針刺對Ⅳ型變態反應模型豚鼠干預作用的研究針刺對Ⅳ型變態反應模型豚鼠干預作用的討論

：謝長才，許能貴，符文彬，孫健

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針刺對Ⅳ型變態反應模型豚鼠干預作用的討論

出傾向，易于復發并趨向慢性化［1］。臨床討論證明針灸治療Ⅳ型變態反應性皮膚病，具有抗炎、止癢、調整機體免疫功能的作用［2］。本試驗觀看了針刺對Ⅳ型變態反應模型豚鼠的影響，為臨床供應針刺治療Ⅳ型變態反應的理論依據，現將結果報道如下。

1材料與方法

11動物及分組

一般級雄性白化豚鼠，體質量250～300g，由廣州中醫藥高校試驗動物中心供應。合格證編號：0021021，0025124。按隨機數字表法將36只豚鼠分為3組，即空白組、模型組、針刺組。空白組不賜予任何處理，模型組除造模外不賜予任何處理。

12主要試劑與儀器2，4二硝基氯苯（DNCB）由中國上海華強試劑有限公司供應，批號20240103;68052型電針治療儀（上海醫用電子儀器廠生產);華佗牌28號1寸毫針（蘇州醫療用品廠出產）;6mm圓形打孔器、分析天平、輪轉式切片機、染色機、脫水機、電熱恒溫干燥箱、光學顯微鏡及顯微攝像系統等器材均由廣州中醫藥高校針灸推拿學院中心試驗室及第一附屬醫院病理室供應。

13模型復制豚鼠造模方法

參照Boyera［3］及王國江等［4］的報道。首先于豚鼠頸背部剪毛，面積2cm×2cm大小，50mg/L24二硝基氯苯（DNCB）丙酮溶液50μL外涂致敏；2周后豚鼠左耳內側涂1mg/LDNCB丙酮溶液100μL作為激發，每周1次，連續4周；第4次激發后72h將豚鼠隨機分組處理。

14治療方法

針刺組在慢性濕疹造模完成后，依據《試驗針灸學》［5］取曲池（雙）、血海(雙)，并參照人體有關穴位，以動物比較學方法定位。用1寸毫針刺入所選穴位，將針柄分別連接至電針治療儀的電極上，疏密波進行治療，5～10次/s，以豚鼠能寧靜耐受為宜。每天針刺1次，每次20min，治療5d后間隔1d，連續治療5d，共治療10次為1個療程，完成后取材。

15觀看指標

151耳厚度及耳質量于激發后72h以直徑5mm的金屬打孔器于左耳部造模處取組織塊，同時右耳相同部位打孔，測量所取耳部厚度，同時用電子天平稱取左右耳組織塊質量，計算激發后左右耳厚度差及左右耳質量差。

152中性與嗜酸性粒細胞及單核細胞與淋巴細胞計數將各組左耳組織塊制成常規蘇木素—伊紅（HE）染色切片，在光鏡下用網形目鏡測微尺細胞數，以單盲法計數每mm2中性與嗜酸性粒細胞數及單核細胞與淋巴細胞數。推斷標準（每mm2炎癥細胞數）：（-）為真皮內無單核細胞、淋巴細胞及中性與嗜酸性粒細胞；（+）為單核細胞或淋巴細胞及中性與嗜酸性粒細胞10個左右；（++）為單核細胞或淋巴細胞及中性與嗜酸性粒細胞20個左右；（+++）為單核細胞或淋巴細胞及中性與嗜酸性粒細胞30個左右。

153病理觀看光鏡下觀看治療后各組豚鼠耳切片的病理變化。

16統計學方法

采納SPSS100統計軟件進行數據分析，兩樣本均數比較采納t檢驗、秩和檢驗，組間兩兩比較采納q檢驗。

2結果

21各組耳厚度及質量比較

表1及表2結果顯示,模型組耳厚度和質量與空白組比較差異有顯著性意義（P＜001），說明本試驗造模勝利。針刺組與模型組比較，在對豚鼠耳厚度和耳質量的影響上差異均有顯著性意義（P＜005）。表1各組對豚鼠耳厚度的影響（略）表2各組對豚鼠耳質量的影響（略）

22各組豚鼠真皮內炎癥細胞數比較

表3結果顯示，模型組與空白組單核細胞與淋巴細胞數、中性與嗜酸性粒細胞數比較差異有顯著性意義（均P＜005），說明慢性濕疹模型造模勝利。針刺組可肯定程度降低炎癥細胞數，但與模型組比較無顯著性差異（P＞005）。

表3各組豚鼠真皮內炎癥細胞數的影響（略）

23病理切片觀看結果

空白組皮膚表皮、真皮、軟骨均未見明顯病變（圖1-a，彩圖見第199頁）。模型組皮膚表皮增生，棘層明顯增厚，角化過度及角化不全，表皮內有輕度細胞間水腫，表皮突顯著延長，真皮上部中度血管四周炎性浸潤，以淋巴細胞居多，間有嗜中性粒細胞及纖維細胞，呈慢性濕疹病理轉變（圖1-b，彩圖見第199頁）。針刺組皮膚表皮輕度增生，棘層輕度增厚，與模型組比較程度減輕，真皮上部中度血管四周炎性浸潤，可見散在淋巴細胞，單核

針刺對Ⅳ型變態反應模型豚鼠干預作用的討論

細胞、嗜中性粒細胞及纖維細胞浸潤，與模型組比較數量明顯削減（圖1-c，彩圖見第199頁）。3爭論Ⅳ型變態反應性皮膚病的治療目前主要采納抗組胺類藥物和皮質類固醇激素治療，療效不令人滿足，且皮質類固醇激素治療又有肯定副作用，停藥后反跳現象明顯，而中醫藥治療已取得良好的療效。為進一步查找和篩選一些有療效的治療方法，發揮中醫藥治療Ⅳ型變態反應的優勢，我們從針灸學治療角度在Ⅳ型變態反應的試驗討論方面查找理論上的依據。本試驗采納24二硝基氯苯（DNCB）反復激發豚鼠方法復制慢性濕疹樣轉變。豚鼠的皮膚最易致敏，適于用作過敏反應的討論，特殊是遲發型超敏反應更接近人類慢性變應性濕疹的病理學轉變［6］。盡管該模型造模時間較長,而且用小鼠復制成慢性皮炎—濕疹模型的技術也較為成熟,但由于運用針刺技術于豚鼠來說更便利，更具于試驗效果的精確?????性，所以我們選擇豚鼠慢性接觸過敏反應模型。本試驗中針刺選擇的基本穴位為曲池、血海兩穴。曲池穴有祛邪透表和驅除周身風邪的特別作用，主治皮膚病、外感表熱證，既能解肌又能宣肺，對互為表里的肺經和大腸經都具有調整作用，是臨床治療皮膚病的首選穴位。血海是足太陰脾經穴，別名百蟲窠、血郄，為陰血之海，故而得名，具有養血行血、涼血調血之功，下半身之血證和血虛、血燥、熱耗陰血所消失的皮膚病及同血分、濕氣有關的皮膚病均屬本穴的主治范圍。古人云：“治風先治血，血行風自滅”，故選血海以行氣活血，和營解表。同時曲池、血海兩穴為消疹止癢之常用穴，常用以治療瘙癢性皮膚病，故用此兩穴相配可使營衛調和，

風熱得解，從而達到標本并治之功。在試驗中，豚鼠耳厚度及質量差可說明其炎癥反應的程度，針刺對炎癥反應的抑制強度表現為差值越小，抗炎作用越強。在真皮內炎癥細胞數的影響上表現出肯定的抗炎作用。在皮損病理切片觀看討論中發覺模型豚鼠消失慢性濕疹局部浸潤、脫屑充血、角化不全、角化過度等，真皮上部中度血管四周炎癥浸潤，其中散在淋巴細胞，單核細胞、嗜中性粒細