表1醫(yī)院科門（急）診流感樣病例數(shù)和門急診病例就診總數(shù)原附件1全國流感監(jiān)測技術(shù)指南（2017年版）為進(jìn)一步規(guī)范我國流感監(jiān)測工作技術(shù)環(huán)節(jié)，科學(xué)指導(dǎo)全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)和各級疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)做好流感監(jiān)測工作，依據(jù)《全國流感監(jiān)測方案（2017年版）》，特制定本指南。一、監(jiān)測目的（一）實(shí)時(shí)監(jiān)測流感活動(dòng)水平和流行趨勢；（二）實(shí)時(shí)追蹤流感病毒變異，及時(shí)發(fā)現(xiàn)新型流感病毒，并做出預(yù)警;（三）為全球及我國流感疫苗株的推薦及抗病毒藥物的使用提供依據(jù);（四）為流感大流行的準(zhǔn)備和應(yīng)對提供技術(shù)支撐。二、流感樣病例監(jiān)測（一）監(jiān)測病例定義流感樣病例：發(fā)熱（體溫》38℃）,伴咳嗽或咽痛之一者。出現(xiàn)發(fā)熱的時(shí)間應(yīng)在本次急性發(fā)熱病程內(nèi)，體溫認(rèn)定包括患者自測體溫和醫(yī)療機(jī)構(gòu)檢測體溫。（二）監(jiān)測時(shí)間所有流感樣病例監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院和流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室均全年開展流感樣病例監(jiān)測。流感監(jiān)測周歷編排標(biāo)準(zhǔn)參照IS08601,按照公歷的周一到周日編排，周一為每周第一天（周歷注釋：如1月1日為周一至周四,該周屬于新年第一周；如1月1日為周五至周日，該周則屬于上一年最后一周；監(jiān)測年度注釋：每年第十四周為監(jiān)測年度起始周；下一年的第十三周則屬于監(jiān)測年度終上周。）。（三）哨點(diǎn)醫(yī)院監(jiān)測診室的設(shè)置.綜合醫(yī)院在內(nèi)科門診、內(nèi)科急診、發(fā)熱門診和（或）兒內(nèi)科門診、兒內(nèi)科急診開展流感樣病例的監(jiān)測。.兒童醫(yī)院在兒內(nèi)科門診、兒內(nèi)科急診和（或）發(fā)熱門診開展流感樣病例的監(jiān)測。.所有國家級流感樣病例哨點(diǎn)監(jiān)測醫(yī)院都應(yīng)按要求規(guī)范設(shè)置監(jiān)測診室,不能僅將發(fā)熱門診設(shè)為監(jiān)測診室。（四）流感樣病例的報(bào)告.報(bào)告內(nèi)容和程序（1）哨點(diǎn)醫(yī)院監(jiān)測診室的醫(yī)務(wù)人員，按照流感樣病例的定義，對每天在所有監(jiān)測診室就診的病例進(jìn)行診斷，每天按科室登記各年齡組的流感樣病例數(shù)和門急診病例就診總數(shù)，填寫“醫(yī)院科門（急）診流感樣病例數(shù)和門急診病例就診總數(shù)原始登記表”（附表1）,報(bào)醫(yī)院主管科室。原始登記表中“流感樣病例數(shù)”和“門急診病例就診總數(shù)”可分科室、診室，由各科室確定專人每日進(jìn)行登記。（2）哨點(diǎn)醫(yī)院主管科室，每周一負(fù)責(zé)將本院各監(jiān)測診室上周的“醫(yī)院科門（急）診流感樣病例數(shù)和門急診病例就診總數(shù)原始登記表”（附表1）,分診室錄入“中國流感監(jiān)測信息系統(tǒng)”。（3）有醫(yī)院信息系統(tǒng)的哨點(diǎn)醫(yī)院，要求利用醫(yī)院信息系統(tǒng)開展流感樣病例登記、報(bào)告等工作，提高監(jiān)測工作質(zhì)量。.注意事項(xiàng)流感樣病例數(shù)和門急診病例就診總數(shù)在每個(gè)監(jiān)測診室的產(chǎn)生來源必須一致。舉例：ILI%二（內(nèi)科診室ILI數(shù)）/（所有內(nèi)科診室就診患者數(shù)）。（五）流感樣病例標(biāo)本的采集和運(yùn)送上海、江蘇、浙江、安徽、福建、江西、湖北、湖南、廣東、廣西、海南、重慶、四川、貴州、云南等15個(gè)南方省份每家哨點(diǎn)醫(yī)院平均每周采集流感樣病例標(biāo)本20份（每周不能低于10份，不超過40份）。北京、天津、河北、山西、內(nèi)蒙古、遼寧、吉林、黑龍江、山東、河南、西藏、陜西、甘肅、青海、寧夏、新疆等16個(gè)北方省份和新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)每家哨點(diǎn)醫(yī)院在4至9月每月采集流感樣病例標(biāo)本20份，10月至次年3月平均每周采集流感樣病例標(biāo)本20份（每周不能低于10份，不超過40份）。標(biāo)本采集日期應(yīng)均勻分布，避免集中、突擊采樣。哨點(diǎn)醫(yī)院監(jiān)測診室的醫(yī)護(hù)人員采集流感樣病例標(biāo)本時(shí)，須填寫“流感樣病例標(biāo)本原始登記送檢表”（附表2）,隨同標(biāo)本送至對應(yīng)的流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。.采樣對象：發(fā)病3天內(nèi)的流感樣病例。.標(biāo)本采集種類包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽拭子。標(biāo)本采集后，放入含3-4mL采樣液的采樣管中。采集方法詳見附件10.標(biāo)本的運(yùn)輸：標(biāo)本采集后應(yīng)在2-8℃的條件下，2個(gè)工作日運(yùn)送至對應(yīng)的流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。如未能48小時(shí)內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)置-70℃或以下保存，并保證采集的標(biāo)本一周內(nèi)送到對應(yīng)的網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。標(biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。標(biāo)本運(yùn)輸方法詳見附件1。.全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室的工作人員接到標(biāo)本后，48小時(shí)內(nèi)將“流感樣病例標(biāo)本原始登記送檢表"（附表2）錄入到中國流感監(jiān)測信息系統(tǒng)“流感樣病例標(biāo)本登記表”中（附表3）。（六）流感樣病例標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)室檢測.實(shí)驗(yàn)室條件及生物安全操作要求開展流感樣病例病原學(xué)監(jiān)測的實(shí)驗(yàn)室必須是生物安全n級或以上實(shí)驗(yàn)室，具備以下實(shí)驗(yàn)室條件和相關(guān)儀器設(shè)備。(1)流感病毒分離必須在生物安全I(xiàn)I級或以上實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜內(nèi)操作，并遵守相關(guān)的生物安全管理規(guī)定。(2)紅細(xì)胞凝集(HA)和紅細(xì)胞凝集抑制(HI)試驗(yàn)在生物安全H級實(shí)驗(yàn)室里操作，并遵守相關(guān)的生物安全管理規(guī)定。(3)實(shí)驗(yàn)室基本條件：A2型生物安全柜、倒置顯微鏡、離心機(jī)、C02培養(yǎng)箱、恒溫培養(yǎng)箱、液氮罐、醫(yī)用-4℃和-20℃冰箱、-70℃及以下低溫冰箱、高通量熒光定量PCR儀、自動(dòng)核酸提取儀、純水儀、全自動(dòng)高壓滅菌器、自動(dòng)孵蛋箱等。(4)除上述條件外，省級流感參比中心實(shí)驗(yàn)室條件：高速冷凍離心機(jī)、全自動(dòng)流感病毒藥物敏感性檢測系統(tǒng)、深度測序系統(tǒng)、自動(dòng)化工作站等。.病毒分離與鑒定流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室收到哨點(diǎn)醫(yī)院采集的標(biāo)本后，要在3個(gè)工作日內(nèi)利用核酸檢測方法進(jìn)行流感病毒亞型或系鑒定。對于檢測陽性的標(biāo)本,要求1周內(nèi)利用狀態(tài)良好的MDCK細(xì)胞和(或)SPF雞胚進(jìn)行病毒分離。(1)標(biāo)本的處理：將原始標(biāo)本分為三份，一份用于MDCK細(xì)胞接種，一份雞胚接種，一份-70℃或以下溫度保存用于復(fù)核。(2)標(biāo)本的接種、收獲和鑒定：為提高病毒分離的陽性率，標(biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融，核酸檢測陽性的標(biāo)本最好在24小時(shí)內(nèi)利用生長狀態(tài)良好的MDCK細(xì)胞和(或)雞胚進(jìn)行病毒分離。MDCK細(xì)胞或雞胚收獲的病毒培養(yǎng)液用豚鼠、人。型或火雞血紅細(xì)胞進(jìn)行HA試驗(yàn)，確定病毒滴度。標(biāo)本接種后陰性標(biāo)本需盲傳1次；對于血凝滴度小于1:8的毒株，將病毒培養(yǎng)液進(jìn)行10T?10-3稀釋后，進(jìn)行傳代。HA試驗(yàn)完成后，采用國家流感中心每年分發(fā)的各型別/亞型標(biāo)準(zhǔn)參照血清進(jìn)行HI試驗(yàn)，以確定病毒的型別和亞型。進(jìn)行HI試驗(yàn)時(shí)，需同時(shí)采用各型別/亞型的標(biāo)準(zhǔn)抗原作為對照。具體方法參見附件1。(3)結(jié)果錄入檢測結(jié)果在檢測完成后48小時(shí)內(nèi)錄入到中國流感監(jiān)測信息系統(tǒng)“流感監(jiān)測病毒分離、鑒定結(jié)果登記表”中（附表4）。.流感病毒的抗原性分析省級流感參比中心每年選取本省至少20%的流感毒株使用國家流感中心統(tǒng)一提供的參考抗原和參考血清進(jìn)行抗原性分析，流行季節(jié)每月至少開展一次。通過與陽性對照的HI滴度進(jìn)行對比，分析流行病毒的抗原性變異情況。每月以電子版的方式將本省流感病毒抗原性分析的數(shù)據(jù)（流感病毒抗原性分析結(jié)果登記表（附表5））上報(bào)至國家流感中心，郵箱為flulab@o.流感病毒基因特性分析省級流感參比中心每年選取進(jìn)行過抗原性分析的至少30株流感毒株進(jìn)行序列測定和基因特性分析，每月將序列數(shù)據(jù)提交至“中國流感病毒基因序列數(shù)據(jù)庫”，各網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室通過“中國流感基因序列數(shù)據(jù)庫”共享最新的流感序列，利用序列信息開展綜合分析，提高數(shù)據(jù)利用能力。.流感病毒的耐藥性監(jiān)測省級流感參比中心每年選取進(jìn)行過抗原性分析的至少30株流感毒株進(jìn)行耐藥性檢測，通過表型測定的方法來監(jiān)測流行病毒的耐藥性，為指導(dǎo)抗流感病毒藥物的使用提供依據(jù)。每月以電子版的方式將本省份流感病毒耐藥性監(jiān)測的數(shù)據(jù)（流感病毒耐藥檢測結(jié)果登記表（附表6））上報(bào)至國家流感中心，郵箱為flulab@0.流感毒株的管理和寄送（1）毒株的保存管理包括國家流感中心在內(nèi)的全國流感