1、、目的要求徒手切片法是觀察植物內部結構的簡易制片法。所需的儀器用具 簡單，藥品經濟，操作方便，費時較短，且易于保持材料的天然色澤和活體 結 構，必要時，也可經過脫水、染色制成永久制片而保存。但是徒手制片對于體積 過小，質地太軟或太硬的材料，則難于處理，同時，也 不能制成連續切片，這些 均為不足之處。 二 材料 用品 1 v用品 顯微鏡、剃頭刀（或刀片） 毛筆 鎘子培養皿 染色皿（或小酒 杯） 吸 管 載玻片 蓋玻片 吸水紙。1%番紅水溶液（或50%酒精溶液），0.5%固 綠95%酒精溶液，70%、85%、95%酒精，純酒精 二甲苯和中性樹膠或加 拿大樹膠等。 三 方法與步驟 1、選材 所用材料

2、不宜太軟或太硬。一般植物幼嫩的根莖或一些植物的葉片 葉柄等均可 使用此法。質地較薄的材料，如葉片，可沿主脈兩側切成寬約56毫米，長1 1.5厘米的小塊，夾在夾持物（如胡蘿卜根或馬鈴薯塊莖等）中進行切片。使 用夾持物時，先將夾持物的中央切成兩半，然后將切好的材料夾入，合攏夾持物 進行切片，也可將葉片卷成筒狀再切。 2、切片 （1）盛清潔的水于培養皿中。然后用左手的拇指及食指 中指夾住 材料，拇指的 位置要低于食指，并使材料的上端伸出指外23毫米，材料的切面必須保持水 平方向。 (2) 右手執刀(剃頭刀或刀片),平放在左手食指之上，刀口向內，自左前方向 右后方滑行切割，要用臂力，不要用腕力，不可向

3、內平切。 (3) 拉切的速度宜快，一次切下，不要中途停頓或似拉鋸式，以免損傷材料或 切得不平。 (4) 切片過程中，如發現由于用力不均而使材料表面傾斜時，必須立即削平。 (5) 刀片或剃刀必須鋒利，材料及切片均需經常沾水，以保持材料濕潤 潤滑。 (6) 切下的薄片可隨時涮入培養皿的水中，以備觀察；等切到相當數量后;再選擇 其中最薄的透明度最大的做成臨時玻片觀察。如想短期保存，可用水或甘油封 藏。如希望長期保存所切的材料，則還要經過以下幾個步驟做成永久玻片標本。 3、固定 挑選出符合要求的切片，用毛筆移入盛有70%酒精的染色皿中進行固定。固定 時間為16分鐘或更長時間。 4、染色、脫水、透明 用

4、吸水管吸去70%酒精，染以1%番紅(50%酒精溶液)約30分鐘。 (2)再用吸管吸去番紅，換用70%-85%-95%酒精進行沖洗、脫水，每級酒精 35分鐘。(3)復染色。吸去酒精，用 0.5%固綠(95%酒精溶液)進行復染色，時間為0.5分鐘。 (4) 沖洗、脫水。用95%酒精沖洗1次，時間10秒。后移入純酒精中脫水 2- 3次，每次3- 5分鐘。 （5）透明。吸去純酒精，放入1/2二甲苯一1/2純酒精溶液中脫水和 透明1 次，時間5分鐘。 （6）吸去脫水透明液，換以純二甲苯透明2次，時間5分鐘。 5、封片、貼標簽 將已透明材料用鑲子或解剖針輕挑于清潔的載玻片上，滴上中性樹膠，蓋上蓋 玻片進行

5、干燥。 在已封好的切片左邊貼上標簽，注明材料名稱、制作日期和制作者姓名等項, 以便查考。 較好的切片,其木質化的細胞壁和細胞核可染成紅色,細胞質和纖維素的壁則 常被染成綠色，紅綠相襯，有利于觀察、分辨植物體的內部結構 現將徒手切片 制片的簡要步驟歸納如下 選材-切片-固定（70%酉精廠1%番紅（50%酉精溶 液）染色-70%酉精 沖洗-脫水（85%酒精、95%酒精）-05%固綠（95%酒精 溶液：）復染色-沖洗（95%酒精1次）-進一步脫水（純酒精23次）-透明 （1/2純酒 精十1/2 -甲苯及純二甲苯各二次）-封片（中性樹膠）-貼標 簽。 附：藥品的簡單配方 （1） 1%番紅：于蒸f留水或

6、50%酉精100毫升中溶入番紅粉末I克，過 濾后使用。 （2） 0.5%固綠：95%酉精100毫升中加入固綠粉末0.5克。 徒手切片方法的改進徒手切片技術運用在植物學實驗教學中的歷史較為悠久，在 石蠟切 片之前，基本上使用徒手切片。它的優點在于可以觀察新鮮材料組織 和 細胞的天然色彩，看到活體細胞結構狀態，所以徒手切片運用在植 物學實驗教學 中比較普遍。為了克服傳統徒手切片技術中的不足，我們進行了改進，改為皮套 加刀片。這種切片方法切片速度快，軟硬質材料都可以切，不需要任何夾物，既 經濟適用，又簡單易行。 1材料用品 雙面刀片1個，直徑11.5 cm的乳膠管，毛筆 培養皿 載玻片、蓋玻片、 吸

7、水紙，質量分數1%的中性紅染液或紅墨水，新鮮的植物根、 莖葉 花藥和子房等。 2切法 將直徑1 -1.5 cm的乳膠管剪成3.5 cm長的一段，用剪子從中間剖 開扣在右手 的大拇指上，注意皮套一定要高于拇指，把要切的植物材料，緊貼在皮套的外 側。如果是葉可以把它卷緊,所切的材料不可過 長，大約2-2.5 cm即可。此 時用食指與中指和拇指一起把材料捏住，幼嫩的材料捏時不可用力過猛，以免損 壞組織細胞。右手的拇指和食指捏住雙面刀片的一側，手腕端平，把刀片的前端 與要切的材料保持垂直相接狀態，先切平材料，然后用腕力向內連續切片，刀片 只要搭住材料就可以垂直切片。 另外還可以用同樣的方法將雙面刀片的先端與材料搭住 垂直、從右向左推切， 如此連續切下去，然后用毛筆將切得薄而透明的材料刷入 培養皿的水中，避免干 燥。 3染色、封片 把載玻片和蓋玻片用紗布擦拭干凈，放在實驗臺上，加上1滴中性紅染液或紅 墨水，用毛筆在培養皿中選擇薄而透明切片沾到染色液上用解剖針輕輕撥入染色 液中，大約30 s后，吸去染色液，加1滴清水封片。為了防止氣泡的產生，用 左手拇指與食指拿住蓋玻片的兩側使蓋玻片的基部與滴液先接觸，右手握解剖針 挑著蓋玻片從左向右徐徐放下蓋玻片，使氣體從一側排出，如果有多余的水溢 出，可用吸 水紙吸干，再進行下一步的鏡下觀察 4鏡檢