1、XXXX醫院核酸檢測實驗室（PCR）消毒規范一、PCR實驗室設計核心問題二、PCR實驗污染來源三、PCR實驗污染預防措施四、PCR實驗室空氣流向管理與環境消毒五、實驗室日常清潔消毒六、試驗結束后物品及環境處理七、其他消毒方法PCR實驗，即臨床基因擴增實驗，是專門用來檢驗艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測手段。它可以通過將病毒體內所含的基因進行擴增的方法，測出一些病毒含量不高的感染者體內是否含有特定的病毒。就新冠病毒核酸檢測來說，RT-PCR是目前使用最廣泛和較準確的篩選和確認方法，大規模核酸檢測，必然會引起相關機構單位著力建設規范的臨床PCR實驗室。但是，建立一個PCR實驗室，

2、其實就是在建設一個平臺，考驗的不僅僅是一個醫療機構的實驗能力，也考驗著整個醫療機構的整體能力。一、PCR實驗室設計核心問題實驗室的平面布局、空調通風系統設計、氣流控制等都是圍繞同一個核心問題進行“避免污染”，任何級別的醫院在建設PCR實驗室時，均需要提前考量各個因素，以保證標本的全環節質量及實驗室的生物安全。1、建設要求。PCR實驗室的建設需要設置標準的“四區”：試劑準備區、標本制備區、PCR擴增檢測區和擴增產物檢測區。每個獨立實驗區設置有緩沖區，各區通過氣壓調節，使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染，并降低擴增產物對人員和環境的污染。2、人員要求。進入PCR實驗室，需要經過從基礎

3、理論、實驗原理、規范操作、質量保證到注意事項等規范的培訓，并獲取PCR上崗證。3、檢測風險。檢測過程中，樣本的開蓋，核酸提取的震蕩、離心都有可能產生氣溶膠，有感染的風險。4、防護要求。必須按照生物安全三級實驗室的個人防護要求進行。二、PCR實驗污染來源1、樣本間交叉污染：收集樣本的容器被污染或樣本密封不嚴導致外溢；不同樣本移液時忘記更換槍尖或未使用帶濾芯槍尖；移液器等實驗器具及耗材未及時消毒滅菌；不同樣本同時開蓋或樣本劇烈震蕩、反復吹吸導致氣溶膠形成擴散，相互交叉污染。2、實驗試劑污染：主要是在PCR組分試劑加樣過程中，由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。加樣過程中，

4、因為PCR試劑對溫度十分敏感，需要通過冰浴使得PCR試劑和PCR板/管處于0,但這個過程也充滿污染風險。3、擴增產物污染：大量拷貝的產物泄漏或擴增后的PCR反應管意外開蓋，這是PCR反應中最主要、最常見的污染問題。因為PCR產物拷貝量大，遠遠高于PCR檢測數個拷貝的極限，所以極微量的PCR產物污染，就可形成假陽性。4、克隆質粒污染：作為陽性質控品的克隆質粒外溢。三、PCR實驗污染預防措施對于低流行地區，PCR檢測人員經過嚴格培訓上崗后，核酸污染的風險相對較小，但在疫區超負荷工作時，就可能會遇到核酸污染的問題，可通過以下措施降低污染機會：1、正確佩戴手套：手套未緊密貼合拇指、食指和中指，在進行開

5、蓋操作時容易發生交叉污染。2、正確使用生物安全柜：簡單、整潔、避免通風口堵塞；操作前后紫外線照射，消毒劑隨手可及；廢液缸里有1/3體積的含氯消毒液，并且及時清理廢液缸，保證廢物不超過廢液缸體積的2/3。3、核酸提取儀去污染：每天多批次檢測時，在每一批次檢測完以后必須用75%的乙醇和核酸去除劑對儀器進行去污染。4、重視通風：不定期對房間進行通風，每次至少持續30min。5、PCR擴增區去污染：PCR反應管必須蓋緊，避免擴增后的核酸對環境的污染。6、實驗室隨手可及的消毒劑。四、PCR實驗室空氣流向管理與環境消毒PCR實驗室可分為試劑準備區、標本制備區、擴增區和產物檢測區四個區域，這四個區域在物理空

6、間上必須完全相互獨立，各區域無論是在空間上還是在使用中，應當始終處于完全的分隔狀態，不能有空氣的直接相通。所以，臨床基因擴增檢驗實驗室的空氣流向應按：試劑準備區一標本制備區一擴增區一產物檢測區，應時刻防止擴增產物順空氣氣流進入擴增前區域。可按照上述順序區域空氣壓力遞減的方式進行，也可通過安裝排風扇、負壓排風裝置或其他可行方式實現。產物分析區空氣流向專用走廊擴增區空氣流向標本制備區試劑準備區空氣流向空氣流向緩沖間兄緩沖添二三工作流向47產物分析區空氣流向專用走廊擴增區空氣流向標本制備區試劑準備區空氣流向空氣流向緩沖間兄緩沖添二三工作流向47臨床基因擴增檢驗實驗室的環境清潔：臨床基因擴增實驗室工作

7、規范中有對物表清潔、消毒的要求，不同的實驗區域應當有其各自的清潔用具以防止交叉污染。1、基本原則：由清潔區向污染區進行，潔具不可交叉。2、清潔消毒方向：準備區一標本制備區一擴增區一產物檢測區3、清潔消毒范圍：工作區域的物體表面（含桌、椅），可使用含氯消毒劑擦拭消毒，空氣和工作臺面可使用紫外線照射消毒，也可使用空間消毒器進行全環節消毒。4、不可使用紫外線消毒器及化學消毒進行有人狀態下的消毒。5、PCR室內的消毒應防止揚塵（減少人員走動）、殺滅DNA或RNA的基因片段。可選擇懸掛紫外線燈管進行空氣消毒，試驗前照射30-60分鐘，實驗結束照射30-60分鐘，必要時延長照射時間（可照射一夜）。6、終末

8、消毒：當出現實驗室污染時，應按要求立即撤出相關人員，在無人情況下可使用化學消毒劑進行終末消毒，如熏蒸法：過氧乙酸1g/m3加熱熏蒸（濕度70-90%），密閉24小時；氣溶膠噴霧：3%過氧化氫：20mL/m3氣溶膠噴霧；5%過氧乙酸2.5mL/m3氣溶膠噴霧（濕度20-40%）。五、實驗室日常清潔消毒1、每日工作前后，對工作區域表面、地面進行清潔并消毒，使用含氯消毒液擦拭。清潔采用濕式、不揚塵的方式進行。2、物品防塵存放。墻面定期清潔，有可見污染及時進行清潔消毒。3、配備移動紫外線消毒裝置進行空氣和物表的消毒。4、生物安全柜的消毒：每天工作前：對生物安全柜的內表面進行消毒，包括工作臺面和內壁使用

9、消毒劑擦拭。工作結束：柜內物品全部消毒后移出。消毒劑擦拭臺面四周、以及玻璃內側燈部位。消毒劑應選擇能夠殺死生物安全柜里可能發生的任何微生物（70%乙醇、含氯消毒劑）。在使用漂白劑等腐蝕性消毒劑后，還應用無菌水再次進行擦拭。停用生物安全柜前，運行5min以凈化內部空氣。終末消毒：需要進行終末消毒的時機：生物安全六、試驗結束后物品及環境處理1、做好廢液及固廢處理；2、實驗室空間消毒：在室溫，50-60%濕度條件下，使用過氧乙酸熏蒸2g/m3，過夜；或使用20g/l氣溶膠噴霧，用量8g/m3；3、物體表面消毒液：0.55%含氯消毒劑，現用現配，24小時內使用。七、其他消毒方法考慮到PCR實驗室屬于感染高風險區域，對其進行日常的清潔消毒及終末消毒，都需要在嚴密的防護下進行，給保潔工作帶來極大不便，那目前是否有一些較為便利的消毒方法呢？其實有的。目前市場上經常能看到一些空間消毒機器人、空間消毒器這類的高科技產品，也有一些便攜式的消毒器可以非常方便的用于PCR實驗室的消毒。這些空間消毒器可以像機器人一樣使用無線平板進行操控，隨時啟停，消毒者在實驗室之