副溶血性弧菌制作人：劉明路furongxuexinghujun目錄CONTENTS生物學特性shengwuxuetexing01檢驗結果jianyanjieguo05注意事項zhuyishixiang06實驗材料shiyancailiao03操作步驟caozuobuzhou04PARTONE生物學特性生物學特性PARTONEPARTTWOPARTTHREE生物學特性本菌為G-，可兩端濃染，多形態，無芽孢，單端單鞭毛，有嗜鹽特性，在30-37℃最適溫度時增長較快，一般冬季不易檢出。多形態：弧狀、逗點狀球狀、絲狀桿狀、棒狀等。一、形態與染色

二、培養特性嗜鹽：VP在含3%～6%鹽的培養基繁殖迅速，低于0.5%或高于8%鹽水中停止生長。生長溫度：最適為37℃，4℃不生長。pH:最適pH為7.4-8.0。需氧性:需氧性很強，厭氧條件下生長緩慢三、抵抗力敏感：淡水等無鹽環境不耐熱對酸敏感，在2％冰醋酸或食醋中立即死亡，對氯、碳酸、來蘇水等一般化學消毒劑敏感：對磺胺噻唑、氯霉素、合霉素敏感。耐受：耐高濃度NaCl－海水，鹽漬醬菜中存活時間較長；耐低溫的抵抗力較強耐青霉素、磺胺嘧啶。四、致病性抗原類型：12種O抗原及59種K抗原致病物質：致熱性溶血素(TDH)，TDH類似溶血毒(TRH)具有溶血活性、腸毒素和致死作用臨床上以急性起病、腹痛、嘔吐、腹瀉及水樣便為主要癥狀。主要病理變化為空腸及回腸有輕度糜爛，胃粘膜炎、內臟(肝、脾、肺)淤血等。各種副溶血性弧菌菌落TCBS上的副溶血性弧菌菌落科瑪嘉上的副溶血性弧菌菌落分離出的副溶血性弧菌菌落PARTTWO檢驗原理檢驗原理01定量檢測檢驗原理特點：樣品用3%氯化鈉蛋白胨水10倍連續稀釋后取三個稀釋度各接3支含有該培養基的平皿，培養計數。研究對象：樣品中是否檢出副溶血性弧菌。02定性檢測檢驗原理特點：首先將樣品接種到氯化鈉瓊脂平板和ss瓊脂平板各一個，培養18-24h觀察研究對象：根據證實為副溶血性弧菌陽性的試管管數，查MPN檢索表，報告每克（毫升）副溶血性弧菌的MPN值。檢驗流程樣品25g(ml)+3%氯化鈉堿性蛋白胨水TCBS平板定性檢測科瑪嘉弧菌平板1、鏡檢3、三糖鐵實驗2、氧化酶實驗4、嗜鹽實驗報告結果

生化實驗

API20E36±1℃18h36±1℃6h36±1℃24h36±1℃24hPARTTHREE實驗材料實驗材料013％氯化鈉堿性蛋白陳水〔APW)、3％氯化鈉胰蛋白胨大豆〔TSA）瓊脂、硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖（TCBS）瓊脂、3％氯化鈉三糖鐵（TSI

）瓊脂培養基023％氯化鈉甘露醇試驗培養基、3％氯化鈉賴氨酸脫狡酶試驗培養基、3％氯化鈉MR-VP

培養基氯化鈉結晶紫增菌液嗜鹽性試驗培養基

03氧化酶試劑、革蘭氏染色液、革蘭氏染色液、3%氯化鈉溶液、

V-P試劑、甲基紅試劑、靛基質試劑等。試劑PARTFOUR操作步驟試驗方法樣品用3%氯化鈉蛋白胨水10倍連續稀釋后取三個稀釋度各接3支含有該培養基的平皿，培養計數。樣品處理及培養第一步第二步第三步第四步首先將樣品接種到氯化鈉瓊脂平板和ss瓊脂平板各一個，培養18-24h觀察。也可增菌液直接分離。分離培養將上述培養物接種無鹽胨水、7%、11%氯化鈉胨水。嗜鹽性試驗挑取可疑培養物鏡檢。涂片鏡檢第五步挑取上述可疑菌落，轉種3.5%氯化鈉三糖鐵斜面，觀察結果（下部變黃，有動力，不產H2S）可以菌落培養第六步V-P、靛基質、甲基紅試驗等生化試驗PARTFIVE檢驗結果檢驗結果初步鑒定結果副溶血性弧菌：氧化酶試驗：陽性。涂片鏡檢：G-，棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態，無芽胞，有鞭毛。3％氯化鈉三糖鐵斜面：底層變黃不變黑，無氣泡，斜面顏色不變或紅色加深，有動力。嗜鹽性試驗：分別接種于不同氯化鈉濃度的胰胨水中培養，在無氯化鈉和10％氯化鈉的胰胨水中不生長或微弱生長，在7％氯化鈉的胰胨水中生長旺盛。確定鑒定結果生化試驗：分別接種各類生化培養基，培養后觀察結果。或API

20E

生化鑒定試劑盒或VITEK全自動微生物檢測系統鑒定。生化性狀符合要求時，為副溶血性弧菌。PARTSIX注意事項注意事項溶血性試驗我妻氏用高鹽血瓊脂培養基，在限定的條件下培養副溶血性弧菌時出現的溶血反應，稱此溶血性能為“神奈川現象”。此試驗要求是用人或兔的新鮮紅血球制備高鹽血平板，經37℃、24h培養，如在單個菌落周圍呈現透明溶血環或在菌落下面有明顯溶血者，為“神奈川現象”陽性，若不出現透明溶血環或無明顯溶血者，為“神奈川現象”陰性。有致病性的副溶血性弧菌，多數為神奈川現象陽性，但亦有少數為陰性。動物試驗經上述檢驗的可疑菌株，用小鼠測定毒力，將16~18h的蛋白胨水或肉湯培養物，注射小鼠腹腔0.3~0.5mL，有毒力者可在5~10h發病死亡，長者有24h左右發病死亡。發病時有豎毛、運動不活潑，腹部緊貼罐底，呼吸困難，四肢抽