光譜分析技術(shù)

1、實驗?zāi)康?、實驗原理3、儀器結(jié)構(gòu)與分類3、實驗操作4、注意事項5、思考題實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)掌握紫外可見、熒光、紅外光譜分析技術(shù)原理了解儀器結(jié)構(gòu)和分類熟練掌握常用儀器的使用方法和注意事項實驗原理

構(gòu)成物質(zhì)的分子、原子或離子經(jīng)輻射能照射后物質(zhì)的總能量就會發(fā)生變化，在能量相互轉(zhuǎn)化的過程中產(chǎn)生輻射信號或引起輻射信號變化。根據(jù)產(chǎn)生的輻射信號或引起信號變化，均可進(jìn)行光譜分析。

1、光譜的分類根據(jù)光的基本性質(zhì)和它在傳遞能量過程所發(fā)生的變化和引起波長或傳播方向的差異，可以將光譜分為3大類，即發(fā)射光譜、吸收光譜和散射光譜。（1）發(fā)射光譜構(gòu)成物質(zhì)的分子、原子或離子，經(jīng)輻射能照射吸收了能量，由基態(tài)能級轉(zhuǎn)變成激發(fā)態(tài)能級后，處于激發(fā)態(tài)的物質(zhì)內(nèi)部能量比原來能量多，處于不穩(wěn)定狀態(tài)，需要把吸收多余的能量釋放出去，再回到穩(wěn)定的基態(tài)。因此，在該物質(zhì)由激發(fā)態(tài)回到基態(tài)的過程中，系統(tǒng)內(nèi)以光的形式釋放多余的能量，并產(chǎn)生相對應(yīng)波長的光譜，這種光譜稱之為發(fā)射光譜

（2）吸收光譜構(gòu)成物質(zhì)的分子，原子或離子等在輻射能的照射下，在系統(tǒng)內(nèi)吸收外界能量的過程中，所對應(yīng)吸收的波長產(chǎn)生光譜，稱之為吸收光譜。（3）散射光譜構(gòu)成物質(zhì)的分子、原子或離子，經(jīng)輻射能照射后，系統(tǒng)內(nèi)散射出來的能量產(chǎn)生相對應(yīng)波長的光譜，稱之為散射光譜。散射光譜主要是以拉曼散射為基礎(chǔ)形成的光譜，它主要分布在紅外區(qū)，屬于分子散射光譜2、吸收光譜相關(guān)理論(1)光譜分析的常用術(shù)語消光系數(shù)是溶液對光吸收的比例常數(shù)，是指在一定的濃度和波長等條件下物質(zhì)的光吸收值，用K表示。K值取決于溶質(zhì)性質(zhì)、入射光波長和溫度。吸光度又稱光密度(OD)或吸光值(A)，表示溶液吸收光的強(qiáng)弱或吸收程度，也有用E表示。E值愈大，溶液對光吸收的程度愈大。摩爾消光系數(shù)溶液濃度為mol/L，光程厚度為lcm時的消光系數(shù)，其單位是L/(mol.cm)，用ε表示。ε值是物質(zhì)的一個特征常數(shù)，由物質(zhì)的性質(zhì)與光的波長而定。同一物質(zhì)在不同的波長所測得的ε值不同。一般采用ε值最大的波長進(jìn)行比色測定。

百分消光系數(shù)是指被測物質(zhì)的濃度以質(zhì)量濃度表示時的消光系數(shù)。當(dāng)溶液濃度為1g/100ml，光程為1cm時的消光系數(shù)，其單位是lOOmL/(g.cm)，用表示。值是生物大分子常用的消光系數(shù)，由于生物大分子的分子量太大，一般不用摩爾濃度，而用百分濃度表示，所以測定時用表示，它是表示生物大分子的一個特征常數(shù)。光吸收當(dāng)一定波長的光通過某介質(zhì)時，該介質(zhì)有選擇地吸收某一波長的光，使入射光的強(qiáng)度減弱，這種現(xiàn)象稱為光吸收。一束連續(xù)光經(jīng)棱鏡色散后所得到的光譜中，就出現(xiàn)一處或幾處暗的部分譜帶，這種通過介質(zhì)的光呈現(xiàn)出射光，透過介質(zhì)產(chǎn)生的光譜就吸收光譜。紫外-可見分光光度測定法就是分子吸收光譜，屬于帶光譜。光互補(bǔ)色溶液顏色與相應(yīng)顏色的單色光生成互補(bǔ)色一白光，這種物理現(xiàn)象稱之為光互補(bǔ)色。(2)朗伯-比耳(Lambert-Beer)定律朗伯-比耳定律，也稱之為光吸收定律。在一定的條件下，一束單色光通過吸收介質(zhì)的溶液后，因吸收介質(zhì)吸收部分光能，引起該單束光的強(qiáng)度降低。吸收介質(zhì)的厚度和吸光物質(zhì)的濃度與光降低的程度成正比。用公式表示：A＝KcL式中A——吸光值；K——常數(shù)；c——溶液濃度；L——光程。朗伯-比耳定律同時反映了溶液厚度L和濃度c對光吸收的關(guān)系，其數(shù)值隨光的波長、溶液濃度和溶液的性質(zhì)變化而變化。

助色基團(tuán)(auxochromicgroup),有機(jī)化合物的某些基團(tuán)本身并不產(chǎn)生特殊吸收峰，但與發(fā)色團(tuán)同存于同一分子中時，能引起生色集團(tuán)吸收峰發(fā)生位移和光吸收的強(qiáng)度增加，這些基團(tuán)稱為助色團(tuán)。如-OH、-NH2、-SH及一些鹵元素等。這些基團(tuán)的共同特點是在分子中都有孤對電子，它們能與生色基團(tuán)中的π電子相互作用，發(fā)生電子躍遷，導(dǎo)致能量下降并引起吸收峰位移。吸收峰向波長的方向發(fā)生位移，亦稱向紅發(fā)生位移。如果吸收峰向波長短的方向發(fā)生位移，亦稱向紫發(fā)生位移。紅移及藍(lán)移某些化合物通過取代反應(yīng)引入了含有未共享電子對的基團(tuán)之后，如-OH、-NH2、-SH、Cl、-OR、-SR等，能使該化合物的最大吸收峰的波長λmax向長波長的方向移動。這種現(xiàn)象稱之為紅移效應(yīng)，這個化合物的基團(tuán)成為向紅基團(tuán)。與紅移效應(yīng)相反，某些化合物的生色基團(tuán)的碳原子一端引入了某些取代基以后，如＝C=O基，能使該化合物的最大吸收峰的波長λmax向短波長的方向移動。這種現(xiàn)象稱之為藍(lán)移效應(yīng)，

(4)儀器的測量誤差任何光學(xué)儀器都具有一定的測量誤差。在實驗過程中由于電源不穩(wěn)定，引起光源能量的波動或光電倍增管老化等原因，使儀器顯示參數(shù)重現(xiàn)性差，造成測試數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確。尤其是光源偶爾變化，對測定結(jié)果影響較大。當(dāng)試樣濃度過大或過稀時引起的誤差更大，臣此，在測定時選擇合適的吸光度測量范圍是很重要的。根據(jù)朗伯一比耳定律可知，當(dāng)測定值的吸光值A(chǔ)=0.434時，測量誤差最小。如果儀器的讀數(shù)誤差為1％，要求測量誤差少于5％，就要將待測液的透光率控制在70％～10％，吸光值在0.15～1.00。因此在操作過程中可以通過調(diào)節(jié)濃度或選用不同厚度的光程的方法使透過率落在最佳的測定區(qū)域內(nèi)。此外，還要選擇合適的檢測波長和狹縫寬度，以最強(qiáng)吸收帶的最大吸收波長為入射光的波長，以得到最大測量靈敏度為準(zhǔn)。一般情況，狹縫寬度是測試時試樣吸收峰半寬度的1/10為最佳。

3、分子發(fā)生光譜-熒光光譜相關(guān)理論

(1)熒光和磷光當(dāng)物質(zhì)被輻射能照射后，分子內(nèi)部獲得外源能量，基態(tài)分子能級的電子躍遷到較高能愛轉(zhuǎn)變成激發(fā)態(tài)分子能級，使分子處在高能域不穩(wěn)定狀態(tài)，因此，它必須要釋放多余的能量變成穩(wěn)定狀態(tài)分子。在由激發(fā)態(tài)能級回到基態(tài)能級的過程中以光的形式釋放多余的能量，并發(fā)射出比原波長更長的光譜，這一過程稱為分子發(fā)光。以檢測分子發(fā)射光譜的分析療法稱為熒光光度分析法。它涉及工農(nóng)業(yè)、環(huán)境保護(hù)、原煤、地礦、石油、化學(xué)及生物等。對分析對象而言，包括無機(jī)化合物、有機(jī)化合物、藥物分析、糖類、維生素、激素、氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)。

(4)熒光分析方法①定量分析利用熒光分子發(fā)射熒光的強(qiáng)弱進(jìn)行定量測定，其基本原理與紫外-可見分光光度分析法相仿。主要有標(biāo)準(zhǔn)曲線法和內(nèi)標(biāo)法兩種。a.標(biāo)準(zhǔn)曲線法熒光測定多采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法，即以已知量的標(biāo)準(zhǔn)熒光物質(zhì)經(jīng)過同樣的處理后，配成系列的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，將在熒光光度計上測得的值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后在同樣條件下測得的未知樣品值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得量，求出熒光物質(zhì)的濃度。b.內(nèi)標(biāo)法通常一定的濃度范圍內(nèi)(在熒光標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍內(nèi))，選擇一個合適的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，將其在熒光光度計上測得的值與在同樣條件下的未知樣品的值進(jìn)行比較，通過公式計算出未知樣品的濃度。未知樣品濃度(mg／mL)=(A1／A2)×c式中A1——未知樣品的熒光發(fā)光值；A2——標(biāo)準(zhǔn)樣品的熒光發(fā)光值；c——標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度。②定性分析根據(jù)熒光發(fā)射的波長和出現(xiàn)的峰位，確定物質(zhì)結(jié)構(gòu)的某些特征。

儀器結(jié)構(gòu)與分類

光譜分析儀器的基本構(gòu)造

凡是用于研究光的吸收、發(fā)射和散射的強(qiáng)度與波長關(guān)系的儀器，均稱之為光譜儀或分光光度計。這些儀器通常都是由光源、單色器、樣品室、檢測器和顯示器等5個基本單元組成。2、分類任何光譜分析都包含三個主要過程：（1）能源提供能量，（2）能量與被測物質(zhì)相互作用，（3）產(chǎn)生被檢測的訊號。因此，按能源不同，光譜分析法可分為紅外分光光度計、紫外-可見分光光度計、X光衍射儀及化學(xué)發(fā)光等光譜法；按被作用物質(zhì)來分，可分為原子光譜和分子光譜；以產(chǎn)生的被檢測訊的輻射能的基本性質(zhì)來劃分，則可分為吸收、發(fā)射、散射、折射、反射、干涉、衍射和偏振等。熒光分光光度計通常是檢測發(fā)射光譜為特征，也可以檢測吸收光譜。因此，其基本結(jié)構(gòu)與紫外分光光度計十分相似，主要是由激發(fā)光源、激發(fā)單色器、樣品池、發(fā)射單色器、檢測器以及顯示系統(tǒng)幾部分組成。熒光分光光度計常用的光源有鎢燈、碘鎢燈、氫燈、氚燈、汞燈、氙燈、激光等。但就光源而言，紫外光源使用最多。雖然熒光分光光度計和紫外分光光度計在結(jié)構(gòu)上有許多相似之處，但在設(shè)計上還是有一定的區(qū)別。熒光分光光度計結(jié)構(gòu)是根據(jù)發(fā)射光譜的特點而設(shè)計的，紫外分光光度計是根據(jù)吸收光譜設(shè)計的。二者之間的差異主要有以下3點。測光角度不同熒光分光光度計的檢測器的位置與入射光源方向成90°角，其對面的背景為暗背景。紫外分光光度計的檢測器的位置與入射光源方向平行，其對面的背景為亮背景。單色器位置不同熒光分光光度計的單色器設(shè)在檢測器前面，樣品的發(fā)射光經(jīng)單色器分光后進(jìn)人檢測器，這樣可以除去樣品發(fā)射以外的輻射，使分析更有專一性。紫外分光光度計的單色器設(shè)在樣品池前面，光束先進(jìn)入分光器分光后再進(jìn)入樣品池。比色杯不同熒光分光光度計使用的樣品池是四面透光的樣池，它可以作為紫外分光光度計的樣品池。紫外分光光度計使用的樣品池是兩面透光的樣池，它不能作為熒光分光光度計的樣品池。儀器操作規(guī)程

752型紫外光柵分光光度計為例介紹常用光譜儀器的使用方法。（8）將被測溶液置于光路中，數(shù)字顯示器上直接讀出被測溶液的透過率(T)值。（9）吸光度Ａ的測量：參照“4”和“7”,調(diào)整儀器的“000.0”和“100.0”。將選擇開關(guān)置于“A”。旋動吸光度調(diào)整旋鈕，使得數(shù)字顯示為“000.0”，然后移入被測溶液，顯示值即為試樣的吸光度A值。（10）濃度C的測量:選擇開關(guān)由“A”至“C”,將已標(biāo)定濃度的溶液移入光路,調(diào)節(jié)“濃度”旋鈕使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值。將被測溶液移入光路，即可讀出相應(yīng)的濃度值。注意事項

1、波長在360nm以上時,可以用玻璃比色皿。波長在360nm以下時,使用石英比色皿。2、如果大幅度改變測試波長時,需要等數(shù)分鐘后,才能正常工作。（因波長由長波向短波或短波向長波移動時,光能量變化急劇,使倍增管受光后響應(yīng)緩慢，需一移光響應(yīng)平衡時間）。3、儀器在使用時,應(yīng)常參照上述操作方法中“4”和“7”進(jìn)行調(diào)“000.0”和“100.0”的工作。4、每臺儀器所配套的比色皿不能與其它儀器上的比色皿單個調(diào)換。5、本儀器數(shù)字顯示后背部帶有外接插座,可輸出模擬儀號。插座1腳為正，2腳為負(fù)接地線。6、對由于在運(yùn)輸搬運(yùn)過程中引起光源偏移和吸光度斜率的偏移,必須進(jìn)行調(diào)整。

UV-3150紫外可見近紅外分光光度計和RF-5301PC型熒光分光光度計的詳細(xì)操作說明參見吉林大學(xué)生物基礎(chǔ)實驗教學(xué)中心網(wǎng)站：上相關(guān)課件。752N紫外可見分光光度計測定；測定樣品前分別測定比色皿（空白溶液或蒸餾水）的讀數(shù)，記下數(shù)值。測定樣品時，分別減去其值，以此校正比色皿偏差。測定標(biāo)準(zhǔn)曲線時，需分別記下對應(yīng)濃度的吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；蛴嬎愠銮€斜率F.(一般吸光度值在0.1－0.7之間較好)測定樣品時，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過吸光度直接求濃度。也可在計算出F值后，在F狀態(tài)下，輸入F值，按SD鍵確定，然后自動回到C狀態(tài)，假如所測的A值為0。234，則此時顯示的C值為0351。使用后先關(guān)閉機(jī)器開關(guān)，再切斷電源。整理好后，蓋上儀器罩。注意事項在330－370nm用圓筒形濾光片套入樣品空鏡筒上，其他波長不用使用。在380－780可見區(qū)，200-380近紫外780－3000近紅外，10-200遠(yuǎn)紫外，3000－30000中紅外，30000－300000遠(yuǎn)紅外（電磁波譜）每次用后檢查樣品室是否有溶液溢出，擦干。不能把溶液，比色皿等放在儀器蓋上，以防污染。測樣時準(zhǔn)備好洗瓶，廢液缸，鏡頭紙，濾紙等，及時洗凈比色皿，使用后在培養(yǎng)皿中控干后，放入盒內(nèi)。填寫使用記錄本4、波長設(shè)定：輸入波長數(shù)值ENTER

5、T、A切換T/A1ENTER

T/A2ENTER

ΛGOTOT/AT/A3ENTER1ENTER輸入測定樣品序號分別按ENTER顯示打印輸出NOCONCABS樣品放入后按START/STOP進(jìn)行線性回歸運(yùn)算。分別打印輸出K值，B值R*R值樣品架插入樣品START/STOP顯示輸出值乘以初始濃度即得測定濃度T/AT/A7、輸入k和B值的操作：T/A3ENTER2輸入K值ENTER輸入B值ENTER

即可測定未知樣濃度8、掃描、定時打印注意事項：

拖動池架要到位。每次用后檢查樣品室內(nèi)是否有溶液溢出，擦干。注意檢查干燥劑，及時更換。不能把溶液放到儀器蓋上，以防污染。正確使用比色皿。及時洗凈比色皿，不可用手、濾紙、毛刷等摩擦透光面，只能用綢布和擦鏡紙擦。測樣時準(zhǔn)備好洗瓶，廢液缸，擦鏡紙、濾紙等。如實填寫實驗記錄本UVPC2401紫外分光光度計日本導(dǎo)津

技術(shù)指標(biāo)：1.測試波長范圍：190-900nm2.波長準(zhǔn)確度：±0.3nm精度：±0.1nm3.掃描速度：900-160nm/min4.測量方式：雙光速方式5.測光范圍：吸光度-4-5ABS透射率、反射率：0.0-999.9%6.測光準(zhǔn)確度：±0.002ABS(0-0.5ABS),±0.004ABS(0.5-1.0ABS),±0.3%T(0-100%)7.測光精度：±0.001ABS(0-0.5ABS),±0.002ABS(0.5-1.0ABS),±0.01%T,8.光源：50W鎢燈，氘燈（自動調(diào)整）9.分光器：單色器使用方法：

1．光譜掃描打開UVPC軟件

待光度計完成初始化后，選擇“AcquireMode（獲取模式）”。選擇“Spectrum（光譜）”。選擇“Configure（設(shè)置）”菜單。選擇“Parameters（參數(shù)）”顯示光譜參數(shù)設(shè)置框。設(shè)置參數(shù)確認(rèn)設(shè)置后選擇“OK”。用比色皿校正基線，兩個都裝空白校正零點。換靠近體側(cè)樣品池裝樣品放入樣品于樣品池，選擇“START”。顯示“Slewing…（回轉(zhuǎn)）”，然后讀出光譜。掃描完成后，出現(xiàn)輸入文件名對話框，在框里輸入小于8個字符的文件名。（不要超過8個字符，否則以系統(tǒng)缺省名命名，后綴為.SPC）。選擇“Save”保存數(shù)據(jù)。選擇“Discard（放棄）”數(shù)據(jù)不保存。要打印數(shù)據(jù)，先選“Presentation”菜單。再選“Plot”出現(xiàn)“PlotLayout”對話框。點擊“Items”復(fù)選框，若沒有出現(xiàn)“Graph”，則點選“Graph”。當(dāng)出現(xiàn)“PlotData（圖形數(shù)據(jù)）”對話框，選擇“Screen”（在“GraphTitle”下面）然后點擊“OK”即可。選擇“Print”打印出數(shù)據(jù)。（必須保證圖像打印機(jī)已正確連接上并已正確設(shè)置）。2、測量。選擇“AcquireMode”菜單。選擇“Quantitative（測量）”，自動彈出測量參數(shù)設(shè)置對話框。（任何時候改變采集模式均會出現(xiàn)參數(shù)設(shè)置對話框。）準(zhǔn)備至少3個吸光度值在0.05至1.0范圍內(nèi)的標(biāo)樣。設(shè)置參數(shù)：確認(rèn)設(shè)置后選擇“OK”。光度計驗證框出現(xiàn)“PhotometerSetup（光度計設(shè)置）”并顯示“Slewingto550nm（回轉(zhuǎn)到550納米）。當(dāng)樣品室已空，選擇“AutoZero（自動回零）”按鈕（或F1鍵）使儀器自動回零。放第一標(biāo)準(zhǔn)入樣品池，若圖片標(biāo)題沒有出現(xiàn)“Standard（標(biāo)準(zhǔn)）”字樣，則按F2鍵或按“Standard按鈕”。再選“Read”按鈕。此時出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)編輯對話框。輸入第一個標(biāo)準(zhǔn)濃度值，選“OK”或直接回車。同理放入第二、第三標(biāo)準(zhǔn)，讀出相應(yīng)數(shù)值。按以上方法放入未知樣并直接讀出數(shù)值。按以上方法放入未知樣并直接讀出數(shù)值。所有數(shù)據(jù)測完后，選“File”－>“SaveAs”－>“ListFilesofType”－>“Standard”。再輸入一個小于8個字節(jié)的文件名保存(若大于8個字符則以系統(tǒng)缺省名命名，后綴為.STD)。選“File”－>“SaveAs”－>“ListFilesofType”－>“Unknown”輸入一個小于8個字節(jié)的文件名保存未知樣數(shù)據(jù)。按“Exit（退出）”返回主窗口。3、時間掃描

選擇“AcquireMode（獲取模式）”菜單。選擇“TimeCourse”自動彈出時間掃描參數(shù)對話框供再檢查。參數(shù)設(shè)置設(shè)置確認(rèn)后選擇“OK”，自動彈出光度計設(shè)置框并顯示“Slewingto550nm”（回轉(zhuǎn)到550納米）。選擇“AutoZero（自動回零）”按鈕使儀器回零。選擇“START（開始）”繪出噪音圖。當(dāng)圖繪制完成后自動彈出對話框，輸入文件名（小于8個字符，若超出8字符則以系統(tǒng)缺省名命名<后綴為.TMC>）。在“EnterComment（輸入注釋）”中輸入注釋（按Tab鍵進(jìn)入此框）。選擇“Save”保存數(shù)據(jù)?？蛇M(jìn)行下一個通道的操作。選擇“AcquireMode（獲取模式）”菜單。選擇“TimeCourse”自動彈出時間掃描參數(shù)對話框供再檢查。參數(shù)設(shè)置設(shè)置確認(rèn)后選擇“OK”，自動彈出光度計設(shè)置框并顯示“Slewingto550nm”（回轉(zhuǎn)到550納米）。選擇“AutoZero（自動回零）”按鈕使儀器回零。選擇“START（開始）”繪出噪音圖。當(dāng)圖繪制完成后自動彈出對話框，輸入文件名（小于8個字符，若超出8字符則以系統(tǒng)缺省名命名<后綴為.TMC>）。在“EnterComment（輸入注釋）”中輸入注釋（按Tab鍵進(jìn)入此框）。選擇“Save”保存數(shù)據(jù)。可進(jìn)行下一個通道的操作。注意事項：樣品池使用揮發(fā)性物質(zhì)比色皿要扣蓋比色皿使用后要清理干凈使用時要遵照使用手冊來完成操作在更換保險絲或通電之間，應(yīng)關(guān)閉電源開關(guān)斷開電源線注意鎢燈和氫燈的正確使用Ultrospec4300Pro核酸蛋白檢測儀

操作規(guī)程

系統(tǒng)使用流程圖本系統(tǒng)所有功能的實現(xiàn)都可以用如下流程圖來加以說明，可參照該流程圖并根據(jù)需要進(jìn)行具體的參數(shù)設(shè)置。載入方法(LoadMethod)在Method（方法）菜單選項中打開方法列表選擇方法自定義方法(CustomizeMethod)載入數(shù)據(jù)（LoadData）選擇組模式（GroupMode）選擇數(shù)據(jù)運(yùn)行（DatatoRun）創(chuàng)建新方法（CreatNewMethod）選擇File－>New編輯方法（EditMethod）編輯普通參數(shù)（CommonParameter）編輯樣品參數(shù)（SampleParameter）保存設(shè)置（SaveMethod）點擊工具欄內(nèi)的運(yùn)行程序運(yùn)行應(yīng)用程序SwiftIII、開機(jī)與儀器參數(shù)設(shè)置插上電源，打開分光光度計后面的電源開關(guān)。打開電腦，雙擊桌面SwiftII快捷圖標(biāo)打開軟件。也可按開始程序SWIFTII，再選擇如下程序：SwiftII打開所有功能可直接通過點擊工具欄選擇打開其他窗口）。InstrumentControl打開儀器參數(shù)設(shè)置窗口Culture打開培養(yǎng)結(jié)果測定窗口FractionAnalysis打開片段分析窗口MutiWavelength打開多波長掃描窗口Quantification打開定量測定窗口ReactionKinetics打開反應(yīng)動力學(xué)窗口TimeDrive打開時間掃描窗口Wavescan打開波長掃描窗口Tm打開Tm值測定窗口軟件自動連接儀器。如連接成功，則根據(jù)所放置比色皿架的類型顯示相應(yīng)的結(jié)果，如放置8聯(lián)比色皿，則顯示“8Positioncellchanger”；若放置的為單一比色皿架，則顯示“singlecellchanger”。打開ICP，點擊File,選中Setup進(jìn)行儀器參數(shù)設(shè)置（第一次設(shè)置后就不用再進(jìn)行設(shè)置）。設(shè)置儀器序列號（見儀器背部銘牌）和選擇儀器類型，其余保持默認(rèn)設(shè)置即可。5、參數(shù)設(shè)置完成后，點擊確定回到主界面。II、單一樣品吸光度測定（ICP）打開ICP。可根據(jù)實驗要求進(jìn)行參數(shù)設(shè)定。設(shè)置好所需參數(shù)后，就可以進(jìn)行測量。將參比溶液放在藍(lán)色的比色皿架上，其余各架依次放上待測樣品，按“Cell1”圖標(biāo)，儀器將1號比色皿（藍(lán)色）自動調(diào)回原點，此時可按“Reference”鍵將其設(shè)為參比。點擊“NextCell”鍵可測得下一個樣品的數(shù)值，如此每點一次“NextCell”均可得到下一個樣品的數(shù)值直到測完所有的樣品。若樣品有7個以上，則取出測完的樣品，沖洗干凈比色池后再加入其余樣品進(jìn)行測定。樣品測定完成后，點擊“Cell1”按鈕，使比色皿架轉(zhuǎn)回原始位置。取出比色皿沖洗干凈，倒扣于桌面平皿中的濾紙上。點擊“Disconnect”按鈕斷開連接，關(guān)閉核酸蛋白檢測儀電源。III、光譜掃描（Wavescan）1、打開“Wavescan”（從SwiftII工具欄或開始－程序里打開）。2、任意情況下按“F1”或按菜單欄的“Help”就會出現(xiàn)詳細(xì)的幫助界面。3、點擊新建方法，進(jìn)行實驗參數(shù)設(shè)置。4、參數(shù)設(shè)定完成后，點擊工具欄的開始光譜掃描。5、掃描完成后，點擊“As”，輸入文件名，保存掃描的圖譜。6、在圖譜上點擊鼠標(biāo)右鍵，可以對掃描的曲線進(jìn)行一系列操作。點擊“Scale”能自動調(diào)整圖譜的縱坐標(biāo)以適應(yīng)所測的吸光度值。如預(yù)先將縱坐標(biāo)設(shè)為吸光度值3.5A，而掃描光譜所得到的最大吸光度值只有0.52A，使得所得圖譜在屏幕上顯示為很低的峰值，看不到各峰間的明顯變化。點擊“Scale”后，系統(tǒng)會自動調(diào)節(jié)縱坐標(biāo)稍比0.52大，使曲線基本占據(jù)整個平面。“Smoothing”能夠?qū)λ玫那€進(jìn)行光滑處理。能使圖譜間隔幾nm采一個點，使譜圖更光滑。如得到的曲線是鋸齒形的，點擊“Smoothing”后則被處理成光滑曲線。注意：由于改變了采樣間隔，得到的譜圖有可能于原始譜圖不一致，可能出現(xiàn)峰的變寬或者丟失，所以應(yīng)根據(jù)實際情況決定是否進(jìn)行光滑處理。點擊“PeakFind”可以進(jìn)行尋峰操作，點擊“Search”能自動找到曲線峰所在的波長值和吸光度值，并在譜圖上依次標(biāo)出各峰。點擊“Results”能顯示所搜索到峰值。點擊“Clear”能清除顯示的峰值數(shù)據(jù)。點擊“PeakArea”能標(biāo)出曲線的峰區(qū)域，可通過對峰面積大小的設(shè)定來確定顯示所要顯示的峰。若峰面積比所輸入值小，則不顯示為峰。點擊“Derivative”可進(jìn)行求導(dǎo)?？蓪呙璧那€進(jìn)行一階、二階、三階、四階導(dǎo)數(shù)處理，得到導(dǎo)數(shù)光譜。點擊“Label”可以添加標(biāo)簽。在所需添加標(biāo)簽的波長位置右擊鼠標(biāo)出現(xiàn)“Label”，選擇“Add”，點擊“OK”即可添上“Wavelength＝654.7－Abs＝0.802”形式的標(biāo)簽。點擊菜單欄的“Edit”，選擇“CopyGraph”可以拷貝光譜圖，選擇“CopyData”可以拷貝數(shù)據(jù)，可以將所拷貝的數(shù)據(jù)或光譜圖，粘貼到Word文檔中，進(jìn)行報告處理。IV、反應(yīng)動力學(xué)（ReactionKinetics）與時間掃描（TimeDrive）打開“RK”窗口。打開新建方法，設(shè)置實驗參數(shù)。在“Details”里設(shè)置“實驗題目（Title）”、“操作者（Operator）”、“注釋（Comment）”。在“RunOption（運(yùn)行操作）”菜單中根據(jù)實驗需要設(shè)置參數(shù)。（1）“Save”，運(yùn)行完成后程序自動保存數(shù)據(jù)（曲線圖）?！癝aveSpreadsheet”，完成后程序以表格數(shù)值形式保存數(shù)據(jù)?！癙rint”，完成后自動打印出結(jié)果。（2）“View”設(shè)置程序運(yùn)行過程中圖譜顯示方式，有以下三種方式：“IndividualGraph”，圖譜分開顯示。“OverlayGraph”，重疊顯示多個圖。“Spreadsheet”，顯示成一系列數(shù)值。（3）“Function（功能）”設(shè)置特殊功能?！癉erivative”，各圖自動生成導(dǎo)數(shù)圖譜?！癆utoScale”，自動平衡，實時顯示合適的坐標(biāo)軸?！癆utoSlope”，自動顯示斜率?！癉efineSlopeArea”，定義斜率區(qū)域。可定義實驗的一部分區(qū)域進(jìn)行斜率計算。5、參數(shù)設(shè)置完成后，點擊工具欄的開始反應(yīng)動力學(xué)測量。6、點擊菜單欄里“Method”選擇圖譜顯示方式（米氏常數(shù)的幾種計算方法）。7、點擊“As”，輸入文件名保存文件。V、定量測定（Quantification）點擊“SwiftII”工具欄里的“QA”，出現(xiàn)定量測定的窗口。點擊新建方法，出現(xiàn)方法設(shè)置界面?？筛鶕?jù)實驗具體要求進(jìn)行設(shè)置，選擇所需測定的方法（如標(biāo)準(zhǔn)曲線或者測定底物濃度）?？稍O(shè)置是否控溫，若控溫則在后面框中設(shè)置溫度。設(shè)置測定的波長位置。輸入標(biāo)題、操作者和對本次實驗的注釋。在標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置框中依次輸入標(biāo)準(zhǔn)的濃度。可以添加（Add）新的濃度值、編輯（Edit）已設(shè)置的濃度值或刪除（Remove）不需要的濃度值。在“RunOption（運(yùn)行操作）”菜單中根據(jù)實驗需要設(shè)置參數(shù)。（1）“Save”，運(yùn)行完成后程序自動保存數(shù)據(jù)（曲線圖）?！癝aveSpreadsheet”，完成后程序以表格數(shù)值形式保存數(shù)據(jù)?！癙rint”，完成后自動打印出結(jié)果。（2）在“RepeatReference”中設(shè)置是否重復(fù)測定參比，選中后若定義樣品數(shù)，則所設(shè)數(shù)目包括參比數(shù)。6、所有設(shè)置完成后點擊，開始測定標(biāo)準(zhǔn)溶液，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線。7、樣品測定，將參比溶液放入?yún)⒈瘸刂校瑯悠贩旁跇悠烦貎?nèi)，點擊自動進(jìn)行樣品測定，若有多個樣品，也可依次顯示所有樣品測定結(jié)果。VI、多波長測定打開多波長測定窗口。打開新建方法，出現(xiàn)方法設(shè)置界面。在上圖“AddWavelength(添加波長)”位置設(shè)置新的波長。通過重復(fù)選擇“AddWavelength”可以添加多個波長值。添加公式，步驟如下：點擊“AddEquation（添加公式）”。點擊“Wavelength”，選擇要計算的值。選擇運(yùn)算符號（+、－、×、÷），用“<－”可以清除一個符號，選則“Clear”清除已編輯的公式。重復(fù)（2）、（3）操作，添加下一個要加入公式的數(shù)。公式編輯完成后，點擊“Result”計算結(jié)果。公式添加完成后，點擊“確定”回到主菜單，點擊開始多點測量測量完成后，出現(xiàn)結(jié)果。點擊菜單欄的“Calculator”出現(xiàn)Tm計算器，可計算核酸的Tm值和分子量VII、片段分析（FA）打開FA片段分析窗口。選擇“Run>Default”，點擊“DefineSamples”可以設(shè)置樣品數(shù)量。3、設(shè)置完成后，點擊工具欄的運(yùn)行。4、運(yùn)行完成后，可以選擇柱狀圖顯示吸光度值，也可以顯示各樣品所占百分比。VIII、培養(yǎng)結(jié)果測定（Culture）打開“Culture”窗口。新建方法，進(jìn)行波長（Wavelength）和樣品數(shù)（Sample）等設(shè)定。3、參比運(yùn)行時間設(shè)定，可以不加參比選“None”，可以在開始樣品測定前先測量參比，選“BeforeEachRun”。也可以選計算結(jié)果前“BeforeEachReading”。4、在“PostRunDisplay”窗口可以設(shè)置縱坐標(biāo)格式（OD或LogOD）和值以及橫坐標(biāo)顯示格式（小時，分，秒），測量時間。5、測量過程可顯示實時曲線。 6、點擊菜單欄的“View>Results”顯示數(shù)據(jù)。IX、Tm值的測定打開Tm值測量窗口。點擊新建方法或者打開已保存的方法。點擊“PostRunDisplay”設(shè)置運(yùn)行過程的顯示窗口?？梢栽O(shè)定窗口背景為格子、交叉、空白等顯示形式。在此界面設(shè)置縱坐標(biāo)吸光度值范圍。參數(shù)設(shè)置完成后，點擊運(yùn)行，同時顯示掃描曲線界面。4、在譜圖上點擊鼠標(biāo)右鍵，出現(xiàn)快捷菜單?？筛鶕?jù)相應(yīng)菜單進(jìn)行操作。5、同“Wavescan”、“Reaction”，可以保存光譜數(shù)據(jù)（Spreadsheet），進(jìn)行求導(dǎo)，光滑處理。

RF-5301PC型熒光分光光度計

使用方法光譜1.打開計算機(jī)和RF-5301PC熒光分光光度計開關(guān)。Windows啟動后，雙擊RF-530XPC，自檢。2.從“AcquireMode”菜單中選擇[Spectrum]進(jìn)入Spectrum模式。(1)從另外的數(shù)據(jù)獲取模式中進(jìn)入Spectrum，會自動顯示光譜參數(shù)對話框。(2)如果當(dāng)前模式已經(jīng)是Spectrum模式，從“Configure”菜單中選擇[Parameters],可顯示SpectrumParameters對話框。SpectrumParametersSpectrumType:○Excitation⊙Emission○SynchronousExWavelength:350nmEMWavelengthRange:Start350End450RecordingRange:Low0.000High50.000ScanningSpeed:MediumSamplinglnterval(nm):0.2Slitwidth(nm):EX5EM5Sensitivity:⊙High○LowResponseTime[sec]:AutoRepeatScan…AutoFile…OKCancel.確定所有參數(shù)后點擊OK。4.將裝有蒸餾水的樣品池放入池槽中，點擊<START>開始掃描。5.掃描結(jié)束后，會出現(xiàn)對話框，這時輸入文件名。將光標(biāo)移至Comment文本框，輸入注釋。點擊<SAVE>，將數(shù)據(jù)保存。6.點擊鼠標(biāo)右鍵，會出現(xiàn)一個菜單，選擇[Radar]，從副菜單中選擇[BothAxes]，自動建立新的圖形限制。7.如果想擴(kuò)大光譜上某一特定區(qū)域，用鼠標(biāo)點此區(qū)域的左上角，并拖動鼠標(biāo)至我們想要擴(kuò)大的區(qū)域范圍?；蛘邚暮衃Rader]的相同菜單中選擇[Limit]（點擊鼠標(biāo)右鍵），設(shè)定新的圖形限制，在出現(xiàn)的對話框中輸入上限及下限。8.點擊鼠標(biāo)右鍵，讀取鼠標(biāo)所指位置的波長及熒光強(qiáng)度。之后選擇[CrossHair]→[Display]。QuanlitativePeramelersMethod:ConcentrationMultipointWorkingCurveUnits:ppbEXWavelength:350.0Range:0.000to100.00EMWavelength:450.0RecordingRangeSlitWidth[nm]:EX5

Low0.000High1000.00EM5Sensitivity:⊙High○LowResponseTime:Auto□AutoScanModeRepetitions:1OKCancel9.移動鼠標(biāo)所指區(qū)至想要的位置。10.選擇Display刪除鼠標(biāo)所指區(qū)域。11.在File菜單中選擇Save，儲存獲得的數(shù)據(jù)。10.5.3.1.2定量分析1.從“AcquireMode”菜單中選擇[Quantitative]，進(jìn)入Quantitative模式，會自動顯示Quantitative參數(shù)對話框。2.按圖2所示確定獲得參數(shù)當(dāng)在method下方選擇“MultiPointWorkingCurve”時，會出現(xiàn)MultiPointCurve對話框。按圖3所示進(jìn)行選擇。MultipointWorkingCurveOrderofCurve…⊙Ist○2nd○3rdZerolnterception…○yes⊙OKCancel3.確定所有參數(shù)后點擊<OK>鍵。4.將裝有空白樣品的樣品池放入池槽中，點擊<AutoZero>設(shè)定零點。5.將第一個標(biāo)準(zhǔn)樣裝入池槽中并點擊<Read>，會出現(xiàn)StandardSampleDataEdit對話框。輸入標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)樣的濃度值并點擊<OK>鍵。6.重復(fù)第五步繼續(xù)處理第二個標(biāo)準(zhǔn)樣。一旦獲得了足夠多的標(biāo)準(zhǔn)樣數(shù)據(jù)，在屏幕上便會自動出現(xiàn)工作曲線。點擊鼠標(biāo)右鍵，在出現(xiàn)的菜單中選擇[Rader]→[BothAxes]，便可自動繪圖。7.在工作曲線繪制完成后，可定量確定未知樣的濃度。點擊<Unknown>鍵，出現(xiàn)UnknownAvquisition屏幕。TimeCourseParemetersEXWavelength:350.0RecordingRangeEMWavelength:397Low:-5High:5SlitWidth(nm):EX5EM5Sensttivity:⊙High○LowResponseTime:AutoReactionTime:60.00TimingModeUnits…AcquisitionRate:0.02⊙Auto○Manual○HoursNumberofReadings:3001○Miuntes⊙SecondsOKCancel8.將裝有未知樣品的池放入池槽中，點擊<Read>開始濃度的定量測定。9.在File菜單中選擇Save，儲存獲得的數(shù)據(jù)。10.在出現(xiàn)的對話框中輸入標(biāo)準(zhǔn)樣和未知樣的文件名，點擊<OK>鍵。10.5.3.1.3時間程序1.從“AcquireMode”菜單中選擇[TimeCourse]，進(jìn)入TimeCourse數(shù)據(jù)獲取模式，會自動顯示TimeCourse參數(shù)對話框。2.按圖4所示確定獲得參數(shù)。3.確定所有參數(shù)后點擊<OK>鍵。4.將裝有蒸餾水的樣品池放入池槽中，點擊<AutoZero>設(shè)定零點。以下步驟是基于時間進(jìn)程數(shù)據(jù)是在菡餾水的Raman峰的基礎(chǔ)上獲得的假設(shè)。5.點擊Start鍵開始收集數(shù)據(jù)。在數(shù)據(jù)收集完之后，出現(xiàn)對話框，輸入獲得的數(shù)據(jù)的文件名。移動光標(biāo)至文本框，輸入注釋。當(dāng)所有輸入完成后，點擊<Save>保存數(shù)據(jù)，若點擊<Discerd>，所有輸入的數(shù)據(jù)將丟失。6.從File菜單重選擇<Save>，儲存獲得的數(shù)據(jù)。

注意事項1.熒光光度計氙燈壽命為500小時，超過使用時間必須更換，否則可能爆炸。2.若長時間不測量，應(yīng)將光度計開關(guān)旁邊的氙燈開關(guān)撥到關(guān)的位置。3.使用熒光分光光度計時要保證樣品室絕對干凈，小心放入樣品，放入比色皿前一定要先用擦鏡紙將比色皿外表面擦干凈，否則會污染樣品池和光度計外表面。4.熒光分光光度計使用的比色皿是四面透光的比色皿，各面均為光滑平面，使用時應(yīng)手持比色皿對角的棱，不要讓手碰到任何一面。5.比色皿長時間使用后，應(yīng)用鉻酸洗液泡洗一次。6.儀器自檢和掃描的過程中，不要打開樣品室蓋。7.軟件不會自動保存數(shù)據(jù)，所有數(shù)據(jù)要保存都必須點擊“Save”或者“SaveAs”進(jìn)行另存。否則數(shù)據(jù)會丟失。UV-3150紫外可見近紅外分光光度計

操作方法儀器的聯(lián)機(jī)及界面簡介1.插上電源，打開光度計前面的電源開關(guān)。2.雙擊計算機(jī)桌面UVProbe圖標(biāo)，打開UVProbe軟件，點擊UVProbe中“Connect”圖標(biāo)聯(lián)機(jī)，出現(xiàn)自檢畫面。3.如自檢完全部綠燈亮，則點擊“OK”進(jìn)入系統(tǒng)。若出現(xiàn)紅燈亮，可關(guān)掉光度計重新連接，若仍未通過自檢，應(yīng)立即報告儀器負(fù)責(zé)老師。4.完全通過并進(jìn)入系統(tǒng)，出現(xiàn)UVProbe菜單欄和工具欄。UVProbe有四大主要模塊，包括光譜掃描模塊、光度測量模塊、時間掃描模塊和報告生成器。每種模式都可以直接點擊后面的方法設(shè)定按鈕設(shè)置方法。光譜掃描（Spectrum）1.點下光譜掃描圖標(biāo)，出現(xiàn)光譜掃描界面。2.點擊方法按鈕，出現(xiàn)方法設(shè)置對話框。在此可以設(shè)置掃描波長范圍，儀器的最大范圍為3200～190nm?？梢栽O(shè)置掃描速度，一般可選中速（Medium）或快速（Fast）進(jìn)行掃描。采樣間隔表示光度計每隔多少nm讀一個吸光度值，如沒有特殊要求，選擇自動即可?？蛇x擇是否重復(fù)掃描曲線，若重復(fù)則設(shè)置重復(fù)次數(shù)和間隔時間。3.點擊“SamplePreparation”輸入樣品信息。包括樣品的質(zhì)量、體積、稀釋倍數(shù)和測量光程等。也可以輸入樣品的其他信息。4.點擊“InstrumentParameters（儀器參數(shù)）”設(shè)置測量方式和儀器的一些參數(shù)。在測量模式中可選擇“Transmittance（透過率）”、“Absorbance（吸光度）”、“Energy（能量）”和“Reflectance（反射）”，其中Reflectance一般用積分球測定固體樣品時使用。狹縫設(shè)置在3200～800nm下設(shè)為5nm，在800～190nm設(shè)為2nm。若包括這兩個范圍的波長如1500～500nm則選擇狹縫為5nm。5.換燈和檢測器可根據(jù)所測樣品進(jìn)行設(shè)置，換燈在393～282nm范圍內(nèi)任意值均可，換檢測器在895～750nm范圍內(nèi)任設(shè)一個值即可。但換燈和檢測器由于儀器進(jìn)行機(jī)械的移動，會造成信號波動較大，稱儀器噪音大，此時所得掃描曲線誤差較大，所以所設(shè)波長應(yīng)該避免在樣品吸收峰位置以免影響測定值。6.所有參數(shù)設(shè)置完成后，兩個樣品架均不放置樣品或兩個均放上同樣的空白溶液，點擊“Baseline”，開始進(jìn)行基線校正，儀器掃描完成后，點擊“λGoToWL”將波長轉(zhuǎn)到750nm，點擊“AutoZero”把750nm的波長設(shè)為0。點擊“Start”再次掃描，若得出曲線最值均小于0.001，則認(rèn)為基線平坦，若數(shù)值較大，則將750nm吸光度設(shè)為0重新進(jìn)行基線掃描。7.基線校正完成后，取出樣品架的空白溶液，放入樣品溶液，點擊“Start”開始掃描曲線。掃描完成后，出現(xiàn)保存路徑框和文件名框，設(shè)置好后出現(xiàn)掃描曲線。8.曲線掃描完成后，在譜圖上點擊鼠標(biāo)右鍵，出現(xiàn)快捷菜單。點擊“AutoScale”可是軟件自動調(diào)節(jié)圖像坐標(biāo)使之適合掃描所得數(shù)據(jù)。點擊“CrossHair>Display”鼠標(biāo)顯示為交叉線，用鼠標(biāo)將交叉線放到曲線上某點即可顯示該點的波長和吸光度值。9.點擊“Label”可以在譜圖上添加標(biāo)簽，可在其中輸入文本以標(biāo)記譜圖。點擊“Legend”出現(xiàn)各數(shù)據(jù)保存圖，若在前面框里勾選該光譜數(shù)據(jù)，則在左面重疊圖上顯示其曲線。10若從右鍵快捷菜單中選擇“Customize（自定義）”，可以自定義曲線顯示顏色還可定義坐標(biāo)軸的數(shù)值。11.得出曲線后可以對譜圖進(jìn)行一系列的處理。(1)點擊“DataPrint（顯示數(shù)據(jù)）”圖標(biāo)可以將譜圖曲線直接顯示為數(shù)值。(2)點擊“Manipulate（運(yùn)算）”圖標(biāo)，可以進(jìn)行加減乘除、差譜、扣除空白、倒數(shù)光譜、對數(shù)光譜等處理。(3)點擊“PeakPoint（顯示峰值）”按鈕顯示“波峰”和“波谷”的數(shù)值。(4)點擊“PointPick”圖標(biāo)，輸入要顯示的波長值，立即顯示出所輸入波長處的吸光度值。(5)點擊“PeakArea”，設(shè)定峰閾值，即顯示大于此閾值的峰區(qū)域。(6)點擊“Sewingbox（裁縫）”圖標(biāo)，可以進(jìn)行譜圖的裁剪和縫合。12.光譜曲線掃描完成后數(shù)據(jù)實際直接保存在內(nèi)存中，并沒有保存到硬盤上，此時若關(guān)閉窗口，電腦會提示“SomeSpectrumdatahasnotbeensaved!Doyoustillwanttoexitandlostunsavedchange？（還有光譜數(shù)據(jù)尚未保存，你是要離開而不保存數(shù)據(jù)嗎？）”選擇“No”返回主界面保存所有數(shù)據(jù)。光度測量（Photometric）1.點下“Photometric”圖標(biāo)，出現(xiàn)光度測量的選擇圖標(biāo)和方法設(shè)置按鈕。2.點擊“Method”按鈕設(shè)置方法，在“Wavelength（波長選擇）”中選擇點測量（Point）或范圍（Range）測量。范圍測量可以選擇以某一段波長范圍內(nèi)的峰值、谷值、最大、最小或面積值作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的點。3.以“Point”為例，點擊“下一步”，在“Type”中選擇單點、多點曲線。在“Formula（公式）”中選擇“FixedWavelength”（固定波長）、并選擇濃度單位。4.在對話框中選擇數(shù)據(jù)獲取方式，可以通過儀器測量，也可通過手動輸入值。在“Sample”中輸入每種相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的個數(shù)（如每個樣品都重復(fù)一次，則輸入“2”），注意這里所說的Sample（樣品）表示作標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品，而不是將要測定的未知樣。5.點擊“下一步”，同4一樣設(shè)置未知樣的個數(shù)。6.點擊“下一步”輸入樣品保存路徑文件名、標(biāo)題、分析者以及對實驗的注釋。7.點擊“完成”完成對方法的設(shè)定。出現(xiàn)方法對話框，以后點擊工具欄的也可出現(xiàn)此對話框，并可以直接修改參數(shù)設(shè)置。8.填充標(biāo)準(zhǔn)表。點擊標(biāo)準(zhǔn)表的任何位置激活標(biāo)準(zhǔn)表。，在表中輸入“SampleID（樣品ID）”和“Conc（濃度）”，點擊空白框出現(xiàn)下一行。數(shù)據(jù)來源若選擇“UserEntry（用戶輸入）”則可以在“WL800”等列內(nèi)輸入吸光度值。若選擇的是“Instrument（儀器測量）”則只能輸入樣品ID和濃度。9.輸入完成后，可以讀取標(biāo)準(zhǔn)樣品的數(shù)據(jù)。將標(biāo)準(zhǔn)樣品依次放入樣品室。點擊“ReadStd”開始測量。（注：當(dāng)顯示下列信息時，請點擊“確定”。“Thereisnoassociatedblankforthisstandard.Doyouwishtocontinue(該標(biāo)準(zhǔn)物相應(yīng)的空白，是否繼續(xù))？”）。分光光度計將分別測定個波長的吸光度值，UVProbe將自動添加所測各值和計算結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)表中。10.可以改變曲線級數(shù)，同時曲線形狀發(fā)生改變。點圖標(biāo)，選“Calibration”，在其中的“Orderof”后的下來框中選擇需要的級數(shù)。11.選擇“As”輸入文件名保存標(biāo)準(zhǔn)表。12.同輸入標(biāo)準(zhǔn)表的方法，在“SampleTable（樣品表）”中輸入樣品ID。13.點擊“λGoToWL”設(shè)置測量需要的波長，點擊“ReadUnk”測定未知樣，如此反復(fù)，測量所有的未知樣值。濃度由標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得。14.得出標(biāo)準(zhǔn)曲線后，在曲線圖上點擊右鍵，選擇“Properties（屬性）”出現(xiàn)統(tǒng)計（Statistics）顯示框。勾選要顯示的選項，在標(biāo)準(zhǔn)曲線的左下方即顯示對應(yīng)的統(tǒng)計結(jié)果。15.對標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行四則運(yùn)算和倒數(shù)、對數(shù)、A/T轉(zhuǎn)換。在工具欄里點擊按鈕，在“Arithmetic”中進(jìn)行“加減乘除”等操作。在“Transforms（轉(zhuǎn)換）”框中進(jìn)行倒數(shù)、對數(shù)、A/T轉(zhuǎn)換。在“ColumnName”中輸入列名，在“SourceColumn”中選擇要進(jìn)行轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)行。在“Operator”中選擇轉(zhuǎn)換方法，其中倒數(shù)為“1/Y”、對數(shù)為“Log10”、A/T轉(zhuǎn)換為“Abs>TT>Abs”。16.點擊，在出現(xiàn)的界面上選擇可以自定義公式進(jìn)行計算。動力學(xué)測量（Kinetics）1.點擊UVProbe工具欄里打開動力學(xué)測量窗口，點擊方法按鈕方法設(shè)置界面。2.當(dāng)選擇自動計時方式時，設(shè)定時間總量以自動計算時間周期和讀取次數(shù)。若選擇手動方式，輸入時間周期和讀取次數(shù)。3.選擇波長設(shè)定類型，可以選擇“SingleWavelength（單波長）”進(jìn)行單波長下時間曲線掃描、選擇“W1-W2”作兩個不同波長下的時間掃描差譜、選擇“W1/W2”作兩個不同波長下時間掃描的比值。4設(shè)置好動力學(xué)方法。5.放入兩個相同的空白溶液，進(jìn)行基線校正，基線校正完成后，點擊“Start”開始掃描曲線，得到掃描曲線。6.掃描完成時，彈出有輸入文件名、分析者、注釋項的對話框。輸入各項，點擊完成。7.點擊選點檢測工具，在“Time”中輸入要選的點，如10s、20s、30s等，點擊右邊空白框，即出現(xiàn)對應(yīng)的吸光度值。點擊鼠標(biāo)右鍵，選中“MarkPoints”，則在時間掃描圖像上對應(yīng)有標(biāo)記，在“Properties”中可以對標(biāo)記的項目進(jìn)行編輯。

8.點擊“MainTable（主表）”圖標(biāo)，出現(xiàn)主表表框。主表可以顯示保存在內(nèi)存中的當(dāng)前設(shè)置值，可以通過設(shè)置主表的屬性，選擇顯示或者隱藏主表中某些內(nèi)容。9.點擊工具欄中“ActivityTable”圖標(biāo)，出現(xiàn)活度顯示表。10.“DataPrint（數(shù)據(jù)打?。?、“Manipulate（數(shù)據(jù)處理）”、“PeakPick（尋峰）”、“PeakArea（峰區(qū)域）”和“SewingBox（裁縫）”用途與光譜掃描相同。11.米氏常數(shù)的測定。12.按前述方法測定多組時間掃描值，保存好數(shù)據(jù)。13.打開“MainTable（主表）”，從“File”里選擇“Open”依次打開各組值。14.點擊工具欄上“EnzymeTable（酶表）”圖標(biāo)，打開酶表。用鼠標(biāo)全選主表中各列，拖入酶表中。15.自定義動力學(xué)圖像。在酶圖像面板上點擊右鍵，在快捷菜單中選擇“Customize（自定義）”，可以進(jìn)行酶動力參數(shù)表示方法的轉(zhuǎn)換。報告生成器（Report）報告生成器添加對象有兩種方式，嵌入對象和鏈接對象。嵌入對象到報告指將對象復(fù)制到報告中且復(fù)制的對象不再與對象的源模塊有任何聯(lián)系，當(dāng)修改模塊中的對象時，報告中復(fù)制的對象不受影響；且當(dāng)保存報告時仍舊保存復(fù)制的數(shù)據(jù)。嵌入對象是一個擁有自己數(shù)據(jù)的獨(dú)立實體。鏈接對象只是在報告生成器中添加一個鏈接，該對象只有在打印和預(yù)覽時才從模塊中接受數(shù)據(jù)，除此以外它沒有自己的數(shù)據(jù)也不顯示任何數(shù)據(jù)。對數(shù)據(jù)的修改和編輯完全依賴于與對象鏈接的模塊。保存報告時也只是保存對象的描述和鏈接，而沒有數(shù)據(jù)被保存。1.點下UVProbe工具欄中的“Report”圖標(biāo)，可以進(jìn)行報告編輯。2.在報告的粉色框內(nèi)即為編輯報告的頁面。可以通過“View>Setting”設(shè)置柵格間距，可以更改柵格顯示顏色等。可通過“Setting”更改頁邊距。3.點擊報告頁面左邊快捷工具圖標(biāo)，可直接插入圖標(biāo)所鏈接的對象?？旖莨ぞ邫谟小拔谋緦ο蟛僮鞴ぞ摺?、“動力學(xué)對象操作工具”、“光度測量對象操作工具”、“光譜對象操作工具”。可在每個文本中添加多個對象。鏈入的對象由于不能直接顯示在報告里，可以通過打印預(yù)覽顯示報告對象的大小，然后回到報告生成頁面通過拉動改變鏈接對象的大小。4.在報告中嵌入對象。把要嵌入報告的對象直接復(fù)制，回到報告編輯頁面，點擊“Edit>Paste”（或Ctrl+V）粘貼到報告頁面即可。5.設(shè)置報告標(biāo)題。點擊文本對象圖標(biāo)，在文本框中輸入標(biāo)題。將文本框放在頁面頂部。在文本對象上單擊右鍵選擇“Properties”可以進(jìn)行字體和文字大小的選擇。點擊“As”保存報告。點擊“”進(jìn)行報告打印。

注意事項1.光度計燈源壽命有限，若長時間不測量，應(yīng)通過UVProbe軟件斷開連接（點擊“Disconnect”），然后關(guān)閉光度計電源。2.使用分光光度計時要保證樣品室絕對干凈，小心放入樣品，放入比色皿前一定要先用濾紙和擦鏡紙將比色皿外表面擦干凈，不要污染樣品池和光度計外表面。3.儀器自檢和掃描的過程中，不要打開樣品室蓋。4.軟件不會自動保存數(shù)據(jù)，所有的數(shù)據(jù)要保存都必須點擊“Save”或者“SaveAs”進(jìn)行另存。否則數(shù)據(jù)會丟失。紅外光譜儀(0.75～1000m)使用方法開機(jī)啟動軟件IRsolution中文版（測定透明物質(zhì)用下列方法）樣品處理：1、液體放入中間鉛片窗片＋鉛片＋窗片2、固體打片：溴化鉀＋樣品在研缽里混勻（可參考量為200：2或300：10）3、用鏡片放入壓片機(jī)中，調(diào)壓力80-90，維持5-6分鐘4、放入壓板內(nèi)測量點擊測定初始化，看（TNT)是否連接成功設(shè)定參數(shù)透過率：T%變跡法：Happ-Genzel

掃描次數(shù)：10次分辨率：4.0范圍：400-4000光束：內(nèi)部；監(jiān)測器：標(biāo)準(zhǔn)；鏡面速度：2.8mm/sec常規(guī)：自動；監(jiān)控：1；方式：能量；存文件名(英文）點擊背景（空氣)壓片法用（溴化鉀）監(jiān)測掃描掃完后再點擊測定大于50以上，點擊停止（如果不好，點擊自動調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)，如果還不好點粗調(diào)，后再調(diào)細(xì)調(diào)）把樣品放入點擊樣品測定，一般圖譜形式Y(jié)-軸方式處理峰表打印時點擊文件打印預(yù)覽選測模板打開Spectrum-i.ptmA4紙打印ATR測定對于微量的物質(zhì)可采取ATR法測定點擊測定快啟動附件點OK自動調(diào)整數(shù)據(jù)背景測定可用空氣或空白溶液打印同上注意事項分速器的干燥劑要經(jīng)常更換測定透明溶液不能含水可用CCl4清洗使用ATR法測定時可用無水乙醇清理硫化鋅晶體。調(diào)節(jié)時緩慢調(diào)節(jié)，注意不能壓壞晶體思考題

1、干擾測定結(jié)果的因素有哪些？2、為了更好的維護(hù)和保養(yǎng)儀器，我們在使用的過程中應(yīng)該注意哪些方面？3、熒光分光光度計和紫外可見分光光度計有何異同？

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