建立色譜檢測方法的技巧討論

劉仲義1開埸白1.1交流內容色譜技術在藥品標準中的應用分類和優勢簡介對藥品標準中有關色譜檢測方法的幾個問題的討論建立色譜檢測方法(GCLC)的經驗與技巧1.2界定本處的色譜檢定方法為氣相色譜和高效液相色譜測定方法，重點在含量測定，有關物質檢測，指紋圖譜測定的分離條件，檢測條件的評估論證上的一點經驗與技巧討論。2色譜技術在藥品標準中的應用分類和特點簡介

應用:鑒別，有機殘留涪溶劑測定，農藥殘留量測定，有關物質檢查(包括限量測定，)，指紋圖譜分析，含量測定(包括溶出度，含量均勻度測定)優勢:分離-測定，專屬性強，選擇性好，除ELSD,MS線性范圍不寬外，其余檢測器線性范圍均很理想，適用于含干擾成分的多組分藥品的分析。3對藥品標準中有關色譜檢測方法的幾個問題的討論

3.1系統適用性描述中值得探討的問題色譜柱的選擇(參見各色譜柱供應商講座內溶)(補充)特殊色譜柱的表達問題LC流動相:pH值與離子對試劑不匹配，pH值與色譜柱不匹配，有機溶劑的極性(量)與色譜柱不匹配，流動相與樣品溶劑不匹配，流動相的有機溶劑量與檢測波長不匹配檢測波長選擇:在有關物質檢查中，習慣追最大吸收，

GC毛細管柱與載氣流速不匹配，柱溫與色譜柱的允許范圍不適應，載氣質量不符合要求，理論板數規定不是以滿足分離度要求的最低值，往往規定過高，造成不必要的浪費3.2供試品溶液制備中存在的問題

抽取方法&條件不合理,慎用固相萃取法;殘留溶劑測定采用超聲波溶解提取;回流提取，索氏提取不研究提取時間，提取溫度;取樣量不合理,提取溶劑選擇不合理:GC測定樣品的溶劑沸點偏高，可以用無毒害的溶劑卻迭擇有毒害的溶劑，不對溶劑進行比較選擇，3.3測定法指紋圖譜檢測中對頂空進樣的不公證待遇;溶劑與色譜柱不匹配:如GC法中，極性溶劑__WAX系列毛細管柱;LC檢測中溶劑與流動相不匹配:反相色譜法中，100%有機溶劑__低極性流動相;進樣方法&條件不合理:計算方式不合理:中藥檢驗中不宜強求內標法，無故放過可用歸一化法的機會。

4建立色譜檢測方法(GCLC)的經驗上與技巧

4.1建色譜檢測方法的要求供試品溶液制備

取樣量的合理性研究，提取方法的選擇，溶劑的選擇，提取溶劑的選擇色譜條件樣品收集范圍應保證選擇性考察;分離模式的選擇應含有主要指標，如分離度、重復性、可操作性、運行成本和其它物殊要求;分離條件(參數)的優化，方法學考察指標應100%按要求完成4.2氣相色譜檢測方法建立技巧(1)

低沸點物質測定時，動態頂空與靜態頂空等進樣技術的應用，(2)

鑒別高沸點物質時，固相徽萃取技術的應用(3)

動態頂空在靜態頂空法方法學評價中的應用(4)

盡可能使用歸一化法測定限量中藥供試樣品為溶液時，宜使用外標法，

(6)

重視標準加入法(7)

最低理論板數

在完成兩根色譜柱的耐用性實驗后，

根據R═(k2-k1)N?/4(1+k1)，推算得到經驗公式N═36(t2/(t2-t1))2，再計算其平均值

，

此時

令R為1.5t0為1。評價理論板數時，可根據t0變化規律判斷設置是否合理(8)

樣品濃度推算:

m取樣量>V稀釋倍數×K保險系數×L定量限/(C雜質總限度×I進樣體積)4.3液相色譜檢測方法技巧(1)

中藥供試樣品為溶液時，宜使用標準加入法(2)

中藥供試樣品為溶液，重視標準加入法(3)

復雜樣品中微量成分的限量測定可活用固相萃取(4)最低理論板數

在完成兩根色譜柱的耐用性實驗后，

根據R═(k2-k1)N?/4(1+k1)，推算得到經驗公式N═36(t2/(t2-t1))2，再計算其平均值

，

此時

令R為1.5t0為1

。評價理論板數時，可根據t0變化規律判斷設置是否合理

(5)

有關物質檢查中樣品濃度推算:m取樣量>V稀釋倍數×K保險系數X雜質個數×L定量限/(C雜質總限度×I進樣體積)(6)關注微波溶解樣品的適用范圍(7)復雜樣品檢測中，注意甲醇，乙腈的聯合使用

(8)復雜樣品的指紋圖譜測定中，注意離子對的聯合使用

(9)十二烷基磺酸在有機基體C18鍵合柱中的妙用(10)注意復合色譜柱在中藥樣品的應用(11)DAD在指紋圖譜檢測的信息量評估中的妙用(12)ELSD在有關物質檢查的響應評估中的應用(13)DAD在有關物質檢查的響應評估中的妙用(14ELSD，DAD在工作對照品含量定義中的聯合應用

5結束語

5.1參考文獻

(1)L.R森德爾

J.J.柯克蘭著

張玉奎

王杰譯

實用高效液相色譜法的建立

(2)ICH委員會頒布

周海均主譯

藥品注冊的國際技術要求(3)HPLCCOLUMNS_Theory,Technology,andPracticebyUweD.Neue(4)Brunokolb,LeslieS.EttreHeadspace_gaschromatography

(5梁漢昌編著

痕量物質氣相色譜法(6)DanielR.KnappHandbookofAnalyticalDerivatizationReactions

5.2在以上參考資料