1、單硝酸異山梨酯注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法探究摘要目的：建立單硝酸異山梨酯注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢 查方法。方法：參照中國藥典2005年版二部附錄收載的 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法及其原則進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，用兩個(gè)不同廠家的鯊 試劑對(duì)不同批號(hào)的單硝酸異山梨酯注射液進(jìn)行了干擾試驗(yàn) 和細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。結(jié)果:本品稀釋至002 mg/ml時(shí)可消除 對(duì)鯊試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素凝集反應(yīng)的干擾，按擬定標(biāo)準(zhǔn),9個(gè)廠 家生產(chǎn)的22批單硝酸異山梨酯注射液均符合規(guī)定。結(jié)論:本 方法可用于單硝酸異山梨酯注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。關(guān)鍵詞單硝酸異山梨酯注射液；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法; 干擾試驗(yàn)中圖分類號(hào)r927.2e文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼b文章編號(hào) 1673-7210 (201

2、0)04 (c)-068-03study on the method of bacterial endotoxin test of isosorbide mononitrate injectionwu ting, li wei(institute for drug control of guangzhou, guangzhou 510160, china)abstract objective： to establish the bacterialendotoxin test methed in isosorbide mononitrate injection. methods： accordi

3、ng to china pharmacopoeia 2005 version (ii) appendix, different batches of isosorbide injection from the two different tal manufacturers were underwent the interference tests results： there was no interference in the bacterial endotoxins test when the concentration of isosorbide mononitrate injectio

4、n was less than or equal to the detection limit 0.02 mg/m1. conclusion： the method is feasible to carry out the bacterial endotoxin test for isosorbide mononitrate injection.key words isosorbide mononitrate injection； bacterial endotoxin test； interference test單 硝酸異山梨酯 注射液(isosorbide mononitrate inj

5、ection)為新一代的長效硝酸酯類抗心絞痛藥物，通過擴(kuò) 張外周血管，特別是靜脈容量血管，減少回心血量，降低心臟 前后負(fù)荷，使心肌耗氧量減少，發(fā)揮抗心肌缺血作用1-2 o 主要用于冠心病的長期治療，心絞痛的預(yù)防，心肌梗死后持 續(xù)心絞痛的治療；與洋地黃或利尿劑聯(lián)合應(yīng)用，治療慢性充 血性心力衰竭。單硝酸異山梨酯注射液具有較強(qiáng)的擴(kuò)張冠狀 動(dòng)脈作用，從而改善缺血性心臟病供血狀況，它還具有抑制 血小板聚集和降低血液黏附作用3。本品與其他血管擴(kuò)張 劑、鈣拮抗劑、0受體阻滯劑、抗高血壓壓藥、三環(huán)抗抑郁 藥及酒精合用，可強(qiáng)化本類藥物的降血壓效應(yīng)。本品收載于 國家藥品標(biāo)準(zhǔn)ws1-（x-078）-2004z，但未

6、規(guī)定細(xì)菌內(nèi)毒素檢 查標(biāo)準(zhǔn)。為了提高藥品控制標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)對(duì)單硝酸異山梨酯注射 液進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，建立了本品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查質(zhì)量標(biāo) 準(zhǔn)。1儀器與試藥1.1儀器旋渦振蕩器（德國ika,型號(hào):ms-1）；四孔水浴鍋（英國 grant,型號(hào):sub14）o1.2試藥單硝酸異山梨酯注射液（&批號(hào)：060142&規(guī)格：5 ml : 20 mg,濟(jì)南利民制藥有限責(zé)任公司；b.批號(hào)：20050702, 規(guī)格:5 ml i 20 mg,山東海山藥業(yè)有限公司；c.批號(hào):060110, 規(guī)格:2 ml * 25 mg,南寧楓葉藥業(yè)有限公司；d.批號(hào):040801, 規(guī)格：2 ml : 25 mg,上海旭東

7、海普藥業(yè)有限公司；e.批 號(hào)：070502,規(guī)格：5 ml : 20 mg,廣東省博羅先鋒藥業(yè)集團(tuán)有 限公司）。鯊試劑（a. tal,批號(hào)：0809091,規(guī)格：01 ml/支，標(biāo) 示靈敏度：0. 25 eu/ml,湛江安度斯生物有限公司鯊試 劑；b. tal,批號(hào)：081124,規(guī)格：01 ml/支，標(biāo)示靈敏度：0. 25 eu/ml,廈門市鯊試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司鯊試劑）。細(xì)菌內(nèi)毒素 工作標(biāo)準(zhǔn)品（cse,批號(hào)：150601-200860,效價(jià)：160 eu/支,中 國藥品生物制品檢定所）。內(nèi)毒素檢查用水（bet水，批 號(hào)：0801180,規(guī)格：50 ml,湛江安度斯生物有限公司)。2方法與結(jié)果

8、2. 1細(xì)菌內(nèi)毒素限值的確定4按中國藥典2005年版二部中細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的規(guī) 定，根據(jù)公式l=k/m,式中l(wèi)為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值,k為 按規(guī)定的給藥途徑，人用每公斤體重每小時(shí)最大可接受的內(nèi) 毒素劑量，注射劑k=5 eu/ (kg h),m為人用每公斤體重每小 時(shí)的最大供試品劑量，人均體重按60 kg計(jì)算，注射時(shí)間若不 足1 h,按1 h計(jì)算。本品收載于國家藥品標(biāo)準(zhǔn)ws1-(x-o78)-2004z，規(guī)格：5 ml ： 20 mg、 2 ml ： 25 mg、 2 ml ： 20 mg、 1 ml ： 10 mg,熱 原劑量為1 mg/kg。根據(jù)單硝酸異山梨酯注射液說明書的用 法用量，靜脈

9、滴注一般有效劑量：每小時(shí)27 mg,-般速 度：60 120 u g/min,本品的 m=7 mg/ (60 kg 1 h)=0. 12 mg/(kg h) o k為5 eu/(kg h),本品用于心血管藥、兒童 老人用藥，根據(jù)注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則(修訂 稿)的要求安全系數(shù)定為3,按公式l=k/m計(jì)算，則l=14 eu/mgo2.2鯊試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)按照中國藥典2005年版二部附錄xi e “鯊試劑靈敏 度復(fù)核試驗(yàn)”項(xiàng)下進(jìn)行，結(jié)果見表1。2批鯊試劑靈敏度分別 為0. 18、0. 25 eu/ml,均在0. 502. 00范圍內(nèi)，靈敏度符合 規(guī)定，可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。表1鯊試劑靈敏

10、度復(fù)核試驗(yàn)tab. isensitivity test of tachypleus amebocyte lysate單硝酸異山梨酯注射液有效稀釋濃度(mvc)的計(jì)算5-6 根據(jù)公式mvc二入/l,其中l(wèi)為內(nèi)毒素限值14 eu/mg,入為鯊 試劑標(biāo)示靈敏度，目前市售鯊試劑靈敏度范圍為0.500.03 eu/ml,則單硝酸異山梨酯注射液對(duì)應(yīng)的有效稀釋濃度分別 為 0. 040 0、0. 020 0、0. 010 0、0. 005 0、0. 002 5 mg/ml o2.3干擾預(yù)試驗(yàn)7用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水將單硝酸異山梨酯注射液分別 稀釋至 0.040 0、0.020 0、0.010 0、0.005

11、0、0. 002 5 mg/ml 的濃度，將此系列稀釋液記為npc系列，同時(shí)在上述系列的 試驗(yàn)液中加入2入濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，記為ppc系 列。取靈敏度為0.25 eu/ml的兩個(gè)廠家的鯊試劑，分別與上 述npc、ppc系列進(jìn)行反應(yīng)，每一濃度重復(fù)兩管，并設(shè)陽性和 陰性對(duì)照。結(jié)果見表2、3o表2單硝酸異山梨酯注射液的干擾預(yù)試驗(yàn)1tab. 2 results of prerliminary interference test ofisosorbide mononitrate injection 1鯊試劑（批號(hào):0809091,標(biāo)示靈敏度:0. 25 eu/ml,湛江安 度斯生物有限公司）表3

12、單硝酸異山梨酯注射液的干擾預(yù)試驗(yàn)2tab. 3 results of prerliminary interference test of isosorbide mononitrate injection 2鯊試劑（批號(hào)：081124,標(biāo)示靈敏度：0.25 eu/ml,廈門市 鯊試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司）由以上干擾預(yù)試驗(yàn)結(jié)果可以初步了解，兩個(gè)廠家鯊試劑 對(duì)單硝酸異山梨酯注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素的試驗(yàn)結(jié)果均在 0. 04 mg/ml以下濃度時(shí)無干擾。2.4干擾試驗(yàn)為了最終確認(rèn)無干擾因素，進(jìn)行以下干擾試驗(yàn)。將單硝 酸異山梨酯注射液用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水進(jìn)行稀釋,使其最 終濃度為0.02 mg/ml,按照中國藥典2

13、005年版二部附錄 中的“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查供試頻干擾試驗(yàn)”項(xiàng)下進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié) 果見表4、5o表4單硝酸異山梨酯注射液的干擾試驗(yàn)1tab.4 resuits of interference test of isosorbidemononitrate injection 1鯊試劑（批號(hào)：0809091,標(biāo)示靈敏度:0. 25 eu/ml，湛江安 度斯生物有限公司）表5單硝酸異山梨酯注射液的干擾試驗(yàn)2tab.5 resuits of interference test of isosorbidemononitrate injection 2鯊試劑（批號(hào)：081124,標(biāo)示靈敏度：0. 25 eu/ml,

14、廈門市 鯊試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司）5批單硝酸異山梨酯注射液用兩個(gè)廠家生產(chǎn)的鯊試劑進(jìn) 行試驗(yàn)，結(jié)果單硝酸異山梨酯注射液0. 02 mg/ml稀釋溶液對(duì) 兩個(gè)廠家生產(chǎn)的鯊試劑無干擾作用,es/et均在0.52.0范 圍內(nèi)。2.5樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查取9個(gè)廠家生產(chǎn)的22批單硝酸異山梨酯注射液,分別稀 釋到0. 02 mg/ml,使用兩個(gè)廠家的靈敏度均為0. 25 eu/ml的 鯊試劑，按照中國藥典2005年版二部附錄"細(xì)菌內(nèi)毒素 檢查法”進(jìn)行檢查,結(jié)果全部符合規(guī)定。由此可得結(jié)論，單硝 酸異山梨酯注射液稀釋到0. 02 mg/ml時(shí)對(duì)鯊試劑與內(nèi)毒素 凝集反應(yīng)無干擾作用，可適用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。3討

15、論本品單硝酸異山梨酯注射液收載于國家藥品標(biāo)準(zhǔn) ws1-(x-078)-2004z,規(guī)格：5 ml : 20 mg. 2 ml ： 25 mg、2 ml ： 20 mg、1 ml ： 10 mgo現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為熱原檢查，劑 量為1 mg/kgo目前本品無細(xì)菌內(nèi)毒素檢查項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)，如采用鯊 試劑法來控制細(xì)菌內(nèi)毒素，操作簡易且結(jié)果可靠。從干擾預(yù) 試驗(yàn)和正式干擾試驗(yàn)可知，單硝酸異山梨酯注射液對(duì)鯊試劑 無干擾的有效濃度范圍在0. 04 mg/ml以下，在此濃度范圍內(nèi), 可用靈敏度為0.25 eu/ml的鯊試劑進(jìn)行檢驗(yàn)。由于不同廠 家生產(chǎn)的鯊試劑其抗干擾能力存在差異，所以本實(shí)驗(yàn)采用了 兩個(gè)廠家鯊試劑進(jìn)行干擾試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，單硝酸異山 梨酯注射液稀釋到0.02 mg/ml時(shí)對(duì)鯊試劑與內(nèi)毒素凝集反 應(yīng)無干擾作用，可適用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。因此，本品采用限 值14 eu/mg進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替熱原檢查法是可行 的。參考文獻(xiàn)1王茹.靜脈滴注單硝酸異山梨酯注射液治療冠心病 心絞痛的臨床觀察與護(hù)理j臨床醫(yī)藥實(shí)踐雜 志,2008,39(2):140.2方巧云，江曉風(fēng)靜滴魯南欣康治療高血壓急癥的臨 床觀察與護(hù)理j.臨床護(hù)理雜志,2005,6 (4) ： 65-66.3宋文宣，張七一，孫王安，等.實(shí)用心血管病