教學培訓課件臨床輸血檢驗技術(shù)

檢測報告的簽發(fā)學習目標1、掌握HIV、HBV、HCV核酸檢測的原理、實驗有效性的判定、結(jié)論的判斷。2、知道反應性和非反應性標本保存的方法病原學標志物的核酸檢測原理PCR擴增檢測采用TaqMan熒光探針標定技術(shù)。人類免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒核酸擴增分別采用不同熒光染料標記的探針，故可對提取的標本和內(nèi)對照模板同時進行HBV（DNA）、HCV（RNA）、HIV1（RNA）檢測。在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下HCVRNA/HIV1RNA/內(nèi)對照RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再與HBVDNA/內(nèi)對照DNA一同作為模板在TaqDNA聚合酶的作用下擴增病毒核酸的保守區(qū)域和內(nèi)對照特定區(qū)域。TaqDNA聚合酶5’—3’外切酶活性切割反應系統(tǒng)中帶熒光標記的TaqMan探針產(chǎn)生熒光信號，隨著PCR反應的進行，熒光信號不斷積累。實時熒光定量PCR儀通過檢測達到和超過熒光閾值的信號給出樣品的陰陽性結(jié)果。病原學標志物的核酸檢測樣本EDTA-K2真空采血管留取血液樣本器材與試劑熒光定量PCR擴增儀、HIV、HBsAg、HCV病毒（DNA）核酸擴增熒光檢測試劑盒等。病原學標志物的核酸檢測分析項目內(nèi)對照HBVDNAHCVRNAHIV-1RNA備注檢測熒光HEXTAMRAFAMROXCY5/陰性對照++---否則重測陽性對照//+++否則重測陽性對照、陰性對照、內(nèi)對照結(jié)果判定規(guī)則病原學標志物的核酸檢測分析項目內(nèi)對照HBVDNAHCVRNAHIV-1RNA結(jié)果判定檢測熒光HEXTAMRAFAMROXCY5檢測樣本++---HBVDNA/HCVRNA/HIV-1RNA陰性//+//HBVDNA陽性///+/HCVRNA陽性////+HIV-1RNA陽性-----所有結(jié)果重新測定-/-//HBVDNA結(jié)果重新測定/-/--HCVRNA或HIV-1結(jié)果重新測定（1.”/”表示不考慮；2.FAM/ROX/CY5熒光層“-”表示Ct>45orNoCt;“+”表示Ct≤45；3.HEX/TAMRA熒光層“-”表示Ct>40orNoCt;“+”表示Ct≤40）檢測樣本結(jié)果判定規(guī)則

病原學標志物的核酸檢測實驗有效性判定當陰陽性對照與外部質(zhì)控品（質(zhì)控品達到預期結(jié)果）同時有效時，整批實驗有效；否則整批實驗無效，需重做。結(jié)論的判定a.采用混檢（八混一）模式進行核酸檢測，當混檢結(jié)果呈非反應性（-）時，該混檢孔內(nèi)的標本均判為合格標本。b.當混檢結(jié)果某一項或多項呈反應性（+）時，混檢孔內(nèi)的所有標本均為待查標本，須進行拆分單樣本檢測。當拆分檢測呈非反應性（-）時，則該標本為合格標本；拆分單樣本檢測某一項或多項呈反應性（+）時，該樣本判為不合格。對照檢測報告，將檢測呈反應性的POOl所對應的標本挑出，放于2～8℃冰箱，留待次日進行樣本拆分檢測。對照檢測記錄，將檢測呈非反應性的標本按日期，每100個標本作為一個單位放在樣本盤上，貼上留樣標簽，放-20℃冰箱保存。【標本保存】病原學標志物的核酸檢測病原學標志物的核酸檢測【質(zhì)量控制】1．PCR擴增板須嚴格按照編寫的擴增板圖從左至右順序擺放。2．PCR擴增板放入PCR儀的擴增槽后，如擴增板少于6條，應取相同數(shù)量八連管從右至左擺放與其配平，如擴增板大于6條少于