標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 35909-2018 豬肺炎支原體PCR檢測方法》是一項國家標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定了使用聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction, PCR）技術(shù)對豬肺炎支原體進行檢測的具體步驟與要求。該標(biāo)準(zhǔn)適用于疑似感染豬肺炎支原體的豬只樣本，包括但不限于肺組織、鼻拭子等生物材料的病原學(xué)診斷。

根據(jù)文件內(nèi)容，首先明確了實驗所需的基本條件和設(shè)備，比如核酸提取試劑盒、PCR擴增儀以及電泳系統(tǒng)等，并對這些儀器設(shè)備提出了具體的技術(shù)參數(shù)要求。對于樣本采集，標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)描述了不同類型的樣本應(yīng)該如何正確地收集與保存，以確保后續(xù)分析過程中的準(zhǔn)確性與可靠性。

在核酸提取環(huán)節(jié)，標(biāo)準(zhǔn)推薦了幾種常用的DNA提取方法，并給出了每一步操作的具體指導(dǎo)，如裂解細(xì)胞、去除蛋白質(zhì)污染、沉淀DNA等步驟的操作細(xì)節(jié)。此外，還特別強調(diào)了如何避免交叉污染，保證實驗結(jié)果的真實有效性。

PCR擴增部分，則是整個檢測流程的核心所在。這里不僅列出了引物序列的設(shè)計原則及其選擇依據(jù)，還提供了詳細(xì)的反應(yīng)體系配置表，包括各種組分的比例關(guān)系及最終體積大小。同時，對于退火溫度、循環(huán)次數(shù)等關(guān)鍵參數(shù)也給予了明確指示，以便于實驗室人員能夠按照統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行實驗。

最后，在產(chǎn)物分析階段，標(biāo)準(zhǔn)介紹了如何通過瓊脂糖凝膠電泳來觀察并判斷目標(biāo)片段是否成功擴增出來。如果出現(xiàn)預(yù)期大小的條帶，則可以認(rèn)為樣本中含有豬肺炎支原體；反之，則為陰性結(jié)果。此外，為了進一步提高檢測靈敏度和特異性，還可以采用熒光定量PCR或巢式PCR等更為先進的技術(shù)手段。


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....

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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2018-02-06 頒布
  • 2018-09-01 實施
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文檔簡介

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T35909—2018

豬肺炎支原體PCR檢測方法

DetectionofmycoplasmahyopneumoniaeusingPCRmethod

2018-02-06發(fā)布2018-09-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

中華人民共和國

國家標(biāo)準(zhǔn)

豬肺炎支原體PCR檢測方法

GB/T35909—2018

*

中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行

北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號

2(100029)

北京市西城區(qū)三里河北街號

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

:400-168-0010

年月第一版

20182

*

書號

:155066·1-59535

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T35909—2018

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院

:。

本標(biāo)準(zhǔn)起草人邵國青馮志新熊祺琰劉茂軍張磊王海燕武昱孜韋艷娜劉蓓蓓甘源華利忠

:、、、、、、、、、、、

王佳王麗

、。

Ⅰ

GB/T35909—2018

豬肺炎支原體PCR檢測方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬肺炎支原體檢測的操作方法

PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于實驗室對豬臨床樣品豬鼻拭子肺組織和支氣管肺泡灌洗液細(xì)菌培養(yǎng)物和動物產(chǎn)

(、)、

品中豬肺炎支原體核酸的快速檢測

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

實驗室生物安全通用要求

GB19489

實驗室質(zhì)量控制規(guī)范動物檢疫

GB/T27401

病死及病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范農(nóng)醫(yī)發(fā)號

[2017]25

獸醫(yī)實驗室生物安全管理規(guī)范中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第號

(302)

3術(shù)語和定義及縮略語

31術(shù)語和定義

.

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

311

..

豬肺炎支原體MycoplasmahyopneumoniaeMHP

;

支原體科支原體屬Mycoplasma成員是豬支原體肺炎的主要病原體

(),(MPS)。

注豬支原體肺炎又稱豬氣喘病是一種經(jīng)呼吸道感染的慢性病對養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重危害

:,,。

32縮略語

.

下列縮略語適用于本文件

。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR(polymerasechainreaction)

磷酸鹽緩沖液

PBS(phosphate-bufferedsalinebuffer)

電泳緩沖液

TAETAE(tris-acetate-ethylenediaminetetraaceticacidbuffer)

電泳緩沖液

TBETBE(tris-borate-ethylenediaminetetraaceticacidbuffer)

Taq酶Taq聚合酶Taq

DNA(DNApolymerase)

脫氧核糖核苷三磷酸

dNTPs(deoxyribonucleosidetriphosphates)

脫氧核糖核酸

DNA(deoxyribonucleicacid)

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