1、霉菌檢測作業指導書一、霉菌（平板計數法）1.0 目的規定食品中霉菌檢測的方法。2.0 適用范圍2.1 適用于產品、原輔材料（除番茄醬罐頭、番茄汁）中的霉菌檢測。3.0 術語無4.0 作業流程圖見附錄 A5.0 內容及要求5.1 設備和材料 除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外，其他設備和材料如下：5.1.1 恒溫培養箱：28 C± 1 C。5.1.2 恒溫水浴鍋：46C±1C。5.1.3 均質器5.1.4 電子天平：感量 0.1 g 。5.1.5 無菌錐形瓶 :容量500 mL。5.1.6無菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器

2、及吸頭5.1.7 無菌平皿：直徑 90 mm。5.1.8 無菌試管：18 mm X 180 mm5.1.9 無菌玻璃珠：直徑約 5mm5.1.10 菌落計數器5.2 培養基和試劑5.2.1 馬鈴薯葡萄糖瓊脂5.2.2 75%乙醇溶液523 無菌生理鹽水：稱取8.5g氯化鈉溶于1000ml蒸餾水中，121C高壓滅菌15min。5.3 操作步驟5.3.1 樣品的稀釋5.3.1.1 固體和半固體樣品：稱取 25 g 樣品至盛有 225 mL 無菌生理鹽水的無菌均質袋中， 用拍擊式均質器拍打1min-2min，制成1:10的樣品勻液。5.3.1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取 25ml 樣品置于盛有 2

3、25ml 的無菌生理鹽水的無菌錐形 瓶（瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠 ）中，充分混勻，制成 1： 10 的樣品勻液。5.3.1.3 用1ml無菌吸管或微量移液器吸取1： 10樣品勻液1ml，沿管壁緩慢注入盛有9ml無菌生理鹽水的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支1mL無菌吸管反復吹打,使其混合均勻,制成1 : 100的樣品勻液。5.3.1.4 按5.3.1.3 操作程序，制備 10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用 1 次1 mL 無菌吸管。5.3.1.5 根據對樣品污染狀況的估計，選擇2個3個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可 包括原液），在進行 10

4、 倍遞增稀釋的同時，每個稀釋度分別吸取 1 mL 樣品勻液于 2 個無菌 平皿內。同時分別取1 mL樣品稀釋液加入2個無菌平皿作空白對照。5.3.1.6 及時將15 mL20 mL冷卻至46 C的馬鈴薯葡萄糖瓊脂（可放置于46C± 1C恒溫水 浴箱中保溫 ）傾注平皿，并轉動平皿使其混合均勻。5.3.2 培養待瓊脂凝固后，將平板倒置，28C± 1C培養5d，觀察并記錄。5.3.3 菌落計數 肉眼觀察，必要時可用菌落計數器，記錄各稀釋倍數和相應的霉菌數。以菌落形成單位（colonyforming units，CFU表示。選取菌落數在10 CFU150 CFU的平板，根據菌落形態

5、計數霉菌數。霉菌蔓延生長覆蓋整個平板的可記錄為多不可計。菌落數應采用兩個平板的 平均數。5 .4結果與報告5.4.1.1 計算兩個平板菌落數的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數計算 541.2 若有兩個連續稀釋度的平板菌落數均在10 CFU- 150CFU之間時，按公式（1）計 算：N=刀 C/ （n 1+0.1 n2）d,（1）式中：N樣品中菌落數；工C平板（含適宜范圍菌落數的平板）菌落數之和；n1第一稀釋度（低稀釋倍數）平板個數；n2第二稀釋度（高稀釋倍數）平板個數；d稀釋因子（第一稀釋度）。示例：稀釋度1:100 （第一稀釋度）1:1000 （第二稀釋度）菌落數232， 24433，35

6、N=刀 C/ （n 1+0.1 n2） d=（232+244+33+35 / （2+0.1 X 2）X 10-2 =544/0.022=24727上述數據按5.4.2.2.數字修約后，表示為25000或2.5 X104。5.4.1.3若所有平板上菌落數均大于150 CFU,則對稀釋度最高的平板進行計數，其他平板可記錄為多不可計，結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。5.4.1.4 若所有平板上菌落數均小于10 CFU,則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。5.4.1.5若所有稀釋度平板均無菌落生長，則以小于 1乘以最低稀釋倍數計算；如為原液，則以小于1計數。5.4.1.6 若所有稀釋度的平板菌落數均不在30 CFU- 300 CFU之間，其中一部分小于30 CFU或大于300CFU時，則以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。5.4.2報告5.4.2.1菌落數按“四舍五入”原則修約，菌落數在 10以內時，采用一位有效數字報告，菌落數在10-100之間時，采用兩位有效數字報告。5.4.2.2 菌落數大于或等于 100 時，前 3 位數字采用“四舍五入”原則修約后，取前 2 位數 字，后面用 0 代替位數來表示結果；也可用 10 的指數形式來表示，此時也按