標準解讀

《NY/T 543-2002 牛流行熱微量中和試驗方法》是一項農業行業標準，主要針對牛流行熱病毒的檢測提供了詳細的實驗指導。該標準適用于獸醫實驗室對疑似感染牛流行熱病毒樣本進行微量中和試驗，以評估血清或疫苗中的抗體水平。

根據此標準，試驗過程首先需要準備一系列不同稀釋度的待測血清樣本，并將這些樣本與已知量的牛流行熱病毒混合，在適宜條件下共同孵育一段時間。其目的是讓血清中的特異性抗體與病毒結合，從而阻止病毒在細胞培養物上的生長。之后，將上述混合物接種到敏感細胞單層上，通過觀察細胞病變效應（CPE）來判斷血清是否能夠中和病毒及其效價高低。

此外，標準還規定了對照組設置、結果判定原則以及實驗條件控制等具體要求。例如，必須設立病毒對照孔以確認所用病毒具有足夠的活性；同時，還需要有陰性血清對照和陽性血清對照來保證實驗的有效性和準確性。最終，依據各稀釋度下是否出現CPE來確定待測樣品的最大無毒害稀釋倍數，以此作為衡量抗體滴度的標準之一。

該文件對于促進我國畜牧業健康發展、加強動物疫病防控體系建設具有重要意義。


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  • 現行
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  • 2002-08-27 頒布
  • 2002-12-01 實施
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文檔簡介

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中華人民共和國農業行業標準

燉—

牛流行熱微量中和試驗方法

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┐┐發布┐┐實施

中華人民共和國農業部發布

燉—

前言

牛流行熱（簡稱ＢＥＦ）又稱牛暫時熱、三日熱、一日熱、僵硬病等，本病在亞、非和大洋洲許多國家均

有發生。該病是由彈狀病毒科暫時熱病毒屬牛流行熱病毒引起的一種急性、熱性傳染病，呈周期性流行。

在發病期間，對牛的產奶量、使役能力、增重、精液品質都有嚴重影響，還可導致少數病牛癱瘓，流產甚至

死亡。嚴重危害養牛業的發展。

本標準是根據我國科研成果，與澳大利亞合作研究成果和我國的實踐經驗制定的。

本標準的附錄Ａ、附錄Ｂ、附錄Ｃ為規范性附錄，附錄Ｄ為資料性附錄。

本標準由農業部畜牧獸醫局提出。

本標準由全國動物檢疫標準化技術委員會歸口。

本標準起草單位：中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所。

本標準主要起草人：白文彬、嚴雋端。

Ⅰ

燉—

牛流行熱微量中和試驗方法

范圍

本標準規定了牛流行熱微量血清中和試驗技術。

本標準適用于牛流行熱的診斷、免疫監測和流行病學調查。

微量血清中和試驗

器材

營養液和００５％胰酶ＥＤＴＡ（簡稱ＡＴＶ）液，配制方法見附錄Ａ。

細胞及其制備、傳代、計數方法，見附錄Ｂ。

抗原（指示毒）、標準陽性血清、陰性血清由法定單位提供，按說明書使用。抗原毒價以及工作抗

原（１００ＴＣＩＤ５０）測定方法見附錄Ｃ。

微量滴定板：無菌帶蓋９６孔微量滴定板（簡稱微量板）。

微量加樣器：２５μＬ、５０μＬ及１００μＬ單道和多道加樣器，加樣塑料滴頭（裝量為２５μＬ～

１００μＬ，與加樣器配套使用）。

二氧化碳培養箱。

操作方法

滅活

被檢血清以及陰、陽性血清用前均于５６℃水浴鍋中滅活３０ｍｉｎ。

準備

制備工作抗原（指示毒）方法（見第Ｃ１章），將已知毒價的合格種毒用生長液（見第Ａ１章）稀釋成

１００ＴＣＩＤ５０燉ｍＬ。

定性試驗

向微量板的每孔各加２５μＬ生長液。

在第一排加被檢血清，每份占２孔，每孔２５μＬ，混合均勻，即成２倍稀釋。

用多道加樣器從第１孔取２５μＬ液體對應移入第２排孔內，混勻即成４倍稀釋。再從孔內吸

出２５μＬ丟棄。

每孔加工作抗原２５μＬ，混勻置３７℃孵育６０ｍｉｎ。

每孔加細胞懸液１００μＬ（３００００個細胞）。細胞計數方法見第Ｂ３章。

試驗對照系統的設置。每批試驗的對照系統的設置：標準陽性血清，從第１列至第６列，每列

４孔，逐列稀釋（即２倍～６４倍），標準陰性血清、細胞對照和病毒對照各１列４孔。同時對本試驗使用的

工作抗原，隨同試驗再次進行測定。

用滅菌的蓋子蓋上微量板，置３７℃二氧化碳（ＣＯ２）培養箱內，培養５ｄ。從第３ｄ起逐日記錄

細胞病變效應（ＣＰＥ）。

結果判定：標準陽性血清中和抗體價≥６４，標準陰性血清、病毒對照排各孔均出現ＣＰＥ，工作

抗原含量滴定在規定的范圍之內（ＣＰＥ出現的孔數與毒價查閱方法見第Ｄ１章），細胞對照孔正常情況

下，４倍稀釋的被檢血清列，兩孔都出現ＣＰＥ時，判為陰性；僅１孔出現ＣＰＥ，被判為可疑

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