第十四章沉淀反應本章要點沉淀反應的概念及特點。1液相內沉淀試驗的原理及種類。2凝膠內沉淀試驗的原理及種類。3雙向瓊脂擴散試驗的應用。4凝膠免疫電泳技術的種類及原理。5沉淀反應方法的技術要點、影響因素及臨床應用。6CONTENTS目錄010203液相內沉淀試驗凝膠內沉淀試驗凝膠免疫電泳技術前言沉淀反應（precipitation)可溶性抗原與相應抗體發生特異性結合，在適當條件下而出現的沉淀現象。多克隆抗體可與抗原表面多個不同的表位結合，容易與多個抗原交聯成網狀結構而發生沉淀，而單克隆抗體只與抗原表面的一種表位結合，不易形成交聯，故不適用于免疫沉淀試驗。沉淀反應分類1.液相內沉淀試驗環狀沉淀反應、絮狀沉淀反應、免疫比濁度分析。2.凝膠內沉淀試驗單向瓊脂擴散試驗、雙向瓊脂

擴散試驗。3.凝膠免疫電泳技術對流電泳技術、免疫電泳技術、

火箭電泳技術、免疫固定電泳技術。液相內沉淀試驗01液相內沉淀試驗環狀沉淀試驗：抗原溶液疊加在細玻璃管內的抗體液面上，二者在兩液面交界處形成白色沉淀環。1液相內沉淀試驗絮狀沉淀試驗：可溶性抗原、抗體在液相中特異性結合，形成絮狀沉淀物。2液相內沉淀試驗環狀沉淀試驗：透射、散射和免疫膠乳比濁法，應用于自動化。3凝膠內沉淀實驗02凝膠內沉淀實驗指可溶性抗原、抗體在含有電解質的凝膠內自由擴散形成濃度梯度，二者在比例合適的位置形成肉眼可見的沉淀線或沉淀環。根據抗原與抗體反應的方式和特性，可分為單向瓊脂擴散試驗和雙向瓊脂擴散試驗。凝膠內沉淀實驗一、單向瓊脂擴散試驗（平板法）一、單向瓊脂擴散試驗（平板法）抗體與待測的抗原,在兩者比例合適的部位結合形成沉淀環。環的大小與抗原的濃度成正相關。本法穩定、簡便、無需儀器設備。重復性和線性均可信，但靈敏度稍差、耗時長、影響因素多。一、單向瓊脂擴散試驗（平板法）單向免疫擴散試驗凝膠內沉淀實驗二、雙向瓊脂擴散試驗（平板法）二、雙向瓊脂擴散試驗（平板法）將抗原抗體分別加在瓊脂糖凝膠不同的對應孔中，兩者在凝膠中自由擴散，在比例合適處形成白色沉淀線。沉淀線的位置、形狀以及對比關系，可進行定性分析，如抗原或抗體的存在與否、相對含量估計、相對分子量分析和性質分析。本法操作簡單、特異性高、結果可靠、成本低廉，但靈敏度低，耗時長，不能精確定量。二、雙向瓊脂擴散試驗（平板法）雙向瓊脂擴散試驗應用雙向瓊脂擴散試驗應用A：Ag、Ab濃度及分子量近似；B：Ag、Ab濃度近似，分子量Ag＜Ab；C：Ag、Ab濃度近似，分子量Ag＞Ab；D：濃度Ag＞Ab，分子量近似；E：濃度Ag＞Ab，分子量Ag＜Ab；F：濃度Ag＜Ab，分子量Ag＞Ab1.抗原或抗體的定性分析。2.抗原、抗體的相對分子量和相對濃度的估計。雙向瓊脂擴散試驗應用抗原完全相同3.抗原性質的分析抗原部分相同抗原完全不同雙向瓊脂擴散試驗應用4.抗體效價的測定5.抗原或抗體純度的鑒定凝膠免疫電泳技術03凝膠免疫電泳技術電泳分析與沉淀反應的結合產物，即可溶性抗原和抗體在直流電場的作用下，在凝膠內加速定向泳動，彼此相遇而特異性結合，在比例合適處形成可見的沉淀物。該技術提高了沉淀反應的速度和敏感度，廣泛用于臨床實驗診斷和科學研究。凝膠免疫電泳技術一、對流免疫電泳技術凝膠免疫電泳技術無沉淀線出現表明無相應的抗原。沉淀線位于抗原抗體孔中間，說明兩者比例較適合。沉淀線偏向抗原孔一方，表示抗體濃度＞抗原，反之，則是抗體濃度＜抗原濃度。一、對流免疫電泳技術凝膠免疫電泳技術一、對流免疫電泳技術凝膠免疫電泳技術二、火箭免疫電泳技術凝膠免疫電泳技術單向免疫擴散和電泳的定量檢測技術。固定抗體不移動，抗原向正極泳動，隨著抗原量減少，基底區越來越窄，形成的沉淀線逐漸變窄，形成一個如火箭的沉淀峰，峰的高度與抗原量呈正相關。二、火箭免疫電泳技術火箭免疫電泳圖①②③④為標準抗原；⑤⑥為標本-+凝膠免疫電泳技術三、免疫電泳技術凝膠免疫電泳技術三、免疫電泳技術凝膠免疫電泳技術四、免疫固定電泳技術凝膠免疫電泳技術四、免疫固定電泳技術SPGAMκ

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