海南大學學士論文答辯論文題目：迷迭香中鼠尾草酸的提取工藝研究

指導老師：

班級：姓名：學號：1B海南大學學士論文答辯論文題目：迷迭香中鼠尾草酸的提取工藝Contents前言1鼠尾草酸的分析方法2鼠尾草酸提取方法的選擇

3勻漿法提取鼠尾草酸研究

456柱層析法純化鼠尾草酸

總結2BContents前言1鼠尾草酸的分析方法2鼠尾草酸提取方法的前言迷迭香主要分布：法國、西班牙、南斯拉夫、突尼斯、摩洛哥、保加利亞，等主要成分：萜類、黃酮類、酚酸類及其他化學物質抗氧化成分：鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酸、迷迭香酚、表迷迭香酚，等主要作用：抗氧化、抑菌、抗病毒、抗癌及作香料，等13B前言13B前言鼠尾草酸（CA）分子式：C20H28O4

結構式：主要作用：抗氧化、抗癌、抗炎及美容，等

意義：隨著科技的不斷發展及其市場需求量的不斷擴大，對鼠尾草酸的要求不斷提高。目前國內對鼠尾草酸的提取率并不理想，因此，對迷迭香中鼠尾草酸的提取工藝研究有重大意義。本實驗主要是建立一個最佳的提取方法及工藝，以提高迷迭香中鼠尾草酸的提取率。14B前言14B色譜條件的建立色譜柱：WatersC18（150×4.6mm,5um）；流動相：乙腈-0.5%磷酸水溶液（75:25）；流速：1.0mL/min；檢測器：紫外檢測器；檢測波長：230nm；靈敏度:0.16AFUS；柱溫:室溫（25℃）。鼠尾草酸的分析方法25B色譜條件的建立鼠尾草酸的分析方法25B標準曲線繪制配1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml混合標準品溶液，溶解液使用甲醇鼠尾草酸的分析方法26B標準曲線繪制鼠尾草酸的分析方法26B取1ml經0.45μm微孔濾膜過濾之后進行HPLC檢測，得C1提取液置于60℃烘箱中烘干,取烘干樣稱量得m2,用無水乙醇溶解、定容于25mL棕色容量瓶,。過濾后進行HPLC檢測.得C2鼠尾草酸的分析方法2鼠尾草酸提取量(mg/g)：q=c1×v1÷m鼠尾草酸純度(%)：p=c2×v2÷m2鼠尾草酸提取率(%)：w=c2×v2÷m注：v1為提取液體積(mL),m為原料(迷迭香)質量(g)；v2為乙醇溶解液體積25ml7B取1ml經0.45μm微孔濾膜過濾之后進行HPLC檢測，實驗部分大綱Phase1Phase2Phase3提取方法的選擇提取工藝優化分離純化8B實驗部分大綱Phase1Phase2Phase3提取方勻漿提取法超聲波提取法回流提取法常溫浸提法其他方法提取方法鼠尾草酸提取方法的選擇

39B勻漿超聲波回流常溫浸其他提取方法鼠尾草酸提取方法的選擇39鼠尾草酸提取方法的選擇

3不同提取方法各項指標的比較提取方法提取溫度/℃提取時間/h提取率/%超聲波提取法250.51.194回流提取法8020.947常溫浸提法25240.742勻漿提取法250.0671.153準確稱取迷迭香干葉10g，加入體積溶劑為80%乙醇溶液200ml置于燒瓶中。其他條件根據下表進行實驗，并計算出該方法下所得到的鼠尾草酸提取率。勻漿提取和其它提取方法相比,勻漿提取所用時間短,不需加溫,提取率高,因此,勻漿提取在提高產率、節省時間等方面具有明顯的優勢。10B鼠尾草酸提取方法的選擇3不同提取方法各項指標的比較提取方法勻漿法提取鼠尾草酸研究

4勻漿提取原理圖勻漿提取是指生物組織通過加入溶劑進行組織勻漿，以提取活體組織中有效成分的一種提取方法，將植物細胞膜和細胞壁破裂，溶劑便較易進入細胞內部，活性物質便溶解于溶劑中，再由傳質擴散作用，進入溶劑主體。所以有效成分的提取實際上是目標成分從細胞內釋放、擴散到溶劑中的非穩態非平衡過程。11B勻漿法提取鼠尾草酸研究4勻漿提取原理圖勻漿提取是指生物組織實驗操作流程勻漿法提取鼠尾草酸研究

4迷迭香干葉蒸餾法取精油單因素實驗正交實驗優化條件下提取勻漿提取分析計算12B實驗操作流程勻漿法提取鼠尾草酸研究4迷迭香干葉蒸餾法取精油蒸餾法提取精油勻漿法提取鼠尾草酸研究

4條件60g迷迭香葉600ml蒸餾水加熱2.5小時裝置圖13B蒸餾法提取精油勻漿法提取鼠尾草酸研究4條件裝置圖13B乙醇濃度選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究（單因素實驗）

4條件10g迷迭香葉150ml不同濃度乙醇勻漿4min（乙醇濃度：50%、60%、70%、80%、90%、100%）結果隨著乙醇濃度體積分數的升高，鼠尾草酸溶出程度提取量也隨之增加。但當乙醇濃度達到80%時，鼠尾草酸和鼠尾草酚的溶出程度均達到最大值，繼續增加乙醇的體積分數時，鼠尾草酸的提取量并無明顯升高，反而，鼠尾草酸的純度明顯下降。結論選擇體積分數為80%的乙醇作為優化提取溶劑14B乙醇濃度選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究（單因素實驗）4條件（提取溶劑PH值選擇

勻漿法提取鼠尾草酸研究

4條件10g迷迭香葉150ml80%乙醇勻漿4min鹽酸和氫氧化鈉調節PH（PH值：2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0）結果在PH值為3-4的時候鼠尾草酸氧化成鼠尾草酚的量最少，因為酸性條件所提供的質子有助于保護不向鼠尾草酚轉化，但是酸性太強對設備的腐蝕性增加。結論選擇提取溶劑的PH值為3.0作為最佳提取溶劑的PH值15B提取溶劑PH值選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究4條件（PH值：提取溶劑調節酸種類的選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究

4條件10g迷迭香葉150ml80%乙醇勻漿4min（調節酸種類：鹽酸、硫酸、檸檬酸、磷酸）結果使用磷酸作為調節酸時鼠尾草酸轉化成鼠尾草酚的量最多，保護作用最差，在達到相同PH值的時候，鹽酸的用量最少。結論選擇鹽酸作為最佳酸性調節物質。16B提取溶劑調節酸種類的選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究4條件（調料液比的選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究

4條件10g迷迭香葉80%乙醇勻漿4min鹽酸調節PH為3.0（料液比：1:6、1:8、1:10、1:12、1:14、1:16、1:20）結果隨著料液比的增大，鼠尾草酸的提取量也一直在增加，當料液比達到1:12后，再增加料液比，鼠尾草酸的提取量變化量較少。

結論選擇料液比為1:12優化條件17B料液比的選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究4條件（料液比：1:6勻漿提取時間的選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究

4條件10g迷迭香葉120ml80%乙醇PH為3.0（時間：1、2、3、4、5、6、7min）結果隨著提取時間的增加，鼠尾草酸的提取量也不斷增加，但在四分鐘后基本無明顯變化進一步延長勻漿時間，可能會導致某些本不易溶出的雜質成分也被溶劑溶出，從而使鼠尾草酸的純度有所下降。從提取效率及節能的方面考慮，應選擇在最短的時間內，達到近于最好的提取效果。結論選擇勻漿時間4min作為優化條件18B勻漿提取時間的選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究4條件（時間：1正交實驗勻漿法提取鼠尾草酸研究

4正交實驗因數水平表A乙醇濃度（%）B溶劑PH值C提取時間（min）D料液比70231:1080341:1290451:1419B正交實驗勻漿法提取鼠尾草酸研究4正交實驗因數水平表A乙醇濃正交實驗結果勻漿法提取鼠尾草酸研究

4因素實驗號ABCD鼠尾草酸的提取率%鼠尾草酸的純度%綜合評價因數170231:100.87520.63529.385270341:121.08221.28932.109370451:141.10019.48230.482480241:141.23621.76534.125580351:101.12320.47331.703680431:121.25521.05433.604790251:121.31019.48232.582890331:141.28720.56333.433990441:101.25920.36532.955正交實驗結果數據表定義：提取率數值的十倍與純度的數值之和為綜合評價因數20B正交實驗結果勻漿法提取鼠尾草酸研究4因素ABCD鼠尾草鼠尾正交實驗結果勻漿法提取鼠尾草酸研究

4以鼠尾草酸提取率為指標，極差分析表因素ABCDk11.1091.1401.1391.086k21.2051.1641.1921.216k31.2851.2051.1781.208R0.2660.0650.0530.130結論：影響勻漿提取鼠尾草酸的提取率的各因素主次順序為：乙醇濃度>料液比>溶劑PH值>提取時間21B正交實驗結果勻漿法提取鼠尾草酸研究4以鼠尾草酸提取率為指標正交實驗結果勻漿法提取鼠尾草酸研究

4以鼠尾草酸的純度指標，極差分析表結論：影響勻漿提取鼠尾草酸的純度的各因素主次順序為：提取時間>乙醇濃度>溶劑PH值>料液比因素ABCDk120.47220.62720.75120.491k221.09720.77821.14320.611k320.13720.30019.81220.603R0.9600.4781.3310.12022B正交實驗結果勻漿法提取鼠尾草酸研究4以鼠尾草酸的純度指標，正交實驗結果勻漿法提取鼠尾草酸研究

4綜合評價分析表結論：得出最佳的提取工藝條件A2B2C3D2，即乙醇濃度為80%，溶劑PH值為3.0（HCl調節），提取時間為5min及料液比為1:12。因素ABCDk130.65932.03132.14131.348k233.14432.41533.06332.765k332.99032.34731.58932.680R2.4850.3841.4741.41723B正交實驗結果勻漿法提取鼠尾草酸研究4綜合評價分析表結論：得優化條件下進行勻漿提取鼠尾草酸勻漿法提取鼠尾草酸研究

4標準品譜圖樣品譜圖結果：提取率達到1.35%，平均純度達到22.3%

24B優化條件下進行勻漿提取鼠尾草酸勻漿法提取鼠尾草酸研究4標5柱層析法純化鼠尾草酸

硅膠層析法的分離原理是根據物質在硅膠上的吸附力不同而得到分離，一般情況下極性較大的物質易被硅膠吸附，極性較弱的物質不易被硅膠吸附，整個層析過程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸過程。具體流程操作如下圖。。迷迭香葉干200g料液比：1：15蒸餾提取精油乙醇濃度：80%溶劑PH：3.0（HCl調節）提取時間：5min料液比：1：12勻漿提取提取液過濾濾液60℃烘干準確稱量5g30ml蒸餾水，水洗40℃水域振蕩30min過濾沉淀100ml乙醇溶解20g活性碳脫色60℃水域振蕩30min過濾濾液50℃減壓濃縮60℃烘箱烘干得粗提物硅膠柱層析分段收集流分劑HPLC分段檢測回收洗脫劑烘干得產品HPLC檢測25B5柱層析法純化鼠尾草酸硅膠層析法的分離原理是根據物質在硅膠5柱層析法純化鼠尾草酸

硅膠柱層析柱層析條件的建立柱層析條件的建立洗脫劑：乙酸乙酯洗脫劑比例：乙酸乙酯:正丁烷=4:6硅膠粒度：100-200目硅膠初始含水量：6%徑高比：1/10流速：4ml/min負載量：0.3g粗提物:20g硅膠鼠尾草酸洗脫曲線注：接樣管容量為10ml26B5柱層析法純化鼠尾草酸硅膠柱層析柱層析條件的建立洗脫劑：5柱層析法純化鼠尾草酸

硅膠柱層析結果柱層析條件的建立產品液相色譜圖結論鼠尾草酸產品純度為76.5%27B5柱層析法純化鼠尾草酸硅膠柱層析結果柱層析條件的建立產品分析方法的建立提取方法的選擇勻漿法提取工藝優化硅膠柱層析法純化CA鹽酸調節PH值為3.0的體積分數為80%乙醇作為提取溶劑，提取時間為5min及料液比為1：12.鼠尾草酸線性回歸方程y=2E+07x+2345806總結勻漿提取操作簡單、快速、充分，并能達到較高的提取效果濃縮物真空干燥得產物純度可達到76.5%的鼠尾草酸產品。28B分析方法的建立提取方法的選擇勻漿法提取工藝優化硅膠柱層析法純ThankYou!感謝…老師老師的悉心指導。感謝…等同學在實驗過程中的大力支持和幫助同時論文評閱人和答辯委員會所有老師致以最誠摯的謝意29BThankYou!感謝…老師老師的悉心指導。29B

海南大學學士論文答辯論文題目：迷迭香中鼠尾草酸的提取工藝研究

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班級：姓名：學號：30B海南大學學士論文答辯論文題目：迷迭香中鼠尾草酸的提取工藝Contents前言1鼠尾草酸的分析方法2鼠尾草酸提取方法的選擇

3勻漿法提取鼠尾草酸研究

456柱層析法純化鼠尾草酸

總結31BContents前言1鼠尾草酸的分析方法2鼠尾草酸提取方法的前言迷迭香主要分布：法國、西班牙、南斯拉夫、突尼斯、摩洛哥、保加利亞，等主要成分：萜類、黃酮類、酚酸類及其他化學物質抗氧化成分：鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酸、迷迭香酚、表迷迭香酚，等主要作用：抗氧化、抑菌、抗病毒、抗癌及作香料，等132B前言13B前言鼠尾草酸（CA）分子式：C20H28O4

結構式：主要作用：抗氧化、抗癌、抗炎及美容，等

意義：隨著科技的不斷發展及其市場需求量的不斷擴大，對鼠尾草酸的要求不斷提高。目前國內對鼠尾草酸的提取率并不理想，因此，對迷迭香中鼠尾草酸的提取工藝研究有重大意義。本實驗主要是建立一個最佳的提取方法及工藝，以提高迷迭香中鼠尾草酸的提取率。133B前言14B色譜條件的建立色譜柱：WatersC18（150×4.6mm,5um）；流動相：乙腈-0.5%磷酸水溶液（75:25）；流速：1.0mL/min；檢測器：紫外檢測器；檢測波長：230nm；靈敏度:0.16AFUS；柱溫:室溫（25℃）。鼠尾草酸的分析方法234B色譜條件的建立鼠尾草酸的分析方法25B標準曲線繪制配1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml混合標準品溶液，溶解液使用甲醇鼠尾草酸的分析方法235B標準曲線繪制鼠尾草酸的分析方法26B取1ml經0.45μm微孔濾膜過濾之后進行HPLC檢測，得C1提取液置于60℃烘箱中烘干,取烘干樣稱量得m2,用無水乙醇溶解、定容于25mL棕色容量瓶,。過濾后進行HPLC檢測.得C2鼠尾草酸的分析方法2鼠尾草酸提取量(mg/g)：q=c1×v1÷m鼠尾草酸純度(%)：p=c2×v2÷m2鼠尾草酸提取率(%)：w=c2×v2÷m注：v1為提取液體積(mL),m為原料(迷迭香)質量(g)；v2為乙醇溶解液體積25ml36B取1ml經0.45μm微孔濾膜過濾之后進行HPLC檢測，實驗部分大綱Phase1Phase2Phase3提取方法的選擇提取工藝優化分離純化37B實驗部分大綱Phase1Phase2Phase3提取方勻漿提取法超聲波提取法回流提取法常溫浸提法其他方法提取方法鼠尾草酸提取方法的選擇

338B勻漿超聲波回流常溫浸其他提取方法鼠尾草酸提取方法的選擇39鼠尾草酸提取方法的選擇

3不同提取方法各項指標的比較提取方法提取溫度/℃提取時間/h提取率/%超聲波提取法250.51.194回流提取法8020.947常溫浸提法25240.742勻漿提取法250.0671.153準確稱取迷迭香干葉10g，加入體積溶劑為80%乙醇溶液200ml置于燒瓶中。其他條件根據下表進行實驗，并計算出該方法下所得到的鼠尾草酸提取率。勻漿提取和其它提取方法相比,勻漿提取所用時間短,不需加溫,提取率高,因此,勻漿提取在提高產率、節省時間等方面具有明顯的優勢。39B鼠尾草酸提取方法的選擇3不同提取方法各項指標的比較提取方法勻漿法提取鼠尾草酸研究

4勻漿提取原理圖勻漿提取是指生物組織通過加入溶劑進行組織勻漿，以提取活體組織中有效成分的一種提取方法，將植物細胞膜和細胞壁破裂，溶劑便較易進入細胞內部，活性物質便溶解于溶劑中，再由傳質擴散作用，進入溶劑主體。所以有效成分的提取實際上是目標成分從細胞內釋放、擴散到溶劑中的非穩態非平衡過程。40B勻漿法提取鼠尾草酸研究4勻漿提取原理圖勻漿提取是指生物組織實驗操作流程勻漿法提取鼠尾草酸研究

4迷迭香干葉蒸餾法取精油單因素實驗正交實驗優化條件下提取勻漿提取分析計算41B實驗操作流程勻漿法提取鼠尾草酸研究4迷迭香干葉蒸餾法取精油蒸餾法提取精油勻漿法提取鼠尾草酸研究

4條件60g迷迭香葉600ml蒸餾水加熱2.5小時裝置圖42B蒸餾法提取精油勻漿法提取鼠尾草酸研究4條件裝置圖13B乙醇濃度選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究（單因素實驗）

4條件10g迷迭香葉150ml不同濃度乙醇勻漿4min（乙醇濃度：50%、60%、70%、80%、90%、100%）結果隨著乙醇濃度體積分數的升高，鼠尾草酸溶出程度提取量也隨之增加。但當乙醇濃度達到80%時，鼠尾草酸和鼠尾草酚的溶出程度均達到最大值，繼續增加乙醇的體積分數時，鼠尾草酸的提取量并無明顯升高，反而，鼠尾草酸的純度明顯下降。結論選擇體積分數為80%的乙醇作為優化提取溶劑43B乙醇濃度選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究（單因素實驗）4條件（提取溶劑PH值選擇

勻漿法提取鼠尾草酸研究

4條件10g迷迭香葉150ml80%乙醇勻漿4min鹽酸和氫氧化鈉調節PH（PH值：2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0）結果在PH值為3-4的時候鼠尾草酸氧化成鼠尾草酚的量最少，因為酸性條件所提供的質子有助于保護不向鼠尾草酚轉化，但是酸性太強對設備的腐蝕性增加。結論選擇提取溶劑的PH值為3.0作為最佳提取溶劑的PH值44B提取溶劑PH值選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究4條件（PH值：提取溶劑調節酸種類的選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究

4條件10g迷迭香葉150ml80%乙醇勻漿4min（調節酸種類：鹽酸、硫酸、檸檬酸、磷酸）結果使用磷酸作為調節酸時鼠尾草酸轉化成鼠尾草酚的量最多，保護作用最差，在達到相同PH值的時候，鹽酸的用量最少。結論選擇鹽酸作為最佳酸性調節物質。45B提取溶劑調節酸種類的選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究4條件（調料液比的選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究

4條件10g迷迭香葉80%乙醇勻漿4min鹽酸調節PH為3.0（料液比：1:6、1:8、1:10、1:12、1:14、1:16、1:20）結果隨著料液比的增大，鼠尾草酸的提取量也一直在增加，當料液比達到1:12后，再增加料液比，鼠尾草酸的提取量變化量較少。

結論選擇料液比為1:12優化條件46B料液比的選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究4條件（料液比：1:6勻漿提取時間的選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究

4條件10g迷迭香葉120ml80%乙醇PH為3.0（時間：1、2、3、4、5、6、7min）結果隨著提取時間的增加，鼠尾草酸的提取量也不斷增加，但在四分鐘后基本無明顯變化進一步延長勻漿時間，可能會導致某些本不易溶出的雜質成分也被溶劑溶出，從而使鼠尾草酸的純度有所下降。從提取效率及節能的方面考慮，應選擇在最短的時間內，達到近于最好的提取效果。結論選擇勻漿時間4min作為優化條件47B勻漿提取時間的選擇勻漿法提取鼠尾草酸研究4條件（時間：1正交實驗勻漿法提取鼠尾草酸研究

4正交實驗因數水平表A乙醇濃度（%）B溶劑PH值C提取時間（min）D料液比70231:1080341:1290451:1448B正交實驗勻漿法提取鼠尾草酸研究4正交實驗因數水平表A乙醇濃正交實驗結果勻漿法提取鼠尾草酸研究

4因素實驗號ABCD鼠尾草酸的提取率%鼠尾草酸的純度%綜合評價因數170231:100.87520.63529.385270341:121.08221.28932.109370451:141.10019.48230.482480241:141.23621.76534.125580351:101.12320.47331.703680431:121.25521.05433.604790251:121.31019.48232.582890331:141.28720.56333.433990441:101.25920.36532.955正交實驗結果數據表定義：提取率數值的十倍與純度的數值之和為綜合評價因數49B正交實驗結果勻漿法提取鼠尾草酸研究4因素ABCD鼠尾草鼠尾正交實驗結果勻漿法提取鼠尾草酸研究

4以鼠尾草酸提取率為指標，極差分析表因素ABCDk11.1091.1401.1391.086k21.2051.1641.1921.216k31.2851.2051.1781.208R0.2660.0650.0530.130結論：影響勻漿提取鼠尾草酸的提取率的各因素主次順序為：乙醇濃度>料液比>溶劑PH值>提取時間50B正交實驗結果勻漿法提取鼠尾草酸研究4以鼠尾草酸提取率為指標正交實驗結果勻漿法提取鼠尾草酸研究

4以鼠尾草酸的純度指標，極差分析表結論：影響勻漿提取鼠尾草酸的純度的各因素主次順序為：提取時間>乙醇濃度>溶劑PH值>料液比因素ABCDk120.47220.62720.75120.491k221.09720.77821.14320.611k320.13720.30019.81220.603R0.9600.4781.3310.12051B正交實驗結果勻漿法提取鼠尾草酸研究4以鼠尾草酸的純度指標，正交實驗結果勻漿法提取鼠尾草酸研究

4綜合評價分析表結論：得出最佳的提取工藝條件A2B2C3D2，即乙醇濃度為80%，溶劑PH值為3.0（HCl調節），提取時間為5min及料液比為1:12。因素ABCDk130.65932.031