第1頁共7頁培養(yǎng)基質(zhì)量控制規(guī)程1.目的規(guī)范本中心微生物實驗室培養(yǎng)基的內(nèi)部質(zhì)量控制工作。2.范圍適用于實驗室微生物培養(yǎng)基使用前的質(zhì)量驗收、使用過程中的質(zhì)量控制。3.職責3.1檢驗人員：按照本規(guī)程規(guī)對培養(yǎng)基使用前及使用過程中進行質(zhì)量控制，確保培養(yǎng)基符合相關(guān)標準的要求。3.2科室負責人：負責指導(dǎo)、監(jiān)督檢驗人員對培養(yǎng)基進行質(zhì)量控制。4.程序4.1培養(yǎng)基采購微生物科制訂采購計劃，經(jīng)批準后選定合格的供應(yīng)商，培養(yǎng)基的采購執(zhí)行《服務(wù)和供應(yīng)品的采購程序》4.2培養(yǎng)基接收4.2.1生產(chǎn)企業(yè)提供的材料培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家隨產(chǎn)品應(yīng)提供下列文件（電子版也可）：培養(yǎng)基、獨立成分、添加成分名稱；產(chǎn)品編號；最終pH；儲藏信息和有效期；標準要求及質(zhì)控報告；必要的安全和（或）危害數(shù)據(jù)（SDS）。4.2.2驗收實驗室接收到培養(yǎng)基之后應(yīng)檢查培養(yǎng)基的名稱和批號、接收日期、有效期、包裝的完整性，填寫《培養(yǎng)基實驗室驗收記錄表》。4.3貯存4.3.1概述應(yīng)嚴格按照供應(yīng)商提供的貯存條件、有效期和使用方法進行培養(yǎng)基的保存和使用。4.3.2脫水合成培養(yǎng)基及其添加成分的質(zhì)量管理和質(zhì)量控制新購培養(yǎng)基及添加成分保存在密閉容器中，培養(yǎng)基的購買應(yīng)有計劃，掌握先購先用原則，實驗室應(yīng)保存有效的培養(yǎng)基目錄清單，包括以下內(nèi)容：容器密閉性復(fù)查、首次開封日期、內(nèi)容物的感官檢查，記錄《培養(yǎng)基目錄清單》。對于新開封的脫水培養(yǎng)基，應(yīng)對其質(zhì)量進行檢查。通過粉末的流動性、均勻性、結(jié)塊情況和色澤變化判斷脫水培養(yǎng)基的質(zhì)量變化。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基受潮或物理性狀發(fā)生明顯改變不應(yīng)再使用。4.3.3商品化即用型培養(yǎng)基應(yīng)嚴格按照供應(yīng)商提供的貯存條件、有效期和使用方法進行保存和使用。4.3.4實驗室自制的培養(yǎng)基在保證其成分不會改變條件下保存，即避光、干燥保存。必要時在5℃+3℃冰箱中保存，通常建議平板不超過2周-4周，瓶裝和試管裝培養(yǎng)基不超過3個月-6個月，除非某些標準或者實驗結(jié)果表明保質(zhì)期比上述的更長。不穩(wěn)定的選擇性物質(zhì)和其他添加成分應(yīng)即配即用，對發(fā)生化學(xué)反應(yīng)或含有不穩(wěn)定成分的固體培養(yǎng)基也應(yīng)即配即用，不可二次融化。觀察培養(yǎng)基顏色變化，是否有蒸發(fā)/脫水情況，是否有微生物生長。當培養(yǎng)基發(fā)生這類變化時應(yīng)禁止使用。使用和進一步加熱前，應(yīng)事先將培養(yǎng)基平衡至室溫。4.4培養(yǎng)基的實驗室制備4.4.1概述使用脫水培養(yǎng)基和其他含有有害物質(zhì)（如膽鹽或其他選擇劑）的成分時，應(yīng)遵守良好實驗室規(guī)范和生產(chǎn)廠商提供的使用說明。使用脫水商品化合成培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時，應(yīng)嚴格按照廠商提供的使用說明配置。如質(zhì)量/體積、pH、制備條件、滅菌條件和操作步驟等。并形成完整的培養(yǎng)基配制記錄，填寫《商品化脫水合成培養(yǎng)基制備記錄》。4.4.2配制用水執(zhí)行GB4789.28，并定期填寫《微生物實驗用水記錄表》。4.4.3稱量和復(fù)水稱量所需量的脫水培養(yǎng)基，必要時佩戴口罩或通風(fēng)櫥中操作，先加入少量水，充分混合，再加水至所需的量。4.4.4溶解和分裝脫水培養(yǎng)基加水后適當加熱，攪拌溶解，含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱前應(yīng)先浸泡幾分鐘。用個別成分制備的培養(yǎng)基應(yīng)將不同成分分別加入適量水中，并充分溶解然后再加水至所需的量。4.4.5pH的測定和調(diào)整用pH計測pH必要時調(diào)整，除特殊說明培養(yǎng)基滅菌后冷卻到25℃時pH變化不應(yīng)超過0.2個單位。4.4.6分裝將配置好的培養(yǎng)基分裝到適當?shù)娜萜髦?，容器的體積應(yīng)比培養(yǎng)基體積最少大20%。4.4.7滅菌4.4.7.1培養(yǎng)基和試劑應(yīng)采用濕熱滅菌或過濾滅菌。某些特定的培養(yǎng)基中含有對光和熱敏感的物質(zhì)，只能煮沸滅菌，煮沸后迅速冷卻，避光保存；有些試劑則不需滅菌，可直接使用（參見相關(guān)標準或供應(yīng)商使用說明）。所用滅菌設(shè)備應(yīng)周期性的對滅菌效果進行性能測試并予以評價，對測試的結(jié)果應(yīng)形成記錄。填寫《滅菌效果檢測記錄（濕熱）》。4.4.7.2濕熱滅菌濕熱滅菌在高壓鍋或制備培養(yǎng)基的容器中進行，高壓滅菌一般采用121℃±3℃滅菌15min，具體培養(yǎng)基按食品微生物學(xué)檢驗標準中的規(guī)定進行滅菌。當培養(yǎng)基體積超過1000mL時，要對滅菌條件進行適當?shù)恼{(diào)整，但應(yīng)當按照標準或使用說明的規(guī)定進行。注：大容量（>1000mL）的培養(yǎng)基滅菌時可能會造成過度加熱。滅菌效果的控制是關(guān)鍵。加熱后采用適當?shù)姆椒ɡ鋮s，以防加熱過度。這對腸道菌培養(yǎng)基和大容器中的培養(yǎng)基等的滅菌十分重要。4.4.7.3過濾滅菌過濾滅菌可在真空或加壓的條件下進行。使用孔徑為0.2μm的無菌設(shè)備和濾膜。過濾前先將濾膜和濾墊滅菌。過濾器于121℃滅菌15min（可以整體滅菌也可以拆卸后滅菌），滅菌后在無菌條件下進行組裝。注：一些濾膜上附著有蛋白質(zhì)（如抗生素）。為達到有效過濾，應(yīng)事先將濾膜用無菌水潤濕。4.4.7.4檢查應(yīng)對經(jīng)濕熱或過濾滅菌的培養(yǎng)基進行監(jiān)測，尤其要對pH、色澤、滅菌效果和均勻度等指標進行監(jiān)測。4.4.8添加成分的制備制備含有有毒物質(zhì)的添加成分（尤其是抗生素）時應(yīng)小心操作（必要時在通風(fēng)櫥中操作），避免因粉末的擴散造成實驗人員過敏或發(fā)生其他不良反應(yīng)；制備溶液時應(yīng)小心按產(chǎn)品使用說明操作；不要使用過期的試劑；抗生素工作溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配；批量配制的抗生素溶液分裝后冷凍貯存，但解凍后的貯存溶液不能再次冷凍；廠商應(yīng)提供對抗生素活性影響的有關(guān)資料，也可由使用者自行測定。4.5培養(yǎng)基的使用4.5.1瓊脂培養(yǎng)基的融化將培養(yǎng)基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法（如高壓鍋中的層流蒸汽）使之融化。經(jīng)過高壓的培養(yǎng)基應(yīng)盡量減少重加熱時間，融化后避免過度加熱。培養(yǎng)基融化后放入47℃±2℃的恒溫水浴鍋中冷卻保溫，直至使用。融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，放置時間一般不應(yīng)超過4h。未用完的培養(yǎng)基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培養(yǎng)基尤其注意，融化后保溫時間應(yīng)盡量縮短，如有特定要求可參考制定的標準。傾注到樣品中的培養(yǎng)基溫度應(yīng)控制在約45℃左右。4.5.2培養(yǎng)基的脫氧必要時，將培養(yǎng)基在使用前放到沸水浴或蒸氣浴中加熱15min，加熱時松開容器的蓋子，加熱后蓋緊，并迅速冷卻至使用溫度。4.5.3添加成分的加入對熱不穩(wěn)定的添加成分應(yīng)在培養(yǎng)基冷卻至47℃~50℃時再加入，無菌的添加成分在加入之前應(yīng)先放置到室溫，避免冷的液體造成瓊脂凝結(jié)或形成片狀物。將加入添加成分的培養(yǎng)基緩慢充分混勻，盡快分裝到待用的容器中。4.5.4平板的制備與儲存傾注融化的培養(yǎng)基到平皿中，使之在平皿中形成厚度至少3mm厚的瓊脂層（直徑90mm的平皿通常要加入18mL-20mL的瓊脂培養(yǎng)基）。將平皿蓋好皿蓋后放到水平平面使瓊脂冷卻凝固。如果平板需儲存，或者培養(yǎng)時間超過48h或培養(yǎng)溫度高于40℃，則需要傾注更多的培養(yǎng)基。在無菌室內(nèi)制備平板時應(yīng)防止培養(yǎng)基殘留無菌室（或超凈工作臺）內(nèi)，平板傾注結(jié)束后需對工作臺面經(jīng)行仔細擦拭，確保無污染可能。潔凈室應(yīng)周期性的進行無菌監(jiān)測，做出監(jiān)測計劃，對監(jiān)測結(jié)果進行評價，不符合要求時需制定有效改進方案，監(jiān)測過程應(yīng)形成監(jiān)測記錄。以保證潔凈室的能夠正常使用。記錄《潔凈室監(jiān)測計劃及記錄》。凝固后的培養(yǎng)基應(yīng)立即使用或存放于暗處和4℃-12℃的冰箱的密封袋中，最多存放一周或按供應(yīng)商提供的標準執(zhí)行。在平板底部做好標記，標記的內(nèi)容包括名稱、制備日期和有效期。也可以使用適宜的培養(yǎng)基編碼系統(tǒng)進行標記。將倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延長貯存期限。為了避免產(chǎn)生冷凝水，平板應(yīng)冷卻后再裝入袋中。貯存前不要對培養(yǎng)基表面進行干燥處理。對于采用表面接種形勢培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基，應(yīng)先對瓊脂表面進行干燥：揭開平皿蓋將平皿倒扣于烘箱/培養(yǎng)箱中（溫度設(shè)為25℃-50℃）；或放在有對流風(fēng)的無菌凈化臺中，直到培養(yǎng)基表面的水滴消失。注意不要過度干燥。商業(yè)化的平板瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)按照廠商提供的說明使用。4.5.5培養(yǎng)培養(yǎng)基的每垛最多堆放六個平板，平板間要留有空隙以保證空氣流通，使培養(yǎng)物的溫度盡快與培養(yǎng)箱溫度達到一致；液體培養(yǎng)基溫度與培養(yǎng)箱達到一致取決于很多因素，如體積、內(nèi)容物量、容器類型、培養(yǎng)類型等；使用厭氧罐時，堆放的平板數(shù)可以超過六個。4.6培養(yǎng)基的棄置所有污染和未使用的培養(yǎng)基的棄置應(yīng)采用安全的方式，并且要符合相關(guān)法律法規(guī)的規(guī)定。對于存在一定安全危害及可能有危害的培養(yǎng)物必須要進行無害化處理才能棄置，對于還有活體致病菌及疑似致病菌的可以采用濕熱蒸汽滅菌20min殺滅病原菌。處理有害廢棄物時應(yīng)形成相應(yīng)處理記錄，以確保不發(fā)生病源菌的流出。填寫《微生物廢棄物處理記錄》。5成品的質(zhì)量控制5.1理化指標控制培養(yǎng)基的理化指標測試至少包括：20℃-25℃的pH值；并觀察一下內(nèi)容：分裝的量和（或）厚度，瓊脂層的厚度、色澤、透明度和或是否存在肉眼可見的雜質(zhì)、凝膠穩(wěn)定性、粘稠度和濕度。5.2微生物指標控制5.2.1污染的控制按批量的不同選擇適量的培養(yǎng)基在適當?shù)臈l件下培養(yǎng)，測定其微生物污染。分別從初始和最終制備的培養(yǎng)基中抽取或制備至少一個（或1%）平板或試管，置于37℃培養(yǎng)18h或按特定標準中規(guī)定的溫度時間進行培養(yǎng)。本條款只適用于即用型培養(yǎng)基。5.2.2測試菌株測試菌株是具有其代表種的穩(wěn)定特性并能有效證明實驗室特定培養(yǎng)基最佳性能的一套菌株。測試菌株主要購置于標準菌株保藏中心，也可以是實驗室自己分離的具有良好特性的菌株。實驗室應(yīng)檢測和記錄標準儲備菌株的特性；新復(fù)蘇的菌株可能會有特異性反應(yīng)，使用時應(yīng)引起注意；最好使用從食品或水中分離的菌株。對不含指示劑或選擇劑的培養(yǎng)基，只需采用一株陽性菌株進行測試；對含有指示劑或選擇劑的培養(yǎng)基，應(yīng)使用能證明其指示或選擇作用的菌株進行試驗；復(fù)合培養(yǎng)基（如需要加入添加成分的培養(yǎng)基）需要以下列菌株進行驗證：具典型反應(yīng)特征的強陽性菌株；微弱生長的陽性菌株（對培養(yǎng)基中選擇劑等試劑敏感性強的菌株）；不具有該特性的陰性菌株；部分或完全受抑制的菌株。測試菌種為致病菌時需在生物安全柜中操作，生物安全柜應(yīng)周期性的進行監(jiān)測，做出監(jiān)測計劃，對監(jiān)測結(jié)果進行評價，不符合要求時需制定有效改進方案，監(jiān)測過程應(yīng)形成監(jiān)測記錄。以保證生物安全柜的能夠正常使用。填寫《生物安全柜及超凈臺監(jiān)測計劃及記錄》。5.2.3即用型培養(yǎng)基和試劑商品化即用型培養(yǎng)基的生產(chǎn)廠如果經(jīng)過ISO9001體系認證或滿足相應(yīng)質(zhì)量要求，并提供相應(yīng)的資質(zhì)證明后可不必再進行大量培養(yǎng)基測試工作。但應(yīng)保證培養(yǎng)基的儲存條件。5.2.4商品化合成脫水培養(yǎng)基制備的培養(yǎng)基對每批制備好的培養(yǎng)基除用標準菌株進行測試，還應(yīng)用實際樣品進行檢測，以更好的保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。不含指示劑或選擇劑的培養(yǎng)基，只需陽性菌株檢測；含有指示劑或選擇劑的培養(yǎng)基，應(yīng)使用能證明其指示或選擇作用的菌株進行實驗；復(fù)合培養(yǎng)基（即需要加入添加成分的培養(yǎng)基）需要用具備5.2.2性能的菌株逐批進行驗證；實驗室制備的需加入添加成分的即用型培養(yǎng)基基本條款同樣適用。5.2.5各別成分制備的培養(yǎng)基除了按照5.2.4條款進行培養(yǎng)基菌株測試外，還應(yīng)對各別成分制備的培養(yǎng)基用Miles＆Misra技術(shù)、螺旋平板技術(shù)或菌落總數(shù)技術(shù)進行測試，以監(jiān)控基礎(chǔ)材料的質(zhì)量，培養(yǎng)基的性能和實驗室內(nèi)部的配制規(guī)范。5.2.6培養(yǎng)基性能測試方法參照SN/T1538.2或G