考點二克隆技術再悟高考1．推斷正誤(1)組織培育、細胞雜交、顯微注射、核移植均為培育草莓脫毒苗所接受的技術(2022·廣東，2改編) (×)提示只有組織培育為培育脫毒苗接受的技術。(2)動物雜交瘤細胞產生單克隆抗體體現了細胞的全能性(2022·江蘇，22C)(×)提示推斷是否體現細胞全能性的依據是能否發育成新個體。(3)去除植物細胞的細胞壁和將動物組織分散成單個細胞均需酶處理(2008·全國Ⅰ，5B) (√)提示前者用纖維素酶和果膠酶處理；后者用胰蛋白酶處理。2．(2021·重慶卷，2)如圖是單克隆抗體制備流程的簡明示意圖。下列有關敘述正確的是 ()。A．①是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的效應T淋巴細胞B．②中使用胰蛋白酶有利于雜交瘤細胞的形成C．③同時具有脾臟細胞和鼠骨髓瘤細胞的特性D．④是經篩選培育獲得的能分泌特異性抗體的細胞群解析①是獲得的已經免疫的B淋巴細胞，A項錯誤；胰蛋白酶使得組織塊分散為單個細胞，B項錯誤；③同時具有B淋巴細胞和骨髓瘤細胞的特性，C項錯誤；④是經篩選后獲得的能夠分泌特異性抗體的雜交瘤細胞，D項正確。答案D3．(2022·福建卷，33)Rag2基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞。科研人員利用胚胎干細胞(ES細胞)對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療。其技術流程如圖：(1)步驟①中，在核移植前應去除卵母細胞的________。(2)步驟②中，重組胚胎培育到________期時，可從其內細胞團分別出ES細胞。(3)步驟③中，需要構建含有Rag2基因的表達載體。可以依據Rag2基因的________設計引物，利用PCR技術擴增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有________________酶的酶切位點。(4)為檢測Rag2基因的表達狀況，可提取治療后小鼠骨髓細胞的________，用抗Rag2蛋白的抗體進行雜交試驗。解析(1)核移植過程中，體細胞核移植前要除去受體卵母細胞的細胞核，若不去掉卵母細胞的細胞核，細胞里面就有兩個細胞核，造成遺傳物質不能穩定表達。(2)囊胚期細胞開頭消滅分化，分化為滋養層細胞和內細胞團細胞，其中后者具有發育的全能性，屬于ES細胞。(3)步驟③過程是將目的基因導入受體細胞(ES細胞)中，導入之前應構建基因表達載體。在生物體外可通過PCR技術擴增目的基因，其條件是模板DNA、依據Rag2基因的核苷酸序列設計的引物、四種脫氧核苷酸、熱穩定DNA聚合酶等，另據題干可知，獲得Rag2目的基因需要用HindⅢ和PstⅠ兩種限制酶，所選擇的載體上應具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點，以便目的基因和載體能夠連接在一起。(4)檢測目的基因是否翻譯出相應蛋白質時，應接受抗原—抗體雜交技術，即提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原－抗體雜交，看是否有雜交帶。答案(1)細胞核(2)囊胚(3)核苷酸序列HindⅢ和PstⅠ(4)蛋白質創新猜測4．(2022·南通二模)下圖是通過植物細胞工程技術獲得紫杉醇的途徑，相關敘述正確的是 ()。A．該途徑依據的原理是植物細胞具有全能性B．①過程中需把握好培育基中植物激素的比例C．②過程需用肯定濃度的胰蛋白酶處理愈傷組織D．③過程需使用固體培育基，有利于細胞增殖解析本工程不以生產完整植株為目的，只得到愈傷組織細胞，不滿足全能性特點，A錯誤；①過程為脫分化過程，需把握好培育基中植物激素的比例，B正確；動物細胞工程才需用肯定濃度的胰蛋白酶處理組織，C錯誤；本試驗需要利用細胞來生產產品，應使用液體培育基，便利添加養分物質和取出代謝產物，D錯誤。答案B5．(2022·山東《考試大綱》調研卷)模型是對爭辯對象進行的概括性描述，下圖為表示細胞融合的過程模型，請據圖回答：(1)若該圖表示植物細胞融合的過程，丁細胞稱為__________。欲將丁細胞培育成植株，可選用________技術，這一過程的核心就是______和______兩個階段。(2)若該圖表示動物細胞融合的過程，丁細胞稱為__________。過程①區分于植物細胞常用的誘導因素是__________。動物細胞培育時，合成培育基中除必要的養分外，通常需要加入__________等一些自然?成分。(3)若該圖表示制備單克隆抗體的部分過程，經過選擇性培育的丁細胞稱為____________。丁細胞的特點是______________________________________。解析(1)植物細胞融合獲得的細胞稱為雜種細胞。需要利用植物組織培育技術將雜種細胞培育成植株，這一培育過程的核心步驟就是脫分化和再分化。(2)動物細胞融合獲得的細胞稱為雜交細胞。過程①誘導融合區分于植物細胞常用的誘導因素是滅活的病毒。動物細胞培育時，合成培育基中除必要的養分外，通常需要加入血清和血漿等一些自然?成分。(3)制備單克隆抗體的過程中，經過選擇性培育的丁細胞稱為雜交瘤細胞，丁細胞的特點是既能快速大量繁殖，又能產生專一的抗體。答案(1)雜種細胞植物組織培育脫分化再分化(2)雜交細胞滅活的病毒血清和血漿(3)雜交瘤細胞既能快速大量繁殖，又能產生專一的抗體6．利用現代生物工程技術可以使哺乳動物本身變成“批量生產藥物的工廠”。如圖是利用奶牛乳腺生產人血清白蛋白的圖解，請回答下列問題：(1)在上述過程中，常用______________酶將奶牛組織分散成單個細胞。在體外培育分散的動物細胞時，所需氣體主要有______________。(2)在上述過程中，常借助基因表達載體將人血清白蛋白基因導入奶牛受體細胞中，構建基因表達載體需要的酶有______________________；將人血清白蛋白基因導入奶牛受體細胞最常用的方法是_________________________。(3)在上述過程中，用于核移植的去核卵細胞一般處于______期。動物體細胞經核移植可獲得完整動物個體體現了______________________具有全能性。(4)圖中M應當包括早期胚胎培育、胚胎移植等過程。在培育奶牛早期胚胎的過程中，所用培育液成分除一些無機鹽和有機鹽類外，還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等養分成分以及____________等物質。胚胎移植在胚胎工程中的意義在于________________________________。解析(1)在動物細胞工程中，常用胰蛋白酶或膠原蛋白酶將動物組織分散成單個細胞。在培育動物細胞過程中，O2是細胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培育液的pH。(2)在基因工程中，構建基因表達載體常用的兩種工具酶是限制酶和DNA連接酶。將目的基因導入動物細胞最常用的方法是顯微注射法。(3)在核移植過程中，作為受體細胞的去核卵細胞一般處于減數其次次分裂中期。動物體細胞經核移植可獲得完整動物個體體現了動物體細胞核具有全能性。(4)哺乳動物胚胎培育需要“兩鹽”(無機鹽和有機鹽)、“兩素”(激素和維生素)、“兩酸”(核苷酸和氨基酸)和動物血清等。答案(1)胰蛋白酶(膠原蛋白)O2和CO2(2)限制酶和DNA連接酶顯微注射法(3)MⅡ中(減數其次次分裂中)動物體細胞核(4)動物血清提高優良母畜的繁