1、朗沐融合蛋白分子構效解析醫學組第1頁目 錄血管新生與滲漏的機制康柏西普分子構效分析抗VEGF藥物的安全性第2頁血管新生與滲漏機制第3頁血管形成2種主要形式血管新生受到促進血管生成因子和抑制血管生成因子調控，這兩種因子平衡使血管處于正常生長狀態，一旦此平衡打破就會激活血管系統發芽長出新生血管血管發生 Vasculogenesis特征：胚胎發育時，由成血管細胞分化形成原始血管結構血管新生 Angiogenesis特征：從已經存在血管中構建出來新血管，毛細血管基底膜降解，內皮細胞遷移、增殖形成管狀結構第4頁血管新生過程當缺氧和炎癥發生后，相關細胞中促血管生成相關因子表示量上調，下游信號蛋白被激活，誘

2、導血管新生過程分為：基底膜降解增殖、出芽融合重排形成管腔分支出芽管腔延伸、血管成熟VEGF參加血管新生全部過程Potente et al., Cell ;146:87387.第5頁血管滲漏過程缺氧和炎癥情況下，相關因子表示增加，視網膜內皮細胞和RPE細胞間緊密連接破壞，通透性增加，血管中液體、離子及細胞滲漏，細胞本身腫脹過程分為：正常血管連接蛋白降低、消失血管壁渙散、解體視網膜脫離、水腫VEGF參加血管滲漏全部過程Laura Kowalczuk, et al. PLoS ONE 6(3): e17462.MarkE.Kleinman, et al. Ophthalmologica ;224(s

3、uppl 1):1624第6頁VEGF與VEGFR功效血管新生和血管滲漏過程：VEGF-A、VEGF-B和PlGF發揮主要作用VEGF-C發揮次要作用VEGFR-1和VEGFR-2傳遞對應信號淋巴管生成過程：VEGF-C和VEGF-D發揮作用VEGFR-3傳遞對應信號結合域二聚體域酪氨酸激酶區血管新生和滲漏淋巴管生成J.S. Penn, et al. Prog Retin Eye Res. , 27(4): 331371第7頁VEGF-A：最強生成因子Hiroyuki Takahashi, et al. Clinical Science, ,109, 227241 J.S. Penn, et

4、al. Prog Retin Eye Res. , 27(4): 331371Valeria Tarallo, et al. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. ,64: 185189結合在VEGFR-1D2區，誘導內皮細胞遷移結合在VEGFR-2D2和D3區，激活促有絲分裂、血管生成和通透性增加信號生理病理下最強促血管生成因子第8頁不一樣疾病中各VEGF表示量不一樣各類眼部疾病臨床表現及預后存在差異，與各VEGF亞型表示量差異相關JIAN-PING TONG, et al. Am J Ophthalmol ;14

5、1:456462Hidetaka Noma, et al. Invest Ophthalmol Vis Sci. ;55:38783885Marion Funk, et al. Invest Ophthalmol Vis Sci. ;50:10251032*：相較于白內障患者因子含量倍數第9頁VEGF-B：病理性存活因子Hiroyuki Takahashi, et al. Clinical Science, ,109, 227241 Xuri Li, et al. Trends in Molecular Medicine. , 18: 119-127Fang Zhang, et al. PNA

6、S, , 106: 6152-6157 Xiufeng Zhong, et al. Molecular Vision ; 17: 492-507 Maija Bry, et al. Physiol Rev , 94: 779794結合在VEGFR-1D2區促病理性血管新生和血視屏障破壞，加重滲漏對病理性血管生成和存活至關主要第10頁PlGF：病理性增強因子Sandro De Falco. Exp. Mol. Med. , 4(1): 1-9Mieke Dewerchin, Peter Carmeliet. Cold Spring Harb Perspect Med ;2:a011056Dani

7、el C. Hoffmann, et al. J. Biol. Chem. , 288:17976-17989.結合在VEGFR-1D2區直接誘導血管生長和成熟維持新生血管信號刺激增強血管新生信號第11頁PlGF 過表示引發微血管異常和血視屏障破壞非糖尿病白鼠眼內給予PlGF引發DR特征性改變視網膜下積液微動脈瘤形成與DR早期改變相同血管發芽血管通透性增加Kowalczuk L et al. PLoS One ; 6 (3): e17462.第12頁PlGF敲除后會降低血管變性、VEGF產生和視網膜血管滲漏，同時增加視網膜存活Huang H et al. Diabetes ; 64 (1):

8、200212. DR中PlGF 敲除后其它效果降低 視網膜缺氧誘導因子1表示.降低VEGF-A 表示.增加緊密連接蛋白 (ZO-1) 和粘附蛋白 (VE-cadherin)表示, 保持BRB完整性.增加Ang-1 (血管成熟) 表示第13頁單純抑制VEGF-A誘導VEGF-B和PlGF增加與VEGF對照組相比，經雷珠單抗處理后RPE細胞中PlGF和NOS表示量顯著增加；貝伐單抗和雷珠單抗都上調RPE細胞中VEGF-A基因表示兩種單抗類藥品均可誘導內皮細胞中VEGFR-2表示增加抗VEGF-A中和抗體可上調人視網膜內皮細胞中VEGF-B表示ROP小鼠注射貝伐單抗后PlGF表示量增加Shani G

9、olan, et al. BMC Research Notes , 7:617Aiyi Zhou, et al. World J Pediatr, , 10:262-270第14頁康柏西普分子構效解析第15頁康柏西普分子構效關系D2：模擬VEGFR-1與VEGF-A、VEGF-B及PlGF結合，確保康柏西普含有多靶點高親和能力D3：模擬VEGFR-2與VEGF-A結合，確保康柏西普與VEGF-A全方面結合D4：穩定二聚化受體與VEGF結合，增加親和力，延長有效作用時間與暴露量Fc片段：穩定二聚體樣結構，延長藥品半衰期Hong Li, et al. Experimental Eye Resear

10、ch, , 97: 154-159Wong TY, et al. Lancet ;370: 204-206第16頁康柏西普生產體系人VEGFR來源人IgG來源全人源蛋白正確蛋白折疊正確充分翻譯后修飾真核蛋白表示體系CHO表示系統生產成本高生產周期長生產工藝復雜第17頁康柏西普多靶點高親和VEGFELISA作為最敏感且經典親和力測定方法之一，其試驗結果顯示，康柏西普不但能夠全方面結合VEGF-A各亞型、VEGF-B和PlGF，而且親和力高于阿柏西普和貝伐單抗高親和力不但能夠確保康柏西普強效拮抗VEGF，還能延長半衰期De-Chao Yu, et al. Molecular Therapy , 2

11、0: 938-947Pasquale Ventrice,et al. J Pharmacol Pharmacother ;4:38-42.FP1: 阿柏西普 FP3: 康柏西普第18頁康柏西普顯著降低PlGF表示量糖尿病小鼠視網膜中多部位PlGF表示顯著增加，尤其是RPE層康柏西普治療后PlGF顯著降低，而貝伐單抗則沒有效果J. Huang, et al. Diabetes, obesity & metabolism ; 14: 644-53 CTR：正常小鼠D：未治療糖尿病小鼠D+PBS：PBS注射糖尿病小鼠D+A：貝伐單抗注射糖尿病小鼠D+KH：康柏西普注射糖尿病小鼠第19頁康柏西普：EC

12、50=28 pM 雷珠單抗：EC50=50 pMEC50：半數有效濃度，即能引發50%最大效應藥品濃度。EC50值越大，說明藥品效果越低。康柏西普有效抑制VEGF誘導HUVEC增殖Ming Zhang, et al. Pharmaceutical Research ; 26:204-10.第20頁康柏西普維持血管緊密連接糖尿病小鼠組視網膜血管上密封蛋白和閉合蛋白表示降低、分布紊亂，不能保持血管緊密連接，所以發生血管滲漏康柏西普治療后蛋白表示增加、分布恢復正常，血管連接緊密，滲漏降低，較貝伐單抗效果愈加顯著正常組 糖尿病小鼠組病鼠+貝伐單抗病鼠+康柏西普紅色： Claudin-5（密封蛋白-5）

13、 綠色： Occludin（閉合蛋白）J. Huang, et al. Diabetes, obesity & metabolism ; 14: 644-53 第21頁康柏西普對血管滲漏優越療效使用鏈脲霉素誘導糖尿病小鼠模型，眼部發覺有多處血管滲漏；使用康柏西普治療后滲漏顯著降低，較貝伐單抗效果愈加顯著J. Huang, et al. Diabetes, obesity & metabolism ; 14: 644-53 CTR：正常小鼠D：未治療糖尿病小鼠D+PBS：PBS注射糖尿病小鼠D+A：貝伐單抗注射糖尿病小鼠D+KH：康柏西普注射糖尿病小鼠第22頁康柏西普對各類CNV優越療效康柏西普

14、單次眼內注射可有效抑制ROP小鼠眼部血管滲漏，降低無灌注區Fei Wang, et al. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol ; 251:21312139正常組ROP小鼠組ROP小鼠+IgGROP小鼠+康柏西普第23頁康柏西普對各類CNV優越療效康柏西普單次眼內注射可有效抑制激光灼傷恒河猴眼部引發CNV，減輕血管滲漏Ming Zhang, et al. Molecular Vision ; 14:37-49注射前（激光誘導后20天）注射后第14天注射后第28天第24頁12例患者存在NVD，進行康柏西普0.5mg玻璃體腔注藥，注藥前后采取Angio OCT觀察注藥

15、后第一天NVD開始顯著消退，今后連續消退聯合激光患者NVD能夠完全消退康柏西普快速消退新生血管一項研究戴榮平教授. Unpublished data.第25頁使用OCTA觀察發覺，康柏西普注射1天后新生血管顯著消退，1周后新生血管繼續消退。基線注藥1天注藥1周康柏西普快速消退新生血管杜xx，男性，37歲，雙眼DR，左眼NVD戴榮平教授. Unpublished data.第26頁多項注冊研究證實康柏西普多靶點拮抗優越療效研究名稱給藥方案研究時長BCVA（ETDRS Letter）改進Ia期單次注射，劑量爬坡42 days+16.8HOPE3+PRN，0.5mg/2.0mg12 months+1

16、5.6AURORA3+PRN/Q1M，0.5mg/2.0mg12 months+12.9AURORA-PCV亞組3+PRN/Q1M，0.5mg/2.0mg12 months+14.3PHOENIX3+Q3M，0.5mg12 months+10.0LAMP（極低視力）3+PRN，0.5mg6 months+23.3第27頁抗VEGF藥品安全性第28頁Protocol T 安全性結果阿柏西普組發生APTC事件患者百分比顯著低于雷珠單抗組，與貝伐單抗相近Fc片段不會影響心血管系統安全性出現最少一個事件患者百分比阿柏西普(N = 224)貝伐單抗(N = 218)雷珠單抗(N = 218)總P值非致命

17、心梗3%1%3%非致命中風1%3%5%血管性死亡1%4%4%任何APTC事件5%8%12%0.047成對比較（多重比較）：阿柏西普-貝伐單抗：P = 0.34，阿柏西普-雷珠單抗： P = 0.047，貝伐單抗-雷珠單抗：P = 0.20第29頁VIEW 1 & VIEW 2 安全性結果抗VEGF藥品眼部和全身安全性相同Jeffrey S. Heier, et al. Ophthalmology ;119:25372548發生率高于0.5%眼部SAE及其它主要非眼部SAE第30頁康柏西普無ADCC效應人體免疫被激活后，抗體Fc片段經過抗體依賴細胞介導細胞毒作用（Antibody-depende

18、nt cell-mediated cytotoxicity , ADCC）和補體依賴細胞毒作用（Complement-Dependent Cytotoxicity, CDC）引發免疫反應依據FDA要求，檢測康柏西普對各種細胞，如HUVEC、A341、Calu-6、HT-1080及DLD-1ADCC效應康柏西普沒有Fc片段介導ADCC效應Report for Study No.: 56005-14-022: Antibody Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity (ADCC) Effect of KH902 on HUVEC, A431, Calu-6, HT-1080 and DLD-1 Cell Lines. S