擊【打印】即 可。 2.4供試品檢查測定 2.4.1供試品溶液制備 根據干擾預試驗結果，將供試品稀釋到無干擾濃度，同時制備該濃 度的供試品陽性溶液和陽性標準品溶液， 供試品陽性溶液外加內毒素標準品濃度和陽性標準 品濃度相同，標準品濃度為所選用標準曲線的中間濃度。 2.4.2檢測軟件設置 點擊【新試驗】出現試驗向導畫面，首先填寫賞試劑批號、內毒素 批號、檢查用水批號，點擊【供試品設置】 ，選擇供試品名稱，所做供試品管

11、的稀釋倍數； 填寫供試品批號、稀釋倍數平行管數。選中【回收率管】 ，填寫外加內毒素濃度、供試品 稀釋組數、【供試品稀釋組數】填寫“ 1。，點擊自動設置，在表格中出現所設置數據。如果 有兩個或兩個以上批號供試品同時檢測， 在第一個批號設置完成后，更改供試品批號，點擊 自動設置，重復以上步驟至所有批號供試品設置完成。 如果有兩個或兩個以上不同供試品同 時檢測，在第一個批號設置完成后，更改供試品名稱、批號、稀釋倍數，點擊自動設置，重 復以上步驟至所有供試品設置完成。鼠標點擊【陰陽性對照】畫面，選中【陰性對照】 ，填 寫平行管數，選中【陽性對照】，填寫平行管數。鼠標點擊【試管位置選擇】 ，點擊【自動

12、選擇】后點擊【開始檢測】，程序設置完畢。文件存在最后設置的【供試品名稱】目錄下， 以【供試品批號+當前時間】為該試驗文件名。 圖8 2.4.3試驗檢測 2.4.3.1 溶解分裝鯊試劑 根據用量溶解鯊試劑，將溶解的鯊試劑混合在一起，分裝到無 熱原的儀器專用檢測管內，每只檢測管內 0.1ml 沒有氣泡。 2.4.3.2 加樣 取稀釋好的供試品溶液、供試品陽性溶液、陽性標準品溶液，根據所設定 平行管數分別參加有鯊試劑的小試管中 0.1ml或0.2ml 沒有氣泡，注意加樣前應混合溶 液30秒，且每個濃度加樣前應更換加樣頭。另取細菌內毒素檢查用水做陰性對照。 2.4.3.3 檢測每個供試品在加完樣后應立

13、即用封口膜封口，放入細菌內毒素測定儀設定 位置，儀器自動開始檢測。試驗完成后，點擊【手動停止檢測】 ，停止數據采集。在【標準 曲線】處選擇標準曲線后，計算機自動計算出結果。 2.4.4 試驗報告打印 用鼠標點擊【報告打印預覽】，在報告打印預覽畫面點擊【打印】 即可。 2.5 多任務同時工作 EasyBET檢測軟件內毒素分析儀檢測孔位足夠時， 可以同時進行多 個試驗。在一個試驗完成設置后，可以重新開始另一個試驗的設置。在試驗運行過程中 ，還 可以翻開以前的試驗數據進行分析查看。 2. 6儀器參數設置 在主畫面中點擊右上角的儀器溫度顯示圖片， 進入儀器設置畫面， 在 該畫面中還可以對儀器作 3Q認

14、證等試驗，如圖 9所示，選擇儀器型號和通信端口，如果該 兩項的內容錯誤將無法進行試驗。 根據所檢測的供試品的顏色決定選擇檢測波長， 如果為無 色透明的供試品選擇 450nm如果供試品帶有黃色可以選擇 660nm,消除供試品顏色對檢測 的干擾。 璀役翳型號 |CnL T IBETTE | 朋口皿 -| 狎*聳;暴皓Win祝 p IM 心.二1 圖9 2.7 觀察分析反響曲線 在試驗的過程中和試驗結束后數據分析時可以觀察每一個試管 的反響曲線，圖10中的反響曲線為內毒素標準品的正常反響曲線，如果供試品中存在的干 擾成分未被排除，它的反響曲線必定有所變化， 該軟件提供了多種曲線顯示分析方法， 其中 反響速率法可以區別出供試品中是否有葡聚糖。 另外，根據使用的不同鯊試劑， 要適當調整 顯示幅度、零化期時間、預設 OD直，以適應該種鯊試劑的反響特性。 3、儀器維護保養 3. 1試管檢測器的維護保養 測定儀主機的試管檢測器是整個設備的關鍵， 保證檢測孔內清潔至關重要，防止塵土落 入，應及時將防塵蓋蓋好，如果有異物落入孔中應小心將其取出，防止賭塞光電檢測孔。 3. 2玻璃實驗器材除熱原的可靠方法 a 將玻璃實驗器材試管、吸頭等放入重銘酸鉀濃硫酸洗液中浸泡 4個小時以上。 b 取出實驗器材用蒸e留水反復沖洗 8遍， c 用“三效熱原滅火劑水溶液浸泡 12個小時或在超