標準解讀

《GB/T 35912-2018 豬繁殖與呼吸綜合征病毒熒光RT-PCR檢測方法》是一項國家標準，規定了使用熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應（Fluorescent RT-PCR）技術對豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus, PRRSV）進行檢測的具體方法。該標準適用于疑似感染PRRSV的豬只樣本中病毒核酸的定性檢測。

根據標準內容，首先需要準備相關試劑和設備，包括但不限于RNA提取試劑盒、反轉錄酶、Taq DNA聚合酶、引物探針混合液等，并確保所有實驗器材無核酸污染。樣品采集方面，推薦從患病動物或疑似感染個體處取得鼻拭子、口腔液、血液、肺組織等作為待測材料。對于固體組織樣本，還需經過勻漿處理后方可進入后續步驟。

接下來是RNA提取過程，依據所選用的商業試劑盒說明書操作即可完成。獲得純化后的總RNA之后，按照預定程序實施逆轉錄反應以生成cDNA模板。然后配置好含有特異性引物及熒光標記探針的PCR反應體系，在實時熒光定量PCR儀上運行擴增曲線分析軟件自動判斷結果。陽性對照品應顯示出典型的S形擴增曲線且Ct值小于等于閾值；陰性對照則不應有非特異性擴增現象發生。

整個實驗流程需嚴格遵守生物安全規范，避免交叉污染導致假陽性結果出現。此外，為保證數據準確性，建議定期參加室間質量評價活動并適時調整優化實驗條件。


如需獲取更多詳盡信息，請直接參考下方經官方授權發布的權威標準文檔。

....

查看全部

  • 現行
  • 正在執行有效
  • 2018-02-06 頒布
  • 2018-09-01 實施
?正版授權
GB/T 35912-2018豬繁殖與呼吸綜合征病毒熒光RT-PCR檢測方法_第1頁
GB/T 35912-2018豬繁殖與呼吸綜合征病毒熒光RT-PCR檢測方法_第2頁
GB/T 35912-2018豬繁殖與呼吸綜合征病毒熒光RT-PCR檢測方法_第3頁
免費預覽已結束，剩余9頁可下載查看

下載本文檔

GB/T 35912-2018豬繁殖與呼吸綜合征病毒熒光RT-PCR檢測方法-免費下載試讀頁

文檔簡介

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T35912—2018

豬繁殖與呼吸綜合征病毒

熒光RT-PCR檢測方法

Real-timeRT-PCRmethodfordetectionofporcinereproductive

andrespiratorysyndromevirus

2018-02-06發布2018-09-01實施

中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布

中國國家標準化管理委員會

GB/T35912—2018

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由中華人民共和國農業部提出

。

本標準由全國動物衛生標準化技術委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局中國農業科學院上海獸醫研究所中華

:、、

人民共和國深圳出入境檢驗檢疫局湖南圣湘生物科技有限公司中國檢驗檢疫科學研究院

、、。

本標準主要起草人張強李健熊煒童光志趙和平李樹清花群義楊忠蘋李國新王巧全

:、、、、、、、、、、

王艷林穎崢蔡開妹喻正軍林祥梅吳紹強

、、、、、。

Ⅰ

GB/T35912—2018

豬繁殖與呼吸綜合征病毒

熒光RT-PCR檢測方法

1范圍

本標準規定了豬繁殖與呼吸綜合征病毒熒光檢測的操作方法

RT-PCR。

本標準適用于豬繁殖與呼吸道綜合征病毒美洲型毒株核酸檢測

。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T6682

豬常溫精液生產與保存技術規范

GB/T25172

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

熒光反轉錄聚合酶鏈式反應

Real-timeRT-PCR:(real-timereversetranscriptpolymerasechainre-

action)

Ct值每個反應管內的熒光信號量達到設定的閾值時所經歷的循環數

:(cyclethreshold)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

Taq酶Taq聚合酶Taq

:DNA(DNApolymerase)

緩沖液緩沖液

TE:Tris-EDTA(Tris-EDTAbuffer)

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethylpyrocarbonate)

豬繁殖與呼吸綜合征病毒

PRRSV:(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus)

磷酸鹽緩沖液

PBS:(phosphatebufferedsolution)

4儀器

41熒光檢測儀

.PCR。

42高速臺式冷凍離心機可控溫至離心速度可達以上

.:4℃、12000r/min。

43組織研磨器或者研缽

.。

44普通冰箱

.:2℃~8℃。

45超低溫冰箱可控溫至以下

.:-70℃。

46微量移液器并

.:0.2μL~2μL、1μL~10μL、

溫馨提示

  • 1. 本站所提供的標準文本僅供個人學習、研究之用，未經授權，嚴禁復制、發行、匯編、翻譯或網絡傳播等，侵權必究。
  • 2. 本站所提供的標準均為PDF格式電子版文本（可閱讀打印），因數字商品的特殊性，一經售出，不提供退換貨服務。
  • 3. 標準文檔要求電子版與印刷版保持一致，所以下載的文檔中可能包含空白頁，非文檔質量問題。

評論

0/150

提交評論