1、P16蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義 摘 要 目的：探討P16蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。方法：采用SP免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)食管鱗癌90例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌49例中P16蛋白的表達(dá)。結(jié)果：P16在高分化鱗癌組陽(yáng)性表達(dá)率（52.6%）顯著高于低分化鱗癌組（25.0%），（P<0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組原發(fā)癌（21.9%）和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組原發(fā)癌（60.4%）比較，具有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)論：P16基因蛋白對(duì)食管癌的轉(zhuǎn)移可能有抑制作用，檢測(cè)P16蛋白對(duì)食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)及預(yù)后評(píng)估具有一定意義。關(guān)鍵詞 食管鱗狀細(xì)胞癌；免疫組織化學(xué)；P16蛋白

2、 食管癌是我國(guó)最常見(jiàn)惡性腫瘤之一，對(duì)食管癌轉(zhuǎn)移分子調(diào)控機(jī)制的研究，已成為食管癌研究領(lǐng)域的關(guān)鍵問(wèn)題。為了探討P16蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的變化及其與臨床病理特征的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)采用靈敏的SP免疫組織化學(xué)方法，初步探討了P16在食管癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及判斷預(yù)后的意義。1 材料和方法1.1 材料1 / 6收集2004年2005年長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院附屬和平醫(yī)院食管鱗狀細(xì)胞癌新鮮組織標(biāo)本90例，所有患者術(shù)前均未經(jīng)放療或化療。經(jīng)病理證實(shí)高分化鱗癌38例，中分化40例，低分化12例；其中侵及粘膜下肌層和淺肌層者35例，侵及深肌層及外膜者55例。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例，其中轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)49枚，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者

3、58例。男性患者61例，女性29例，年齡40歲76歲，平均年齡60.2歲。1.2 方法采用SP法，P16單克隆抗體、SP試劑盒、DAB顯色劑由福建邁新生物技術(shù)有限公司提供。DAB顯色，蘇木素復(fù)染。用PBS代替一抗作陰性對(duì)照，以已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照。1.3 免疫組化染色結(jié)果判定P16陽(yáng)性物質(zhì)位于細(xì)胞核內(nèi)，呈棕黃色顆粒，每張切片連續(xù)觀察10個(gè)高倍視野，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)超過(guò)10%定為染色陽(yáng)性病例（），否則，定為陰性病例（）。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用2檢驗(yàn)，對(duì)各組資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2 結(jié)果90例食管鱗狀細(xì)胞癌組織中P16蛋白陽(yáng)性表達(dá)42例，總陽(yáng)性率為46.7%。P16蛋白表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征的

4、關(guān)系見(jiàn)表1。結(jié)果表明P16蛋白在食管低分化鱗癌中表達(dá)較低，在中高分化鱗癌中高表達(dá)，兩者與前者比較有顯著性差異（P0.05)，而P16蛋白表達(dá)與癌組織的浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)。有轉(zhuǎn)移組原發(fā)癌P16表達(dá)的陽(yáng)性率為21.9%，無(wú)轉(zhuǎn)移的原發(fā)癌陽(yáng)性表達(dá)為60.4%，兩者有顯著性差異，在90例食管癌中，有42例陽(yáng)性表達(dá)，但在49枚轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中，P16蛋白僅有9枚陽(yáng)性表達(dá)，兩者統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異（P0.05）。表1 P16蛋白表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系（略）3 討論P(yáng)16蛋白屬于細(xì)胞周期依賴(lài)性激酶抑制劑（cyclin dependent kinase inhibitors,CDKI）中重要成分，它是細(xì)胞

5、周期監(jiān)控、驅(qū)動(dòng)機(jī)制中最主要的調(diào)控蛋白，對(duì)細(xì)胞周期具有顯著的抑制作用，檢測(cè)P16蛋白有助于人們對(duì)食管癌生物學(xué)行為及預(yù)后的認(rèn)識(shí)。P16基因定位于人類(lèi)染色體9p21，全長(zhǎng)8.5kb，含3個(gè)外顯子和1個(gè)內(nèi)含子。P16是G1S期限速步驟中重要的調(diào)節(jié)組件。有文獻(xiàn)報(bào)道，在宮頸癌及其癌前病變中存在P16基因的丟失，提示P16失活參與宮頸癌的發(fā)生，并可能發(fā)生在宮頸癌的早期階段。目前已發(fā)現(xiàn)，在人類(lèi)許多種腫瘤細(xì)胞系和原發(fā)腫瘤中均有P16基因及其產(chǎn)物的改變，。本研究表明P16蛋白表達(dá)在食管鱗狀細(xì)胞癌中陽(yáng)性率為46.7%。P16蛋白在高分化鱗癌中的陽(yáng)性率為52.6%，顯著高于低分化組的25.0%，提示P16蛋白表達(dá)缺失

6、與食管癌分化不良有關(guān)，檢測(cè)P16可作為判斷腫瘤分化程度的一個(gè)參考指標(biāo)。本資料還顯示，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的P16蛋白陽(yáng)性率（21.9 %），明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（60.4 %），兩組比較具有顯著性差異（P<0.05），提示P16的低表達(dá)對(duì)食管癌的演進(jìn)及最終使癌細(xì)胞獲得轉(zhuǎn)移的潛能具有重要作用。P16在食管原發(fā)癌中陽(yáng)性率為46.7%，而在淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移癌中其陽(yáng)性表達(dá)率為18.3%，轉(zhuǎn)移癌中陽(yáng)性病例在其相應(yīng)的原發(fā)癌中P16同樣為陽(yáng)性，二者比較有顯著性差異（P<0.05），結(jié)果表明，P16在原發(fā)癌和轉(zhuǎn)移癌中失活機(jī)制可能不盡相同，轉(zhuǎn)移癌為食管癌的晚期事件，故失活率較高。P16的高表

7、達(dá)有可能抑制食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，提示檢測(cè)P16對(duì)于食管癌轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)及預(yù)后評(píng)估有一定作用。參考文獻(xiàn)1夏加增,尹浩然,朱正綱.P27蛋白分子生物學(xué)及其與消化系腫瘤的關(guān)系J.國(guó)外醫(yī)學(xué)消化系疾病分冊(cè),2000,20(2):107110.2Serrano M,Hannon G J,Beach D,et al.A new regulatory motif in cycle control causing specific inhibition of cyclinD/CDK4J.Nature,1993,366(16):704712.3王 梅,王 冰,王曉麗,等.宮頸上皮癌變過(guò)程中細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白P16、CyclinD和Rb相互惠作用的研究J.實(shí)用腫瘤雜志,2002,17(1):1416.4戰(zhàn)雪梅,王國(guó)新,孫崇偉,等.食管癌組織中