1、主要內容ABO血型鑒定RhD血型鑒定交叉配血試驗紅細胞抗體篩查及鑒定血型鑒定和交叉配血自動分析吸收放散試驗1紅細胞血型和相關檢測10/8/2022主要內容ABO血型鑒定1紅細胞血型和相關檢測10/3/202教學目標掌握ABO和Rh血型鑒定、交叉配血試驗原理、方法和質量控制熟悉紅細胞不規則抗體篩查及鑒定方法了解吸收放散試驗2紅細胞血型和相關檢測10/8/2022教學目標掌握ABO和Rh血型鑒定、交叉配血試驗原理、方法和質一、ABO血型鑒定（一）鹽水介質試管法（二）鹽水介質玻片法（三）微柱凝膠血型定型檢測卡法（四）質量保證：試管法、玻片法、卡式（五）方法學評價（六）臨床應用（七）不一致原因及解決方

2、法3紅細胞血型和相關檢測10/8/2022一、ABO血型鑒定（一）鹽水介質試管法3紅細胞血型和相關檢測ABO血型鑒定原理正向定型：已知的特異性抗體（標準血清）檢查紅細胞的未知抗原反向定型：已知的血型的標準紅細胞檢查血清中的未知抗體A抗原B抗原A和B抗原無A和B抗原抗A抗體抗B抗體抗A、抗B抗體無抗A、抗B抗體10/8/20224紅細胞血型和相關檢測ABO血型鑒定原理正向定型：已知的特異性抗體（標準血清）檢查ABO血型鑒定結果判斷 正向定型（標準血清+被檢者紅細胞） 反向定型 （標準紅細胞+被檢者血清）結果判斷 抗A 抗B A型紅細胞 B型紅細胞 O型紅細胞 + - - + - A - + +

3、- - B + + - - - AB - - + + - O10/8/20225紅細胞血型和相關檢測ABO血型鑒定結果判斷 正向定型 試管法6紅細胞血型和相關檢測10/8/2022試管法6紅細胞血型和相關檢測10/3/2022試管法結果判定紅細胞凝集強度判斷標準10/8/20227紅細胞血型和相關檢測試管法結果判定紅細胞凝集強度判斷標準10/3/20227紅細瓷板法8紅細胞血型和相關檢測10/8/2022瓷板法8紅細胞血型和相關檢測10/3/2022結果判定10/8/20229紅細胞血型和相關檢測結果判定10/3/20229紅細胞血型和相關檢測 凝膠技術的原理反應室外管壁反應室底孔內套管壁凝膠

4、或玻璃珠親和凝膠試劑或鹽水特殊粘液10紅細胞血型和相關檢測10/8/2022 凝膠技術的原理反應室外管壁反應室底孔內套管壁凝膠凝膠技術的原理：A、反應室：下端底孔很小，液體在孵育過程中不會流入下方微柱中。B、試劑或鹽水層：紅細胞在離心力作用下穿越該層，紅細胞與反應室中的血清分離并與該層液體中的試劑反應。C、粘液：親和柱中有一層粘液，作用與“試劑或鹽水層”相同。11紅細胞血型和相關檢測10/8/2022凝膠技術的原理：A、反應室：下端底孔很小，液體在孵育過程中不原理：凝膠分子篩和親和效應微柱凝膠柱中填充凝膠（葡聚糖），及相應試劑（抗體或抗原）。凝膠分子間的間隙只允許游離紅細胞通過，分子排阻層析原

5、則將發生凝集反應的紅細胞阻滯于凝膠之內，而未凝集的游離紅細胞則穿過微孔運動到管底，從而判定有無凝集反應。12紅細胞血型和相關檢測10/8/2022原理：凝膠分子篩和親和效應12紅細胞血型和相關檢測10/3/ 結果判定新鄉醫學院第三臨床檢驗教研室10/8/202213紅細胞血型和相關檢測 結果判定新鄉醫學院第三臨床檢驗教研微孔板法14紅細胞血型和相關檢測10/8/2022微孔板法14紅細胞血型和相關檢測10/3/2022（四）質量保證試管法標記加樣量、加樣順序溶血是一種陽性反應玻片法標記正定型顯微鏡陰性確認10/8/202215紅細胞血型和相關檢測（四）質量保證試管法10/3/202215紅細胞

6、血型和相關檢微柱凝膠血型定型檢測卡血清標本應完全取出纖維蛋白，血漿標本建議EDTA-K2或枸櫞酸鹽康寧先加紅細胞懸液，再加血漿或抗體試劑紅細胞懸液和血漿各加50ul按照說明書操作（四）質量保證10/8/202216紅細胞血型和相關檢測微柱凝膠血型定型檢測卡（四）質量保證10/3/202216紅（五）方法學評價試管法：常用，廣泛，較玻片法靈敏，結果準確，反應時間短，結果不能保存，人為因素大玻片法：操作簡單、無需特殊儀器，適用于血型普查；靈敏度差，反應時間長，不能用于反定型，結果不能保存，人為因素影響大，易發生血液污染微柱凝膠血型定型檢測卡法：特異性強、靈敏度高，結果準確，保持時間長，標本和試劑用

7、量少，操作可以標準化、自動化，減少了醫源性污染，但需要專門離心設備和試劑卡，成本較高10/8/202217紅細胞血型和相關檢測（五）方法學評價試管法：常用，廣泛，較玻片法靈敏，結果準確，輸血治療的首要步驟組織器官移植新生兒溶血病ABO正反定型的臨床意義18紅細胞血型和相關檢測10/8/2022輸血治療的首要步驟ABO正反定型的臨床意義18紅細胞血型和相ABO正反定型不符分析基本程序首先重復試驗重新采集獻血者與受血者血液標本查詢受血者既往病史及輸血史和用藥史等多次洗滌標本紅細胞應用抗-AB、抗-A1、抗-H檢測紅細胞19紅細胞血型和相關檢測10/8/2022ABO正反定型不符分析基本程序首先重復

8、試驗19紅細胞血型和相錯加試劑或標本技術和操作受血者紅細胞或血清ABO正反定型不一致的原因試劑失效或污染細胞與血清間比例不適當溶血現象未能識別漏加試劑結果記錄或判斷錯誤血清異常紅細胞致敏近期輸血疾病導致抗原減弱抗體減弱不規則抗體年齡近期進行大量血漿置換治療20紅細胞血型和相關檢測10/8/2022錯加試劑或標本技術和操作受血者紅細胞或血清ABO正反定型不一RhD定型及其常見問題1.Rh定型RhD定型，試管法最經典，多使用微柱凝膠卡2.RhD陰性確認IgM抗-D陰性三個廠家IgG抗-D進行確認抗人球蛋白法進行確認三種IgG抗-D試劑均為陰性，報RhD陰性一種或一種以上IgG抗-D試劑為陽性，報弱

9、D21紅細胞血型和相關檢測10/8/2022RhD定型及其常見問題1.Rh定型三個廠家IgG抗-D進行確概念：檢測受血者和供血者血液中是否含有不相配合的成分，是輸血前確保受血者輸血安全必不可少的試驗包括：主側配血和次側配血主側是受血者血清與供血者紅細胞相配的一側次側是受血者紅細胞與供血者血清相配的一側。三、交叉配血試驗22紅細胞血型和相關檢測10/8/2022概念：檢測受血者和供血者血液中是否含有不相配合的成分，是輸血交叉配血的主次側10/8/202223紅細胞血型和相關檢測交叉配血的主次側10/3/202223紅細胞血型和相關檢測（一）鹽水介質交叉配血試驗本質凝集反應，直接凝集試驗檢測IgM

10、類抗體方法：試管法ABO同型配血，主側和次側均無凝集及溶血，表示無輸血禁忌，可以輸血24紅細胞血型和相關檢測10/8/2022（一）鹽水介質交叉配血試驗本質凝集反應，直接凝集試驗24紅細 鹽水介質配血方法患者獻血者主側次側離心看結果陽性陰性25紅細胞血型和相關檢測10/8/2022 鹽水介質配血方法患者獻血者主側次側離心陽性陰性25紅（二） 抗球蛋白介質交叉配血試驗抗人球蛋白試驗：又稱Coombs試驗，是一種檢查不完全抗體的敏感方法分類：直接抗球蛋白試驗和間接抗球蛋白試驗26紅細胞血型和相關檢測10/8/2022（二） 抗球蛋白介質交叉配血試驗抗人球蛋白試驗：又稱Coo抗球蛋白試驗原理Coom

11、bs利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接與紅細胞表面抗原結合的特異抗體，使紅細胞凝集。直接試驗：是檢查被檢紅細胞上有無不完全抗體間接試驗：是檢查血清中游離的不完全抗體 27紅細胞血型和相關檢測10/8/2022抗球蛋白試驗原理Coombs利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連直接Coombs試驗抗人免疫球蛋白自身抗體28紅細胞血型和相關檢測10/8/2022直接Coombs試驗抗人免疫球蛋白自身抗體28紅細胞血型和相間接Coombs試驗抗人免疫球蛋白同種異型抗體29紅細胞血型和相關檢測10/8/2022間接Coombs試驗抗人免疫球蛋白同種異型抗體29紅細胞血型2不完全抗體可以結合在紅細胞表面,但是不

12、能和兩個紅細胞同時結合（致敏）。3加入抗人球蛋白1紅細胞彼此之間有一定的間距4抗人球蛋白可以同時和兩個不完全抗體的FC段結合，從而把紅細胞連接在一起抗人球蛋白交叉配血法示意圖30紅細胞血型和相關檢測10/8/20222不完全抗體可以結合在紅細胞表面,但是不能和兩個紅細胞同時結 抗球蛋白配血方法患者獻血者主側次側37 37水浴30分鐘三洗 31紅細胞血型和相關檢測10/8/2022 抗球蛋白配血方法患者獻血者主側次側37 37三 抗球蛋白方法配血方法加抗球蛋白離心看結果陽性陰性抗球蛋白試劑上海市血液中心血32紅細胞血型和相關檢測10/8/2022 抗球蛋白方法配血方法加抗球蛋白離心陽性陰性抗球蛋

13、白試劑結果判讀直接抗球蛋白試驗陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，被檢管凝集，判定為陽性陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，被檢管不凝集，需要做陰性確認后判定結果（無凝集的被檢管中加入IgG抗-D致敏紅細胞后離心，出現凝集判陰性，否則重新試驗陽性對照管不凝集和（或）陰性對照管凝集，結果不可信不發報告，分析原因重做33紅細胞血型和相關檢測10/8/2022結果判讀直接抗球蛋白試驗33紅細胞血型和相關檢測10/3/2間接抗球蛋白試驗陽性對照管呈現凝集反應，陰性對照管未呈現凝集反應，被檢管呈現凝集反應為陽性結果，被檢者血清內含有抗體，如果自身對照無凝集，同種抗體；如果被檢者結果陰性，被檢者血清中未被查出

14、意外抗體。陽性對照管不凝集和（或）陰性對照管出現凝集，實驗失敗。結果判讀34紅細胞血型和相關檢測10/8/2022間接抗球蛋白試驗結果判讀34紅細胞血型和相關檢測10/3/2抗球蛋白試劑不純假陽性假陰性紅細胞洗滌已凝集紅細胞質量不抗凝標本漏加試劑紅細胞、血清及試劑質量洗滌不充分操作過程不連續離心過度紅細胞過多或過少血清濃度過大孵育時間和溫度不當前帶現象間接抗球蛋白試驗鹽水保存不當紅細胞直抗陽性35紅細胞血型和相關檢測10/8/2022抗球蛋白試劑不純假陽性假陰性紅細胞洗滌已凝集紅細胞質量不抗凝（三） 低離子聚凝胺介質交叉配血試驗 是一種快速、簡便、紅細胞不完全抗體的方法多數IgG抗體能夠被檢出

15、，但IgG抗-K抗體除外漢族至今未發現K抗原陽性，也未檢出抗-K抗體36紅細胞血型和相關檢測10/8/2022（三） 低離子聚凝胺介質交叉配血試驗 是一種快速、簡便、紅聚凝胺介質試驗技術紅細胞表面帶有大量的負電荷，懸浮在電解質溶液中，會吸引大量陽離子，紅細胞則被擴散的雙層離子云所圍繞，形成zeta電位。37紅細胞血型和相關檢測10/8/2022聚凝胺介質試驗技術紅細胞表面帶有大量的負電荷，懸浮在電解質溶紅細胞表面電荷及其相互之間的距離38紅細胞血型和相關檢測10/8/2022紅細胞表面電荷及其相互之間的距離38紅細胞血型和相關檢測10原理聚凝胺技術首先利用低離子溶液（LIM）降低介質的離子強度

16、，減少紅細胞周圍的電子云再加入聚凝胺溶液，溶解后產生很多正電荷，中和紅細胞表面帶有的負電荷，紅細胞zeta電位降低，縮短紅細胞距離，產生非特異性聚集最后加入懸浮液，具有中和聚凝胺陽離子的作用，使正常紅細胞的非特異性凝集散開，特異性凝集仍然存在39紅細胞血型和相關檢測10/8/2022原理聚凝胺技術首先利用低離子溶液（LIM）降低介質的離子強度1 紅細胞間有一定間距2 加入聚凝胺后，可以縮短紅細胞之間的距離，使其非特異性凝集3 加入枸櫞酸鈉，可以中和聚凝胺4 紅細胞的非特異性凝集消失聚凝胺交叉配血技術示意圖1聚凝胺枸櫞酸鈉40紅細胞血型和相關檢測10/8/20221 紅細胞間有一定間距2 加入聚

17、凝胺后，可以縮短紅細胞之間的1 紅細胞上已有不完全抗體致敏2 加入聚凝胺后，縮短紅細胞之間的距離，讓不完全抗體可以同時與兩個紅細胞結合使其特異性凝集3 加入枸櫞酸鈉中和聚凝胺4 由于不完全抗體的結合，紅細胞的特異性凝集不消失聚凝胺交叉配血技術示意圖2聚凝胺枸櫞酸鈉不完全抗體41紅細胞血型和相關檢測10/8/20221 紅細胞上已有不完全抗體致敏2 加入聚凝胺后，縮短紅細胞之 聚凝胺(Polybrene)配血方法患者獻血者主側次側室溫放置1 分鐘Polybrene上海市血液中心血主次側均加聚凝胺42紅細胞血型和相關檢測10/8/2022 聚凝胺(Polybrene)配血方法患者獻血者主側 聚凝胺

18、(Polybrene)配血方法離心聚凝胺引起紅細胞非特異性凝集陽性陰性重懸液上海市血液中心血主次側均加重懸液看結果43紅細胞血型和相關檢測10/8/2022 聚凝胺(Polybrene)配血方法離心聚凝胺引起紅細注意事項不能使用含枸櫞酸鈉和肝素抗凝標本按比例加樣，非特異凝集60秒內觀察結果出現不配合試驗時，抗球蛋白重復，結果不一致時以抗球蛋白試驗結果為準一般使用血清對Kell系統檢測不理想按照說明書44紅細胞血型和相關檢測10/8/2022注意事項不能使用含枸櫞酸鈉和肝素抗凝標本44紅細胞血型和相關方法學評價鹽水介質法：適用于ABO血型交叉配血，操作簡單、快速，不能檢出不相配合的IgG類抗體抗

19、球蛋白試驗：結果準確，檢測不完全抗體最可靠的方法，操作繁瑣費事，試劑較貴低離子聚凝胺介質法：應用廣泛、快速、準確，可檢測IgM、IgG類抗體，需特殊試劑，操作復雜。45紅細胞血型和相關檢測10/8/2022方法學評價鹽水介質法：適用于ABO血型交叉配血，操作簡單、快臨床應用可以發現ABO血型鑒定的錯誤，如A亞型發現亞型配血不合的情況發現其他血型抗體或不規則抗體46紅細胞血型和相關檢測10/8/2022臨床應用可以發現ABO血型鑒定的錯誤，如A亞型46紅細胞血型四、紅細胞抗體篩查與鑒定臨床輸血技術規范 第四章第17條：“凡遇以下情況必須按全國臨床檢驗操作規程有關規定做抗體篩選試驗：1.交叉配血不

20、合的； 2.對有輸血史、妊娠史或短期內需接受多次輸血者47紅細胞血型和相關檢測10/8/2022四、紅細胞抗體篩查與鑒定臨床輸血技術規范47紅細胞血型和為什么要開展輸血前的“抗體篩選”檢查 1.目前已知紅細胞有30個血型系統（近300個抗原）。紅細胞抗原的多樣性決定了抗體的多樣性，檢測抗A、抗B、抗D（ABO血型、Rh血型）可確保絕大多數病人的輸血安全，但仍不能避免因血型不合（ABO、Rh血型以外）而引發的溶血。48紅細胞血型和相關檢測10/8/2022為什么要開展輸血前的“抗體篩選”檢查48紅細胞血型和相關檢測2.臨床有的病人出現慢性（遲緩性）溶血反應，易忽視或引不起臨床醫師視。 （理論上講

21、，成年人每輸1U的濃縮紅細胞，在不丟失、不被破壞（溶血）的前提下，應能提升Hb5-10g/L (0.5-1g/dl),保持15-30天。如果輸3-4U RBC，病人Hb上升不到10g/L，或幾天后（1周內）Hb仍舊下降到原來水平，甚至更低。這種情況，就要考慮是否有慢性溶血反應存在。）3.利于早期發現和確認具有臨床意義的抗體，充足的時間來選擇相配合的血，避免患者病情的延誤。49紅細胞血型和相關檢測10/8/20222.臨床有的病人出現慢性（遲緩性）溶血反應，易忽視或引不起臨什么叫“不規則抗體篩查”檢查？ 1.不規則抗體的含義：除ABO系統外，其它系統產生的抗不符合Landsteiner規則，稱為

22、不規則抗體或意外抗體稱為不規則抗體。如抗D、抗N、抗M、jk-抗體。 2.“不規則抗體篩查”的含義：用具備有臨床意義的血型抗原的O型紅細胞，檢測病人血清（含多種抗體）；如果出現聚集現象，則提示病人有不規則抗體存在，可判為“抗體篩選”陽性。50紅細胞血型和相關檢測10/8/2022什么叫“不規則抗體篩查”檢查？ 1.不規則抗體的含義：除A不規則抗體的篩查和鑒定患者血清+試劑篩選紅細胞 鹽水介質 聚凝胺介質 抗人球蛋白介質 酶介質法51紅細胞血型和相關檢測10/8/2022不規則抗體的篩查和鑒定患者血清+試劑篩選紅細胞51紅細胞血型篩選細胞要求抗體篩選用紅細胞懸液（1#、2#、3#）試劑紅細胞必須

23、含有下列抗原：D,C,E,c,e,M,N,S,s,P1,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,和Jkb，所選用的2-3個O型紅細胞的抗原還應是互補的，純合子基因所表達的抗原更有利于相應抗體的檢出52紅細胞血型和相關檢測10/8/2022篩選細胞要求52紅細胞血型和相關檢測10/3/2022不規則抗體鑒定不規則抗體篩查陽性后，進行抗體鑒定，明確抗體的類別譜細胞與待檢者血清反應，反應格局，抗體的特異性譜細胞由廣泛挑選并已詳細檢測血型抗原的8-16人份O型紅細胞組成一套譜細胞不可能對所有不規則抗體都進行鑒定的，鑒定困難時，更換廠商提供的譜細胞53紅細胞血型和相關檢測10/8/2022不規則

24、抗體鑒定不規則抗體篩查陽性后，進行抗體鑒定，明確抗體的 六、吸收放散試驗 乙醚放散法試 驗 原 理操 作 步 驟注 意 事 項臨 床 應 用吸收試驗放散試驗試 驗 原 理試 劑操 作 步 驟注 意 事 項臨 床 應 用 加熱放散法試 驗 原 理操 作 步 驟注 意 事 項臨 床 應 用54紅細胞血型和相關檢測10/8/2022 六、吸收放散試驗 乙醚放散法試 驗 原 理吸收試驗放散試驗吸收試驗原理待檢紅細胞已知效價的抗A或抗B血清吸收液已知抗原的紅細胞滴定比較吸收前后血清中抗體效價紅細胞上有無相應抗原及其強度間接判定待檢紅細胞血型及其亞型種類10/8/202255紅細胞血型和相關檢測吸收試驗原理待已知吸收液已知抗原滴定比較吸收紅細胞上間接判定熱放散試驗原理 待檢紅細胞分型血清物理條件的改變（加熱）抗體待檢紅細胞試 劑紅細胞確定抗體的種類和強度判定待檢紅細胞上抗原的型別放散凝集或致敏10/8/202256紅細胞血型和相關檢測熱放散試驗原理 待檢分物理條件抗乙醚放散試驗實驗原理受檢者血 清已知抗原的紅細胞致敏已致敏紅細胞乙醚放散液除去乙醚后鑒定抗體57紅細胞血型和相