飽食、饑餓、腎上腺素、胰島素對(duì)肝糖原含量的影響組號(hào)：34成員：王陣華、王振國、王瑤實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證影響肝糖原含量的幾種因素2、學(xué)習(xí)肝糖原的定量測定方法實(shí)驗(yàn)原理

肝臟是哺乳動(dòng)物調(diào)節(jié)血糖濃度的重要器官，對(duì)血糖濃度變化很敏感。當(dāng)動(dòng)物飽食后，為防止血糖濃度過高，肝糖原合成增強(qiáng)，儲(chǔ)備糖；饑餓時(shí)為防止血糖濃度下降，肝糖原分解，釋出葡萄糖。血糖濃度的恒定受激素信號(hào)的調(diào)節(jié)控制，如腎上腺素和胰島素是作用相互抗拮的兩種激素，通過一系列酶促機(jī)制，調(diào)節(jié)血糖，影響肝糖原的含量：腎上腺素加速糖原分解，使血糖水平升高；胰島素則促進(jìn)糖原合成，是體內(nèi)唯一降低血糖濃度的激素。糖原是一種高分子化合物，微溶于水，無還原性。提取肝糖原時(shí)利用三氯乙酸破壞肝組織中的酶，使肝組織中的蛋白質(zhì)沉淀，而糖原仍留在溶液中。加熱時(shí)，糖原被酸水解為葡萄糖。蒽酮試劑中的濃硫酸可使糖原水解的葡萄糖進(jìn)一步脫水生成糠醛衍生物，后者和蒽酮作用形成的藍(lán)綠色物質(zhì)在620nm處有最大吸收值，可與同法處理的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)比色液進(jìn)行肝糖原含量的測定。實(shí)驗(yàn)器材與試劑器材：可見分光光度計(jì)、玻璃勻漿器、注射器、50ml容量瓶、移液器、刻度移液管、剪刀、鑷子、小漏斗、濾紙、解剖盤、小白鼠（成年，30g左右）試劑：5%（m/v)三氯乙酸溶液0.9（m/v）生理鹽水葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（含純葡萄糖0.1mg/ml)

腎上腺素：

（將0.1%（m/v）腎上腺素注射液用生理鹽水準(zhǔn)確稀釋50倍，使其濃度為20微克每毫升胰島素：將市售胰島素用生理鹽水稀釋至0.1U/ml蒽酮試劑：取蒽酮2g，溶于1000ml80%（V/V）硫酸中，當(dāng)日配制使用實(shí)驗(yàn)步驟1.處理動(dòng)物將成年小白鼠（30g左右）分為4組，三組飽喂（飽食），一組禁食（至實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)禁食18~24h左右）。試驗(yàn)前0.5~1h取兩只飽食小白鼠，1只腹腔注射腎上腺素15微克，另1只注射胰島素0.05~0.1U。2.制備肝勻漿4只小白鼠（飽食、饑餓、注射腎上腺素、注射胰島素），在解剖盤中斷頭處死，取肝臟，用生理鹽水沖洗并吸干，分別稱取0.5g(或1g），置勻漿器中，加入5%三氯乙酸溶液3ml,勻漿。3.水解糖原將勻漿液分別轉(zhuǎn)入4支試管中，沸水浴煮沸15min,使肝糖原水解。水解液冷卻后，分別過濾于4支50ml容量瓶中，以去離子水定容。4.顯色定量

取試管6支，按下表操作，分別讀出各測定管及標(biāo)準(zhǔn)管的A620值。

試劑試管編號(hào)1(餓)2(飽)3(腎)4(胰)S(標(biāo)準(zhǔn))U(對(duì)照)V(肝糖原提取液)/ml0.50.50.50.5——V(葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液)/ml————0.5—V(去離子水)/ml—————0.5V(蒽酮試劑)/ml5.05.05.05.05.05.0沸水浴10minA620調(diào)零5.結(jié)果計(jì)算按公式：(A測/A標(biāo))×(1/1.11)，計(jì)算出100g肝臟所含肝糖原的克數(shù)。

注：1.11為轉(zhuǎn)換系數(shù)，葡萄糖的相對(duì)分子質(zhì)量為180，糖原中葡萄糖殘基的相對(duì)分子質(zhì)量為162，葡萄糖轉(zhuǎn)換成糖原需除以1.11。要點(diǎn)提示1、不要戲弄?jiǎng)游铮駝t影響血糖水平，以致影響肝糖原含量。2、肝臟離體后，肝糖原會(huì)迅速分解，故在殺死動(dòng)物后，所得肝臟須用三氯乙酸溶液處理。思考題1.肝糖原含量的動(dòng)態(tài)變化對(duì)維持血糖水平有何意義？當(dāng)動(dòng)物飽食后，為防止血糖濃度過高，肝糖原合成增強(qiáng)，儲(chǔ)備糖；饑餓時(shí)為防止血糖濃度下降，肝糖原分解，釋出葡萄糖。血糖必須保持一定的水平才能維持體內(nèi)各器官和組織的需要。2.腎上腺素、胰島素調(diào)節(jié)血糖水平的機(jī)制是什么？腎上腺素和胰島素是作用相互拮抗的兩種激素，通過