實驗專題特訓二DNA片段的擴增及電泳鑒定(時間：20分鐘)1.下列關于DNA片段的擴增及電泳鑒定步驟的說法，錯誤的是()A.PCR過程中，需要加入兩種引物B.所有組分加入微量離心管后，需要放入離心機離心約10sC.將電泳緩沖液加入電泳槽中，電泳緩沖液沒過凝膠1mm為宜D.電泳出現位置不等的幾條條帶，說明鑒定的PCR產物比較純凈答案D解析電泳出現位置不等的幾條條帶，說明存在長短不一的DNA片段，鑒定的PCR產物不純凈，D錯誤。2.(2023·安徽合肥高三模擬)PCR擴增時需考慮高質量的基因組DNA模板以及反應體系中各種組分的優化組合，下列相關敘述錯誤的是()A.反應體系中模板DNA的量和純度影響PCR的成功與否B.設計引物時需考慮引物的長度、堿基序列和G—C含量C.TaqDNA聚合酶的濃度過低會引起非特異性擴增產物的增多D.目標DNA的獲得取決于引物在模板DNA上的結合位置答案C解析PCR體外擴增需要DNA做模板，所以反應體系中模板DNA的量和純度會影響PCR的成功與否，A正確；設計引物時需考慮引物的長度、堿基序列和G—C含量，以保證引物能與目的基因的特定序列識別，且不能出現引物內部或引物之間的堿基互補配對，B正確；TaqDNA聚合酶的濃度過低，則擴增效率較低，擴增產物減少，若引物過短，非特異性擴增產物增多，C錯誤；由于PCR擴增需要在引物的下游延伸子鏈，所以DNA聚合酶只能特異性地催化復制處于兩個引物之間的DNA序列，即目標DNA的獲得取決于引物在模板DNA上的結合位置，D正確。3.(2023·山西運城期末改編)下列關于PCR操作過程的敘述錯誤的是()A.PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須進行高壓滅菌處理B.瓊脂糖溶液中加入的核酸染料利于DNA在300nm紫外燈下被檢測C.將PCR所用的緩沖液和酶從冰箱拿出后，放在高溫環境中迅速融化，以減少酶活性的喪失D.在微量離心管中添加反應成分時，每吸取一種試劑后，移液器上的槍頭都必須更換答案C解析為避免外源DNA等因素的污染，PCR反應中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須進行高壓滅菌處理，A正確；凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長為300nm的紫外燈下被檢測出來，B正確；PCR所用緩沖液和酶從冰箱拿出之后，應放在冰塊上緩慢融化，這樣才能不破壞緩沖液中穩定性較差的成分，同時保護酶的活性不被破壞，C錯誤；微量離心管中添加反應成分時，每吸取一種試劑后，移液器上的槍頭都必須更換，以免其他成分污染，D正確。4.熒光定量PCR技術可定量檢測樣本中某種DNA含量。其原理是在PCR體系中每加入一對引物的同時加入一個與某條模板鏈互補的熒光探針(探針是指以放射性同位素、生物素或熒光染料等進行標記的已知核苷酸序列的核酸片段)，當TaqDNA聚合酶催化子鏈延伸至探針處，會水解探針，使熒光監測系統接收到熒光信號，即每擴增一次，就有一個熒光分子生成。下列相關敘述錯誤的是()A.引物與探針均具特異性，與模板結合時遵循堿基互補配對原則B.反應最終的熒光強度與起始狀態模板DNA含量呈正相關C.若用cDNA(部分基因文庫)作模板，上述技術也可檢測某基因的轉錄水平D.TaqDNA聚合酶催化DNA的合成方向總是從子鏈的3′端向5′端答案D解析引物與探針的本質都是核苷酸序列，二者均具特異性，與模板結合時遵循堿基互補配對原則，A正確；題干中指出“每加入一對引物的同時加入一個與某條模板鏈互補的熒光探針”，并且“每擴增一次，就有一個熒光分子生成”，因此反應最終的熒光強度與起始狀態模板DNA含量呈正相關，B正確；由于cDNA是以某基因轉錄形成的mRNA為模板逆轉錄形成的，能反映細胞轉錄的基因種類和水平，所以若用cDNA作模板，題述技術也可檢測某基因的轉錄水平，C正確；由題圖可知，TaqDNA聚合酶催化DNA的合成方向總是從子鏈的5′端向3′端，D錯誤。5.(2023·吉林長春外國語學校期中)水稻根部一般沒有根瘤菌，在種植時常需要施加氮肥?？茖W家想利用基因工程技術將相關基因導入水稻細胞中，建立水稻“小型化肥廠”，讓水稻直接固氮，減少使用氮肥的成本以及可能造成的環境污染。下列相關敘述錯誤的是()A.PCR技術可用于固氮基因的獲取和檢測B.為了提高PCR擴增固氮基因的特異性，可適當降低復性溫度C.PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進行高壓滅菌處理D.實驗中需將轉基因水稻種植在缺氮培養液中進行篩選答案B解析PCR技術可對DNA分子進行擴增，故用PCR技術可獲取固氮基因，也可用于固氮基因檢測，A正確；當復性溫度提高時，只有與模板堿基匹配程度較高的引物才能結合到模板上，因此為了提高PCR擴增固氮基因的特異性，可適當提高復性溫度，B錯誤；為避免外源DNA等因素的污染，PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進行高壓滅菌處理，C正確；具有固氮基因的水稻根系微生物能利用空氣中的氮氣，故培養時不需要加入氮源，即實驗中需將轉基因水稻種植在缺氮培養液中進行篩選，D正確。6.(多選)為優化目的基因(700bp)的PCR條件，研究者設計不同的復性溫度進行實驗，產物的瓊脂糖凝膠電泳結果如圖所示。據圖分析，下列表述正確的是()A.對照組可用無菌蒸餾水代替模板，其他成分相同B.電泳條帶的寬度、亮度與擴增產物大小呈正相關C.復性溫度的高低會影響PCR擴增產物的純度D.58℃是本實驗中擴增該基因的最佳復性溫度答案ACD解析實驗設計應遵循對照原則與單一變量原則，故對照組可用無菌蒸餾水代替模板，其他成分相同，A正確；PCR技術中，反應最終的電泳條帶的寬度、亮度與PCR起始狀態的模板DNA(或者模板)含量呈正相關，