ICS65.020.20DB12B04天津市地方標準DB12/T885—2019植物提取物中原花青素的測定紫外/可見分光光度法DeterminationofpolysaccharideinLilyBulbus-UV/VISspectrophotometry天津市市場監督管理委員會發布DB12/T885—2019前言本標準依據GB/T1.1-2009給出的規則起草。本標準由天津市農業科學院提出并歸口。本標準起草單位：天津市農業質量標準與檢測技術研究所。本標準主要起草人：劉征輝、趙琳琳、魏靜娜、張強、趙云平、薛天凱、徐石勇、鄭貴忠。IDB12/T885—2019植物提取物中原花青素的測定紫外/可見分光光度法1范圍本標準規定了采用紫外/可見分光光度法測定植物提取物中原花青素含量的原理、試劑材料、儀器設備、分析步驟、分析結果表述和精密度。本標準適用于植物提取物中原花青素的測定。2規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法。3原理原花青素本身無色，但經過用熱酸處理后，可以生成深紅色的花青素離子，用分光光度法測定原花4正丁醇(CH3(CH2)2CH2OH)。鹽酸(HCL)：純度為35%～37%（g/g）。硫酸鐵銨(NH4Fe(SO4)2·12H2O)。水（H2O）：GB/T6682規定的一級水。注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純。鹽酸-正丁醇溶液：取正丁醇50mL，于100mL容量瓶中，準確量取鹽酸5mL，用正丁醇定容，搖勻，備用。4.2.22mol/L鹽酸溶液：準確量取鹽酸20mL于燒杯中，加100mL水，搖勻，備用。硫酸鐵銨溶液：稱取硫酸鐵銨2.0g于三角瓶中，加2mol/L鹽酸溶液，放置于沸水浴中，至其全1DB12/T885—20194.4標準溶液配制4.4.1原花青素標準儲備液（1.0mg/mL）：取原花青素標準品10mg，精密稱定，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，即得濃度為1.0mg/mL標準儲備液，溶液現用現配。4.4.2原花青素標準系列工作液：準確量取原花青素儲備液0.0mL、0.10mL、0.25mL、0.50mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL分別置于10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，的濃度為0μg/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、250μg/mL的標準系列工作溶液。5儀器和設備5.15.25.35.45.55.65.7紫外分光光度計，配1cm比色杯，波長范圍(110～900)nm。超聲波提取機。渦旋混合儀。天平：感量0.01mg。具蓋安瓿瓶：10mL。封口鉗。容量瓶：10mL、50mL、100mL。6分析步驟取樣品(10～100)mg，精密稱定，置50mL容量瓶中，加入30mL甲醇，超聲處理（功率250W，頻率50kHz）20min，放至室溫后，加甲醇至刻度，搖勻，離心或放至澄清后取上清液作為供試品溶液。如樣品原花青素含量較高，再精密量取上清液10mL，置100mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。準確吸取原花青素標準系列工作液各1mL，置于安瓿瓶中，精密加入鹽酸-正丁醇溶液（4.2.1）6mL，硫酸鐵銨溶液（4.2.3）0.2mL，混勻，用封口鉗將其密封，置沸水中加熱40min后，取出，立即置冰水中冷卻至室溫，于546nm波長處測吸光度，顯色在1小時內穩定。精密吸取6.1項下的供試品溶液1mL，置于安瓿瓶中，然后按照標準曲線制作步驟執行。以相應試72DB12/T885—2019cVV21000XmV10001000100..............................(1)1式中：X——試樣中原花青素的含量，單位為克每100克（g/100g）；c——反應混合物中原花青素的量，單位為微克每毫升（μg/mL）；V——待測樣液總體積，單位為毫升（mL）；V1——樣液反應體積，單位為毫升（mL）；V2——樣液反應后總體體積，單位為毫升（mL）；m——樣液所代表的試樣質量，單位為毫克（mg）以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值