ICS67.160.01CCSX50解酒護(hù)肝飲品制備方法Methodforthepreparationofantioxidantandliver-protectingdrinkT/UNP179—2024I前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 4原輔料 4.1原料 4.2化學(xué)試劑 6制備流程 26.1清洗消毒 26.2醇溶蛋白提取 26.3溶液配制 26.4自組裝 2T/UNP179—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由北京中科先新中藥研究院提出。本文件由中國(guó)聯(lián)合國(guó)采購(gòu)促進(jìn)會(huì)歸口。本文件起草單位：北京中科先新中藥研究院、安徽中科先新生態(tài)科技有限公司、安徽修養(yǎng)正本健康科技有限公司。本文件主要起草人：周海濤、周百永、胡蕓蕓。T/UNP179—20241解酒護(hù)肝飲品制備方法本文件規(guī)定了解酒護(hù)肝飲品制備的原輔料、設(shè)備、制備流程。本文件適用于解酒護(hù)肝飲品的制備。2規(guī)范性引用文件本文件沒(méi)有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原輔料4.1原料制備解酒護(hù)肝飲品所需的原料包括：a)高粱白面粉；e)脫膠海帶粉；f)堿性蛋白酶。4.2化學(xué)試劑制備解酒護(hù)肝飲品所需的化學(xué)試劑包括：b)偏亞硫酸氫鈉；g)磷酸二氫鉀；h)磷酸鹽緩沖液；i)醇溶蛋白溶液。5設(shè)備制備解酒護(hù)肝飲品所需的設(shè)備包括：a)燒瓶；d)水浴震蕩處理器；f)高速剪切分散儀；T/UNP179—20242h)超濾管；i)磁性攪拌器；j)分光光度計(jì)。6制備流程6.1清洗消毒制備前，應(yīng)對(duì)使用的器具內(nèi)外表面進(jìn)行徹底清洗消毒，保證所有器具無(wú)殘留料垢、污物等。6.2醇溶蛋白提取6.2.1脫脂和初提取處理在濕度低于30%的環(huán)境中，稱取高粱白面粉20g，加入至2L75%的乙醇水溶液，充分混合后，向溶液中加入0.5g偏亞硫酸氫鈉和0.348g冰乙酸，于70℃水浴震蕩處理1h，將處理液于2000rmp離心處理10min，上清溶液濃縮，冷凍干燥后，得到凍干粉12.3g。將12.3g凍干粉充分分散于50mL六已烷中，攪拌充分混合后，揮干溶劑，對(duì)凍干粉進(jìn)行脫脂多次洗滌，即可得到脫脂的粗品。6.2.2酶解將11.6g粗品分散在350ml去離子水中，制得粗品懸浮液，用1M氫氧化鈉將其pH調(diào)整至8.3，分別加入0.333g堿性蛋白酶，最終酶底物比為0.8Au/g。將燒瓶用橡膠塞密封，并轉(zhuǎn)移到50℃水浴搖瓶。將上述反應(yīng)體系先于沸水浴中處理20min，再于常溫孵育11h冷卻后，用1M鹽酸或1M氫氧化鈉調(diào)整溶液至pH7.0，4℃離心25min，收集上清液，凍干處理，-4℃保存至進(jìn)一步分析，得到酶解上清液。6.2.3超濾處理使用超濾杯進(jìn)行超濾，分子量截止為10kD。將超濾管的濾膜在去離子水中浸泡24h，期間更換去離子水至少3次，去除預(yù)處理后的甘油殘基殘留物。將濾膜裝載后，向超濾管中加入酶解上清液，攪拌單元以60rpm的速度放置在磁性攪拌器上，壓縮氮?dú)庖宰畲?0psi的壓力連接到攪拌單元，進(jìn)行超濾處理，收集超濾液，冷凍干燥，得到超濾凍干粉。6.2.4凝膠色譜純化取超濾凍干粉250mg溶解在于15mL去離子水中，并上樣至預(yù)平衡后的凝膠純化柱，上樣完成后，用去離子水洗脫10倍柱體積的去離子水洗脫，收集洗脫液，用分光光度計(jì)的吸光度測(cè)定收集的等分的洗脫光譜。將組成主要峰的洗脫液組分組合成幾個(gè)組分，得到醇溶蛋白的最終凍干粉。6.3溶液配制6.3.1磷酸鹽緩沖液取磷酸二氫鉀0.68g，加0.1mo1/L氫氧化鈉溶液29.1m1，用水稀釋至100m1。6.3.2含有護(hù)肝成分的溶液準(zhǔn)確稱取橙皮粉40g、楊梅果粉80g、人參粉15g和脫膠海帶粉30g充分混合后，溶解于1L95%的乙醇溶液中，于1500rmp4℃離心，取上清液即為含有護(hù)肝成分的溶液。6.3.3醇溶蛋白溶液稱取2.5g凍干粉，充分溶解于50mL70%的乙醇溶液中。6.4自組裝T/UNP179—20243取50mL磷酸鹽緩沖液，利用高速剪切分散儀在15000rpm的轉(zhuǎn)速下進(jìn)行剪切