植鈣子度光量測(cè)劑產(chǎn)說(shuō)書(shū)中版主用植物鈣離子濃度熒光定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)鈣離子特異性熒光探針Fluo-4與鈣離子結(jié)合后其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，在熒光分光光度儀下觀察相對(duì)熒光峰值的變化，來(lái)測(cè)定植物組織裂解懸液中總鈣離子濃度的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種植物組織，包括種子（seed片（（root胎葉（cotyledon胚軸（epicotyl）等裂解萃取樣品中鈣離子的濃度檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，檢測(cè)敏感。技背鈣是人體中的一種重要電介質(zhì)和礦物質(zhì)，占克。其中99的鈣以氟磷灰石鈣（calciumfluorophosphate）形式存在于骨組織中。非骨組織鈣成分主要存在于細(xì)胞內(nèi)。鈣具有兩種主要形式：一種是非彌散型蛋白結(jié)合鈣，其構(gòu)成約0％至50％血清中的總鈣含量；另一種為彌散型游離鈣，其進(jìn)一步分成具有活性的復(fù)合鈣（）和離子鈣（ionizedcalcium對(duì)神經(jīng)肌肉興奮性（neuromuscularexcitability液凝固、酶的激活、離子跨膜運(yùn)輸、釋放神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)、信使傳導(dǎo)等方面起著重要作用。鈣的檢測(cè)包括沉淀法、EDTA鰲合滴定法、火焰光度法（flamephotometry子吸收分光光度法等技術(shù)，但容易受到鈉、鉀、磷酸鹽、硫酸鹽的干擾，或者受限于儀器的特殊的要求。Fluo-4，種與鈣離子結(jié)合，其熒光強(qiáng)度迅速增強(qiáng)100的熒光探針可以敏感測(cè)定微量游離鈣離子水平。在熒光分光光度儀下，激發(fā)波長(zhǎng)4，散發(fā)波長(zhǎng)520nm，定量測(cè)定植物組織細(xì)胞的鈣濃度。產(chǎn)內(nèi)清理液（Reagent）裂解液（ReagentB）反應(yīng)液（Reagent）飽和液（ReagentD陰性液（Reagent）

60毫升20毫升6升2升2升產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

1保方保存清理液（ReagentA）在4冰箱里；其余的保存在－20℃箱里；反應(yīng)液（Reagent）避免光照；有效保證月用自1.5毫離心管：用于樣品操作的容器15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器DOUNCE勻漿器：用于組勻化微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品沉淀培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)物孵育

黑色96板：用于樣品熒光測(cè)定的容器熒光酶標(biāo)儀：用于樣品熒光分析實(shí)步一、品準(zhǔn)備1．準(zhǔn)備好新鮮的植組織（葉片、谷粒、種子等秤重以確定1克組織重量2．（選擇步驟）放預(yù)冷的升錐形離心管3．（選擇步驟）加3升清液（A）清洗次4．即刻用刀片切碎織5．放進(jìn)一個(gè)預(yù)冷的15毫升錐形離心管6．加入預(yù)冷的升裂液（B）7．渦旋震蕩5，充分混勻8．即刻放進(jìn)預(yù)冷的勻漿器，在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約80下）9．將所有組織勻漿移入毫升離心管，放進(jìn)℃微型臺(tái)式離心機(jī)離10分鐘，速度為5000g（7500RPM，如541510．小心移出上清（注意：不要觸碰沉淀到另一個(gè)新的預(yù)冷的15毫錐形離心管11．（選擇步驟）果上清液含有肉眼可見(jiàn)的殘?jiān)貜?fù)離心分鐘一次，速度為5000g或7500RPM，例如5415）12．即刻移入到1.5毫升離心管13．移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)（注意：Bradford

）14．放進(jìn)70℃的箱里保存或置于冰槽里備用二、定準(zhǔn)備1．準(zhǔn)備好上述制備待測(cè)樣品，置于冰槽里備用2．設(shè)定好熒光酶標(biāo)（22℃發(fā)波長(zhǎng)，散發(fā)波長(zhǎng)520nm三、熒光定1．準(zhǔn)備1黑色96孔板，標(biāo)記為：樣品、空白對(duì)照孔、最大對(duì)照空2．移取100微升（克蛋白）上述制備的樣品到樣品孔里3．移取100微升飽和液（Reagent）最大對(duì)照空里4．移取100微升陰性液（Reagent）空白對(duì)照空5．分別加入100微升反應(yīng)液C）所有孔里6．輕輕搖動(dòng)黑色孔板，混勻7．室溫下（22育30分鐘，避免光照8．即刻放進(jìn)熒光酶儀測(cè)讀：獲得相對(duì)熒光單位（fluorescenceunit；）9．計(jì)算樣品鈣離子度：納摩爾（注意：不品－空白對(duì)照孔R(shí)FU）÷（最大對(duì)照空RFU－樣品RFU345（納摩爾；解離常數(shù)）注事

1．本產(chǎn)品為次操作2．操作時(shí)，須戴手3．避免使用EDTA等處理樣品4．孵育反應(yīng)完成后刻進(jìn)行熒光測(cè)定5．如果待測(cè)樣品濃