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基本原理由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中,激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光,熒光經(jīng)過濾過和反射后,被光電倍增管所接受,然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài),這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出,從而產(chǎn)生熒光.不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征,這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜;,因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進行物質(zhì)的鑒定。在溶液中,當熒光物質(zhì)的濃度較低時,其熒光強度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似,熒光分析通常也采用標準曲線法進行。基本結(jié)構(gòu)1.光源:為高壓汞蒸氣燈或氙孤燈,后者能發(fā)射出強度較大的連續(xù)光譜,且在300nm?400nm范圍內(nèi)強度幾乎相等,故較常用。.激發(fā)單色器:置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或第一單色器,篩選出特定的激發(fā)光譜。.發(fā)射單色器:置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器,常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。樣品室:通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時,光源與檢測器成直角安排;測量固體時,光源與檢測器成銳角安排。檢測器:一般用光電管或光電倍增管作檢測器。可將光信號放大并轉(zhuǎn)為電信號熒光分光光度計科技名詞定義中文名稱:熒光分光光度計英文名稱:spectrofluorophotometer;fluorescencespectrophotometer;spectrofluorometer;spectroflurimeter定義1:利用某些物質(zhì)受激發(fā)出的熒光,其光強度與該物質(zhì)的含量成一定函數(shù)關(guān)系的性質(zhì)而制成的分光光度計。應(yīng)用學(xué)科:機械工程(一級學(xué)科);光學(xué)儀器(二級學(xué)科);物理光學(xué)儀器(三級學(xué)科)定義2:分析物質(zhì)熒光特性的儀器。具有兩套單色光器,對物質(zhì)熒光進行定性分析時,固定入射的激發(fā)光波長可獲得發(fā)射光光譜,而固定所測發(fā)射光波長時就可掃描得激發(fā)光譜,從中可以得到最大的發(fā)射光波長和最大的激發(fā)光波長。固定激發(fā)光波長和強度測量發(fā)射光強度,可作定量分析。應(yīng)用學(xué)科:生物化學(xué)與分子生物學(xué)(一級學(xué)科);方法與技術(shù)(二級學(xué)科)定義3:在熒光波長范圍內(nèi),對溶液中物質(zhì)進行濃度測定的儀器。應(yīng)用學(xué)科:細胞生物學(xué)(一級學(xué)科);細胞生物學(xué)技術(shù)(二級學(xué)科)熒光分光光度計熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器,通常比紫外分光光度計檢測靈敏度高2~3個數(shù)量級,能在紫外“力不能及”的領(lǐng)域發(fā)揮作用,是現(xiàn)代分析測試領(lǐng)域尤其是痕量分析領(lǐng)域一種應(yīng)用廣泛的重要分析儀器,在生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)及臨檢、藥學(xué)及藥理學(xué)、生化、食品、環(huán)保、公安等領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用。目錄?熒光分光光度計的特點?熒光分光光度計的功能?熒光分光光度計的技術(shù)參數(shù)?熒光分光光度計的附件選擇?熒光分光光度計的應(yīng)用?熒光分光光度計的特點o1、具有熒光測試光門自動啟動功能2、 具有測試數(shù)據(jù),自動打印功能。3、 檢測靈敏度高,測量范圍寬。4、 可連接微機工作站,擴展分析測試功能。5、 自動曲線回歸。?熒光分光光度計的功能o1、波長掃描波長掃描功能主要包括熒光強度和發(fā)光強度兩種數(shù)據(jù)模式。通過熒光強度數(shù)據(jù)模式可以得到樣品的激發(fā)光譜和熒光光譜,是一種比較常用的方法。2、時間掃描時間掃描是在規(guī)定的時間間隔內(nèi)采集被測樣品的熒光強度隨時間變化曲線。可以用來監(jiān)測被測樣品的物理化學(xué)變化,動力學(xué)法可被執(zhí)行。3、 光度值法使用波長法進行定量,高達20個標準樣品能被測量,通過標準濃度的每個點來繪制多邊形標準曲線,回歸標準曲線的制備可使用一次、二次、三次方的曲線或折線,同時可獲得其相關(guān)系數(shù)R及R24、 三維掃描可以得到三維圖、等高線圖,快速進行未知樣品熒光峰位的測定。5、 強大的圖譜處理功能兩個譜圖可進行加、減、乘、除運算,也可以計算譜圖面積;具有光譜校正和快門控制等。熒光分光光度計的技術(shù)參數(shù)01.光源:150W氙燈波長范圍:200nm-900nm靈敏度:S/N>500(峰對峰)光柵:1200grooves/250nmblazing波長掃描速度:最大5000nm/min波長驅(qū)動器速度:10,000nm/min波長精確度:+2nm波長重復(fù)性:+2nm狹縫寬度:1,2,5,10,20nm尺寸:518mm(W)x604mm(D)x272mm(H)重量:43.7kg電源:100~132V50/60Hz或者180~240V50/60H(可選)
.熒光分光光度計的附件選擇o固體樣品反射附件:用來測量固體粉末樣品偏振附件:測量發(fā)射光的偏振角度濾光片附件:濾除二級譜及雜散光特殊光電倍增管:波長拓展.熒光分光光度計的應(yīng)用o1.醫(yī)學(xué)和臨床檢驗 生物體試料的臨床分析藥學(xué)和藥理學(xué)
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