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2301黑龍江省哈爾濱市地方標準DB2301/T212—2024越桔組織培養技術規程2024-12-30發布 2025-02-05實施哈爾濱市市場監督管理局??發布DB2301/T212DB2301/T212—2024PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前言 II范圍 1規范性引用文件 1術語和定義 1外植體的采集與消毒 1外植體采集 1外植體的消毒 1培養基制備 1培養基配比 1培養基滅菌 2培養基保存 2培養程序 2初代培養 2繼代培養 2生根培養 2煉苗與移栽 3煉苗 3移栽 3出圃 3生產檔案 3前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由哈爾濱市農業農村局提出并歸口。本文件主要起草人：趙文博、段亞東、孫嬡麗、李靖彤、張鹍、宋鵬慧、周春薇、周雙、毛俊瑩、劉爭、侯帥、溫智鈞、梁海婷、許志偉、肖珩、呂德寶、郝淑榮、張甜甜。DB2301/T212DB2301/T212—2024PAGEPAGE1越桔組織培養技術規程范圍本文件規定了越桔組織培養育苗技術的外植體的采集與消毒、培養基制備、培養程序、煉苗與移栽、出圃和生產檔案等。本文件適用于越桔的組織培養育苗。規范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB/T8321（所有部分）農藥合理使用準則LY/T1882—2010林木組織培養育苗技術規程NY/T1276農藥安全使用規范總則術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。外植體的采集與消毒外植體采集4月～71mm～2mm葉柄作為外植體。外植體的消毒110min～20min。757530s，無菌330s。1010min330s。用無菌濾紙吸干外植體表面的水分備用。GB/T8321NY/T1276培養基制備培養基配比基礎培養基基礎培養基為WPM，基礎培養基配制方法按LY/T1882中4.2.1規定執行。初代培養基初代培養基按WPM1LZT2.0mg～4.0mg30g7g進行配置，pH5.2～5.4。繼代培養基繼代培養基按WPM1LIBA0.1mg～0.2mgZT2.0mg～4.0mg30g7g進行配置，pH5.2～5.4。生根培養基生根培養基按WPM1LIBA3.0mg～4.0mgNAA0.4mg60g14g進行配置，pH培養基滅菌培養基在壓力0.105MPa、溫度12120min。滅菌物應不超過滅菌鍋容積的3/4。培養基保存滅菌后的培養基放入接種室，應避免陽光直射，在18～227d。培養程序初代培養在超凈工作臺上將已消毒的外植體莖段垂直插入初代培養基，每個培養瓶接種3～5s～2s，迅速蓋好瓶蓋，放入培養室培養。培養條件白天252157d后，轉入光照培養。相對空氣濕度70～80Lux～3000Lux，光照時間為12h/d～16h/d。待嫩芽長出后，進行繼代培養。繼代培養將初代培養后長出的嫩莖剪成1cm左右的莖段，插入新鮮的增殖培養基中進行繼代培養。培養條件白天2521570～802000Lux～3000Lux，光照時間為12h/d～16h/d。生根培養選取由繼代培養獲得的生長健壯、高度大于2cm的無菌不定芽接入生根培養基上進行生根培養。培養條件繼續按6.2.2的要求培養。待生根后2周～3周，選取根長1.5cm～2.5cm、須根不少于3條的瓶苗，將其放置溫室進行煉苗。煉苗與移栽煉苗20～303d2d，煉苗期間避免強光直射和高溫灼傷瓶苗。移栽基質配置1:1GB/T8321和NY/T1276的規定。移栽方法將組培苗從瓶中取出，用流水沖洗掉粘