培養基的制備與滅菌

目的要求基本原理實驗器材基本步驟培養基的制備與滅菌目的要求1目的要求掌握培養基的配制原理及方法學習高壓蒸汽滅菌的基本原理及方法學習干熱滅菌的操作技術目的要求掌握培養基的配制原理及方法2

基本原理（一）

培養基的配制：培養基是人工配制的適合微生物生長繁殖或積累代謝產物的營養基質。不同種類的培養基中，一般應含有碳源、氮源、能源、無機鹽、生長因子和水六大營養要素。基本原理（一）

培養基的配制：培養基是人工配制的適合微3

由于微生物營養類型復雜，不同微生物對營養物質的需求也不一樣，因此，微生物培養基種類繁多。例如按培養的微生物不同可分為牛肉膏蛋白胨培養基（培養細菌）、高氏一號合成培養基（培養放線菌）和馬丁氏培養基（培養真菌）等；按物理狀態不同可分為固體培養基、半固體培養基和液體培養基等。配制固體培養基時需加入1.5%~2.0%的瓊脂作凝固劑。

不同的微生物對培養基pH要求不同，霉菌和酵母菌的培養基pH一般是偏酸性的，而細菌和放線菌的培養基pH一般為中性或微堿性。

由于微生物營養類型復雜，不同微生物對營養物質的需求也4實驗器材儀器或其他用具：搪瓷杯，試管，三角瓶，燒杯，量筒，玻棒，電磁爐、培養基分裝器，高壓蒸汽滅菌鍋，精密pH試紙（pH5.5~9.0），牛角匙，棉花（或橡膠塞），牛皮紙，記號筆，紗布，棉繩等。

溶液或試劑：牛肉膏，蛋白胨，可溶性淀粉，葡萄糖，NaCl，K2HPO4，KNO3，MgSO4·7H2O，FeSO4·7H2O，瓊脂，孟加拉紅，鏈霉素，1mol/LNaOH，1mol/LHCl等。

實驗器材儀器或其他用具：搪瓷杯，試管，三角瓶，燒杯，量筒，玻5

操作步驟

稱量溶化調pH過濾分裝加塞包扎滅菌擱置斜面無菌檢查操作步驟

稱量溶化調pH6稱量：按培養基配方比例依次準確地稱取所需藥品逐一放入搪瓷杯中

稱量：按培養基配方比例依次準確地稱取所需藥品逐一放入搪瓷杯中7溶化：在電爐上加熱溶解。溶化：在電爐上加熱溶解。8注：瓊脂要在沸水中溶解，用玻棒不斷攪拌，直至完全溶解（分裝試管）。也可先將一定量的液體培養基分裝于三角燒瓶中，然后按1.5%～2.0%的量將瓊脂直接加入各三角燒瓶中，在高溫滅菌時即被溶化(分裝三角瓶)。

注：瓊脂要在沸水中溶解，用玻棒不斷攪拌，直至完全溶解（分裝試9分裝：液體培養基分裝試管高度以1/4左右為宜；固體培養基分裝試管高度一般不超過1/5，滅菌后制成斜面

。分裝：液體培養基分裝試管高度以1/4左右為宜；固體培養基分裝10微生物實驗培養基制備和滅菌ppt課件11加塞加塞12包扎包扎13高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌14擺斜面擺斜面15擱置斜面：最好待培養基冷至50℃-60℃時擺斜面，以免形成大量冷凝水。擱置時要調整斜面的傾斜度，以斜面的長度不超過試管總長的一半（圖示）為宜。可以成扎擺放，凝固前切莫移動試管。

試管斜面的擱置與其長度的示意圖擱置斜面：最好待培養基冷至50℃-60℃時擺斜面，以免形成大16無菌檢查：將滅菌的培養基放入37℃溫箱中培養過夜，以檢查滅菌是否徹底。

無菌檢查：將滅菌的培養基放入37℃溫箱中培養過夜，以檢查滅菌17基本原理（二）滅菌：是指采用強烈的理化因素使任何物體內外部的一切微生物永遠喪失其生長繁殖能力的措施。微生物實驗要求在無菌條件下進行，為此，實驗用的器皿、培養基等都要預先包裝并經滅菌后才可使用。微生物實驗中常用的滅菌方法有干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、紫外線（UV）滅菌和過濾除菌等，可根據具體情況選用不同的滅菌方法。

基本原理（二）滅菌：是指采用強烈的理化因素使任何物體內外部的18高壓蒸汽滅菌：是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內，通過加熱，使滅菌鍋內的水沸騰而產生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中驅盡（即排氣），然后關閉排氣閥，繼續加熱，此時由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌鍋內的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度，導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。一般采用0.103MPa的蒸汽壓力，此時溫度是121.1℃，維持15~20min。當滅菌物品中有易破壞的成分時，可采用較低溫度115℃（蒸汽壓力0.075MPa）下維持30min左右.高壓蒸汽滅菌：是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內，通19手提式高壓蒸汽滅菌鍋

手提式高壓蒸汽滅菌鍋20圖示手提式滅菌鍋結構1、安全閥；2、壓力表；3、放氣閥；4、軟管；5、螺栓6、滅菌桶；7、篩架；8、水圖示手提式滅菌鍋結構21微生物實驗培養基制備和滅菌ppt課件22微生物實驗培養基制備和滅菌ppt課件23鍋內加適量水鍋內加適量水24裝入待滅菌物品裝入待滅菌物品25插入排氣軟管；加蓋，旋緊螺栓插入排氣軟管；加蓋，旋緊螺栓26加熱，排氣加熱，排氣27升壓保壓：排氣后，繼續加熱使鍋內蒸汽壓緩慢上升。當鍋內壓力到達0.103MPa時，調節熱源開關，使鍋內壓力維持所需滅菌溫度，同時計算滅菌時間。一般培養基和玻璃器皿的滅菌需維持20min。降壓：達到規定的滅菌時間后，關閉熱源，鍋內壓力自然降至零壓后，打開排氣閥排氣。

取料：開啟鍋蓋和取出滅菌物品時，鍋體表面的溫度仍然很高，逸出的蒸汽也很燙。故取物品時要防止手及其他部位的皮膚燙傷。

升壓保壓：排氣后，繼續加熱使鍋內蒸汽壓緩慢上升。當鍋內壓力到28微生物實驗培養基制備和滅菌ppt課件29微生物實驗培養基制備和滅菌ppt課件30

基本原理（三）干熱滅菌：一般在電熱干燥箱中利用熱空氣進行滅菌。與濕熱滅菌相比，干熱滅菌所需溫度高（160℃～170℃），時間長（1.5～2h）。但干熱滅菌溫度不能超過180℃，否則包器皿的紙或棉塞就會烤焦，甚至引起燃燒。干熱滅菌僅適用于對空的玻璃器皿或金屬器具的消毒滅菌基本原理（三）干熱滅菌：一般在電熱干燥箱中利用熱空氣進行滅31微生物實驗培養基制備和滅菌ppt課件32

操作步驟玻璃器皿清洗烘干包裝放入干燥箱165℃，2h關電源，冷卻操作步驟玻璃器皿清洗烘干包裝33器皿包扎器皿包扎34移液管的包扎及移液管筒移液管的包扎及移液管筒35干熱滅菌干熱滅菌：165℃，1.5~2.0h干熱滅菌干熱滅菌：165℃，1.5~2.0h36實驗安排牛肉膏蛋白胨培養基高氏一號培養基（同上）馬丁氏培養基（同上）3個組：各配1000ml，分裝三角瓶（200ml/瓶）

1個組：配1000ml，分裝三角瓶（150ml/瓶）

2個組：各配500ml，分裝三角瓶（150ml/瓶）

實驗安排牛肉膏蛋白胨培養基3個組：各配1000ml，分裝三角37實驗安排（4人/組）

一、器皿包扎和滅菌（1）培養皿12只（