1、糖化血紅蛋白HbA1c測(cè)定的原理方法與儀器解析及糖尿病目前在世界上發(fā)病率很高，占免疫病的比率，在發(fā)達(dá)國(guó)家高達(dá)2-5%，而我國(guó)糖尿病的發(fā)病率亦達(dá)2-3%，并且每年還以1的速度增加。糖尿病是一種一生性疾病，其并發(fā)癥是至殘至死的主要原因，所以人們希望能盡早發(fā)現(xiàn)和治療糖尿病。臨床上廣泛采用血糖參數(shù)來(lái)判斷糖尿病，而血糖參數(shù)只代表抽血時(shí)的血糖水平，對(duì)確診有限制性。近來(lái)幾年來(lái)的醫(yī)學(xué)研究證明：血液中的糖化血紅蛋白(HbA1c)濃度相對(duì)牢固，其濃度值能正確反響近來(lái)1-3個(gè)月時(shí)期的血糖水平，便于醫(yī)生對(duì)糖尿病進(jìn)行早期診斷；也可用于糖尿病人的血糖監(jiān)控及慢性并發(fā)癥的判斷等，受到臨床的廣泛重視，目前我國(guó)各大、中型醫(yī)院正逐

2、漸睜開(kāi)糖化血紅蛋白(HbA1c)占總血紅蛋白(Hb)的百分含量的測(cè)定項(xiàng)目。有些發(fā)達(dá)國(guó)家已將HbA1c的測(cè)定列入中老年人的老例體檢項(xiàng)目。測(cè)定HbA1c比較常用的方法，目前有乳膠凝集反響法和離子交換高壓液相色譜法兩種，分別用生化解析儀和糖化血紅蛋白自動(dòng)解析儀進(jìn)行測(cè)定。1HbA1c的臨床意義糖化血紅蛋白是一項(xiàng)說(shuō)服力較強(qiáng)、數(shù)據(jù)較客觀、牢固性較好的生化檢查，不受有時(shí)一次血糖高升或降低的影響。能反響糖尿病患者2-3個(gè)月以?xún)?nèi)的糖代謝情況，同時(shí)與糖尿病并發(fā)癥特別是微血管病變關(guān)系親近，在糖尿病學(xué)上有重要的臨床參照價(jià)值。1.1增高：測(cè)定HbA1c能夠認(rèn)識(shí)糖尿病人在23個(gè)月的血糖控制情況。其他，用含葡萄糖的透析液作

3、血透的慢性腎衰病人，地中海貧血和白血病病人亦增高。1.2降低：溶血性及失血性貧血，慢性腎衰，慢性連續(xù)性低血糖癥等。1.3作為糖尿病的病情監(jiān)測(cè)指標(biāo)作為輕癥、型、隱性糖尿病的早期診斷指標(biāo)。不是診斷糖尿病的敏感指標(biāo)，不能夠取代現(xiàn)行的糖耐量試驗(yàn)。能夠列為糖尿病的普查和健康檢查的項(xiàng)目。1.4當(dāng)HbA1c9%時(shí)，說(shuō)明患者存在著連續(xù)性高血糖，能夠出現(xiàn)糖尿病腎病、動(dòng)脈硬化、白內(nèi)障等并發(fā)癥。臨床經(jīng)常以糖化血紅蛋白作為監(jiān)測(cè)指標(biāo)來(lái)認(rèn)識(shí)患者近階段的血糖情況，以及估價(jià)糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展情況。1.5對(duì)預(yù)防糖尿病孕婦的巨大胎兒、畸形胎、死胎，以及急、慢性并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的督查擁有重要意義。1.6對(duì)于病因還沒(méi)有明確的

4、昏迷或正在輸注葡萄糖(測(cè)血糖自然增高)搶救者，急查糖化血紅蛋白擁有鑒別診斷的價(jià)值。1.7對(duì)于糖化血紅蛋白特別增高的糖尿病患者，應(yīng)警惕如酮癥酸中毒等急性合并癥的發(fā)生。2臨床常用的測(cè)定糖化血紅蛋白HbA1c的方法2.1乳膠凝集反響法乳膠凝集反響法是利用抗原抗體直接測(cè)定總血紅蛋白Hb中的糖化血紅蛋白HbA1c的百分含量。目前有國(guó)內(nèi)外幾家廠商能夠供應(yīng)HbA1c測(cè)定的試劑盒。這種免疫反響是由被測(cè)血樣品中的總Hb和HbA1c與試劑中的抗體結(jié)合而形成凝集，凝集量隨HbA1c濃度的大小而變化。使用生化解析儀器來(lái)進(jìn)行比濁測(cè)定HbA1c的濃度，采用終點(diǎn)法，生化儀經(jīng)過(guò)測(cè)定反響液的吸光度值，可直接反響出凝集量的多少；

5、計(jì)算出HbA1c占Hb的百分含量，測(cè)準(zhǔn)時(shí)，儀器多采用660nm單色光做主波長(zhǎng)，800nm單色光做副波長(zhǎng)，經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出實(shí)測(cè)值。由于這種試驗(yàn)其標(biāo)準(zhǔn)曲線是非線性的，所以在測(cè)定前，第一用隨試劑盒一起帶有的5種不同樣濃度的定標(biāo)液，做出5點(diǎn)非線性標(biāo)準(zhǔn)曲線。曲線和數(shù)值存在生化儀的儲(chǔ)藏器中，測(cè)定樣品時(shí)，實(shí)測(cè)出的吸光度值A(chǔ)與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，由儀器CPU求出實(shí)測(cè)樣品中的HbA1c百分含量。乳膠凝集反響法測(cè)定HbA1c簡(jiǎn)略、不用增加儀器，可直接用自動(dòng)生化解析對(duì)樣品進(jìn)行快速測(cè)定。該方法也能夠用手工的方法，在酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定，是目前使用很多的方法。但是乳膠凝集反響法其準(zhǔn)確性和重復(fù)性均有欠缺。2.2離子交換高壓液相色譜法

6、HPLC使用離子交換高壓液相色譜HPLC(highpressureliquidchromatography)來(lái)測(cè)定HbA1c的百分含量目前被認(rèn)為是解析HbA1c的金標(biāo)準(zhǔn)。采用HPLC方法工作的全自動(dòng)糖化血紅蛋白解析儀器，以其快速、簡(jiǎn)略、優(yōu)良、正確等特點(diǎn)，碰到越來(lái)越多用戶(hù)的歡迎。色譜解析是一類(lèi)利用混雜物的各組分在不同樣相上的分配差別，在兩相物質(zhì)相對(duì)運(yùn)動(dòng)過(guò)程中，將混雜物中的各種成份分別開(kāi)的一種解析技術(shù)。液相色譜是以液體或固體為固定相，以液體為液動(dòng)相的色譜法的總稱(chēng)。色譜法又叫色層或?qū)游?，這一技術(shù)在生命科學(xué)研究中用于生物活性物質(zhì)的解析；生物活性物質(zhì)是以混雜物形式存在，人類(lèi)血液中的蛋白質(zhì)有上千種，只有把

7、混在一起的被測(cè)蛋白分別出來(lái)，才能正確測(cè)定；在HbA1c的測(cè)準(zhǔn)時(shí)，能夠經(jīng)過(guò)高精度HPLC，將HbA1c從Hb中分別出來(lái)，才能獲取正確的數(shù)值。在生命科學(xué)研究中，活性物質(zhì)的分別主要應(yīng)用的是液相柱色譜。這種技術(shù)出生于20世紀(jì)初葉，俄國(guó)化學(xué)家茨維特把植物色素混雜液置于裝有碳酸鈣吸附劑的玻璃管頂端，用石油醚洗脫后，在玻璃柱上出現(xiàn)了幾組顏色不同樣的色帶，這些色帶隨著不斷的洗脫，越分越開(kāi)，先后從玻璃柱下端流出，茨維特把這樣一種用流體洗脫色素混雜液，使之經(jīng)過(guò)碳酸鈣做固定相從而實(shí)現(xiàn)分其他技術(shù)，起名叫色譜法。這種方法被實(shí)行用于分別好多混雜物中的各種物質(zhì)，被分別物質(zhì)已和顏色沒(méi)關(guān)了，但色譜解析的名稱(chēng)仍沿用到此刻。自然更

8、貼切的名稱(chēng)應(yīng)該叫層析法。早期的色譜柱體積大，做固定相的物質(zhì)顆粒大，分別時(shí)需要大量的洗脫液。并且洗脫液靠重力流動(dòng)，分別時(shí)間長(zhǎng)，效率低。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，20世紀(jì)60年代，人們研制出新式液相柱，同時(shí)采用高壓輸液泵自柱上端為洗脫液加壓，大大加速了洗脫液的流速，開(kāi)發(fā)出相應(yīng)的高矯捷度的檢測(cè)器，新的解析儀器-高壓液相色譜儀在70年代出生，很快就占有了解析化學(xué)的舞臺(tái)。特別是在生命科學(xué)的研究中，HPLC技術(shù)由于對(duì)被測(cè)物活性影響小，幾乎能夠測(cè)定生物醫(yī)學(xué)中所有的非發(fā)揮性物質(zhì)，如近來(lái)幾年來(lái)利用離子交換HPLC法測(cè)定血液中的HbA1c的百分含量，被認(rèn)為是糖尿病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。3糖化血紅蛋白自動(dòng)解析儀糖化血紅蛋白自動(dòng)解

9、析儀采用離子交換HPLC法測(cè)定HbA1c。離子交換HPLC法，是利用能交換離子的資料為固定相來(lái)分分離子型化合物的方法。儀器使用陽(yáng)離子交換柱進(jìn)行HbA1c的百分比測(cè)定；當(dāng)必然量的全血樣品被取樣針吸入到進(jìn)樣裝置內(nèi)，在稀釋部分被溶血，釋放出紅細(xì)胞中的血紅蛋白Hb，并由稀釋液稀釋?zhuān)♂尯玫囊呀?jīng)溶血的樣品，由高壓泵注入離子交換柱。柱內(nèi)的固定相是最新開(kāi)發(fā)的非多孔性，不溶和可浸透的交聯(lián)高聚物，上面分布固定的帶電荷基團(tuán)和能游動(dòng)的配衡離子；樣品經(jīng)過(guò)過(guò)濾器從交換柱頂端加入后，由三種不同樣濃度的鹽洗脫緩沖液(流動(dòng)相)洗脫，使樣品向下搬動(dòng)。此時(shí)溶液中所含血紅蛋白(Hb)的各種組份即與固定相上能搬動(dòng)的離子進(jìn)行交換，樣品

10、中的血紅蛋白多種組分在固定相上連續(xù)進(jìn)行可逆的交換吸著和解吸作用，而3種不同樣離子濃度的鹽液，形成線性梯度洗脫，洗脫液No1叫初步緩沖液，含低離子濃度的鹽，洗脫液No2、No3緩沖液，其離子濃度依次增高好多，這種流動(dòng)相離子濃度的改變對(duì)分別收效的影響特別明顯，前面洗脫出來(lái)的組分分別收效好，色譜峰很窄，后邊組分也能在很短時(shí)間內(nèi)洗脫出來(lái)，大大縮短了分別時(shí)間；所以全自動(dòng)血紅蛋白解析儀，在1分多鐘內(nèi)、Hb中的多種成份被分別成6個(gè)部分，其中的HbA1c、HbF、HbA1被有效、精確的分別；由交換柱流出的Hb成分到達(dá)儀器的檢測(cè)器，檢測(cè)器內(nèi)裝有發(fā)射單色光的發(fā)光二極管，經(jīng)過(guò)雙波長(zhǎng)可見(jiàn)光比色法測(cè)定HbA1c、HbF

11、、HbA1三個(gè)參數(shù)。儀器的檢測(cè)器檢測(cè)出分別后HbA1c、HbF、HbA1組分的吸光度值，與HbA1c標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值比較，解析計(jì)算出結(jié)果，最后以百分率表示的Hb組分結(jié)果與色譜圖一起打印出來(lái)。離子交換柱HPLC法對(duì)全血直接測(cè)定HbA1c，其批內(nèi)和批間變異系數(shù)CV均能夠小于1%(CV1%)，結(jié)果精確，HbA1c檢測(cè)結(jié)果不受存在的變異型血紅蛋白及其衍生物的影響，特別適合于糖尿病人的監(jiān)控。產(chǎn)品說(shuō)明性能特點(diǎn)：采用金標(biāo)準(zhǔn)-離子交換高效液相層析法最新開(kāi)發(fā)的非多孔離子交換HPLC-常光特有的即插式層析柱，裝卸時(shí)不需要工具，使部件更換簡(jiǎn)單易行全自動(dòng)高速檢測(cè)90秒/樣本常光經(jīng)過(guò)光感原理，開(kāi)發(fā)出獨(dú)到的可變稀釋倍率功能，可智能地隨樣品濃度改變稀釋倍率，大大提高了檢測(cè)范圍采用離子交換高壓液相層析法，對(duì)牢固的HbA1c進(jìn)