1、-. z.開機water 2695/micromass zq4000:開機步驟1. 分別翻開質譜、液相色譜和計算機電源，此時質譜主機內置的CPU會通過網線與計算機主機建立通訊聯系，這個時間大約需要1至2分鐘。2. 等液相色譜通過自檢后，進入Idle狀態，依照液相色譜操作程序，依次進展操作。具體根據液相色譜不同型號來執行，下面以2695為例。a.翻開脫氣機 (Degasser On)。b.濕灌注(Wet Prime)。c.Purge Injector。d.平衡色譜柱。3.雙擊桌面上的 MassLyn* 4.0圖標進入質譜軟件。4.檢查機械泵的油的狀態每星期，如果發現渾濁、缺油等狀況，或者已經累積

2、運行超過3000小時，請及時更換機械泵油。5.點擊質譜調諧圖標MS Tune 進入質譜調諧窗口 。6.選擇菜單“Options Pump，這時機械泵將開場工作，同時分子渦輪泵會開場抽真空。幾分鐘后，ZQ就會到達真空要求，ZQ前面板右上角的狀態燈“Vacuum將變綠。7.點擊真空狀態圖標，檢查真空規的狀態 ，以確認真空到達要求。8. 確認氮氣氣源輸出已經翻開，氣體輸出壓力為90 psi。9.設置源溫度 Source Temp到目標溫度。關機1點擊質譜調諧圖標進入調諧窗口。2.點擊Standby 讓MS 進入待機狀態時，這時狀態燈會由綠變紅，這一過程是關質譜高電壓的過程。3停頓液相色譜流速，如果還

3、需要沖洗色譜柱，可以將液相色譜管路從質譜移開到廢液瓶。4等脫溶劑氣溫度ESI或APCI探頭溫度降到常溫，點擊氣體圖標關閉氮氣。5 逆時針方向擰開機械泵上的Gas Ballast 閥，運行20分鐘后關閉鎮氣。a) 對于ESI源，至少每星期做一次。b) 對于APCI源，每天做一次。6再次確認機械泵的Ballast閥是否已經關閉。7選擇Option / Vent，這時質譜開場泄真空，ZQ 前面板的狀態燈“Vacuum開場閃爍，幾分鐘后機械泵會停頓運行，這時可以關閉質譜電源。FINNIGEN DECA 開關機及校正流程1 開機前準備事項1 確保質譜總電源開關白色開關及主板電源開關黑色開關處于關閉狀態O

4、；2 檢查真空泵油液面，確保泵內油頁面處于標定的上下兩線之間；3 查看離子源干凈程度，ESI源查看噴口是否有固體析出，毛細管口是否完好；APCI噴口是否有積液；4 氣體壓力，翻開高純氮氣鋼瓶總閥，調節出口壓力調至0.65MPa，翻開高純氦氣鋼瓶總閥,調節出口壓力調至0.25Mpa;5 檢查殼氣及輔助氣接口連接緊固，松開液相管路與離子源的接口；6 開啟動力電源，電壓穩定，正常；7 確保室內溫度在1825度。二 找方法其實做方法不是很難的，先找的條件，然后建立連上液相找液質方法就可以了，然后在優化離子源氣體流量，以及溫度就可以了。b、首先，我們應該知道被測化合物的構造式，pKa，溶解度等理化性質。

5、1，根據化合物極性和分子量大小選擇離子源，非極性強的化合物可用APCI源，非極性弱的用ESI，此外ESI可形成多電荷離子，適合檢測多肽等分子量大的化合物APCI則不行。2，根據化合物的酸堿性選擇用正離子或負離子：一般堿性化合物用正離子，酸性或中性化合物選擇負離子。正離子條件下：流動相一般加0.010.1的甲酸，負離子條件下：流動相一般加0.010.1的甲酸銨。3，離子源和正負條件確定好后即可優化化合物的質譜參數：建議先搞清楚各個參數是與流速相關還是與分子量相關，與TSQ Quantumn為例：與流速相關的參數有：Spray voltage，Sheath gas， Au* gas，Capilla

6、ry temperature等參數，如果流速在較低*圍內變動，這些參數就不用優化，使用廠家的推薦值即可。與分子量相關的參數有Tube lens offset等參數，這個一般也不建議優化。使用校正表上的值即可。所以這一步最關鍵的是找到母離子，如有加合離子建議加大Source CID試試，給一定能量，看看打碎的主要子離子。注意：如讓儀器自動找子離子也能找到，但其優化的碰撞能量一般偏高，一般需要在其根底上減去Source CID的值大小即可C、如果是簡單的定性，對于錐孔電壓沒什么太苛刻的要求。但是如果是要對樣品進展定量，特別是低含量的，要講究靈敏度，那就我對單個樣品直接進樣，分別優化毛細管電壓和錐孔

7、電壓。三 質譜儀按質量分析器(或者磁場種類)可分為靜態儀器和動態儀器，即穩定磁場單聚焦及雙聚焦質譜儀和變化磁場飛行時間和四極桿質譜儀。MS儀器一般由進樣系統、電離源、質量分析器、真空系統和檢測系統構成。 1、真空系統 質譜儀中所有局部均要處高度真空的條件下(10-4-10-6Torr或mmHg), 其作用是減少離子碰撞損失。真空度過低，將會引起：a) 大量氧會燒壞離子源燈絲；b) 引起其它分子離子反響，使質譜圖復雜化；c) 干擾離子源正常調節；d) 用作加速離子的幾千伏高壓會引起放電。 2、進樣系統對進樣系統的要求：重復性、不引起真空度降低。進樣方式：a) 間歇式進樣：適于氣體、沸點低且易揮發

8、的液體、中等蒸汽壓固體。如下圖 注入樣品(10-100g)-貯樣器(0.5L-3L)-抽真空(10-2 Torr)并加熱-樣品蒸分子(壓力陡度)-漏隙-高真空離子源。b) 直接探針進樣：高沸點液體及固體探針桿通常是一根規格為25cm6mm i.d.,末端有一裝樣品的黃金杯(坩堝)，將探針桿通過真空閉鎖系統引入樣品，如下圖。 我們試驗室用的是ABI 3000質譜儀，主要定量分析生物樣品。 LC-MS/MS方法學開發的一般步驟是 首先通過微量注射泵獲得母離子和子離子以及DP CE這四個主要參數然后利用梯度程序考察流動相組成包括有機相的比例，甲酸或緩沖鹽的參加量對質譜響應的影響。 流動相的組成確定后

9、利用FIA優化確定其他參數，主要是氣體參數和TEM IS。一臺LC/MS由以下幾局部組成：HPLC、離子源接口、離子束聚焦、質量分析器、離子檢測器、數據處理、化學工作站。HPLC就不說了，先說離子源，目前比擬好的離子源設計為Agilent的直角噴霧技術，好處：1。去溶劑效果好,耐受液相高流速；2。霧化針零電位,位置免調整,操作平安簡便,重現性好;3。離子截取面積大,靈敏度高;4。反吹枯燥氮氣,有效阻擋中性分子,減少污染并保護真空;5。大口徑非加熱石英毛細管,離子傳輸效率高,有利于高靈敏度檢測；有效防止樣品熱降解；調諧穩定，碰撞誘導解離CID譜圖重現性好；6。鉸鏈設計,不同離子源的切換,簡單方便

10、,易于操作。下面說質量分析器：沒有一種質量分析器可以適用于所有領域，目前的質量分析器有：單四極桿質譜、三級串聯質譜、離子阱質譜、飛行時間質譜、四極-飛行時間質譜。離子檢測器：電子倍增管EMT：經質量分析器別離出來的離子首先撞擊高能轉換打拿極發射二次粒子，正、負離子轉換的二次粒子最終均為電子；隨后發射的電子進入電子倍增器的彎曲形內壁，撞擊管壁涂層，產生更多的二次電子；最后以電信號輸出。電子倍增管的放大倍數約為107。 光電倍增管PMT：經質量分析器別離出來的離子首先撞擊倍增管最前端的閃爍晶體發射光子，光子照射光陰極射線管而發射電子，隨后發射的電子進入電子倍增管進展信號放大，最終同樣以電信號輸出。

11、 微通道板MCP：由一組圓柱形微通道管組成，每個微通道管的作用與電子倍增管類似。當離子進入微通道管時，產生二次電子，反射通過這些微通道管時，不斷產生更多的電子。MCP的最大優點在于具有超快的時間響應。如果將幾塊微通道板用適當的方法疊在一起，放大倍數將達108。ESI是氣相離子化過程，主要包括三個步驟：1、在噴霧毛細管尖端產生帶電液滴；2、通過溶劑蒸發和霧滴分裂使帶電液滴變小，這個過程反復進展；3、由很小的帶電霧滴產生氣相離子。一般情況下，甲醇-水系統已能滿足多數樣品的別離要求，且流動相粘度小、價格低，是反相色譜最常用的流動相。但Snyder則推薦采用乙腈-水系統做初始實驗，因為與甲醇相比，乙腈

12、的溶劑強度較高且粘度較小，并可滿足在紫外185205nm處檢測的要求，因此，綜合來看，乙腈-水系統要優于甲醇-水系統。四液質經歷我認為要維護好儀器，首先流速不能過大，液質是不能承載過大流速的；其次電壓不要加到極限，尤其是正負離子轉換時要適當調整；最后是做完樣一定要及時沖洗和吹掃管路。做液質時跑一針的時間最好不要超過45分鐘，否則儀器會很累。另外我認為API4000定量很準，但是打多級碎片時最好用的是離子阱，因為它能夠在一次進樣后同時分析多個離子，很方便，而不像四級桿一次只能進展一種離子的多級研究。1、由于液質的流速較小ESI一般為0.2ml/min，所以配置樣品的溶劑強度不能太大，盡量小于起始

13、比例，否則，會出現保存時間偏移等問題。2、如果在液相上摸好的條件，注意尤其是流動相的組成要轉化成適宜LCMS分析的。3、磷酸鹽及其他不揮發緩沖鹽在離子源會沉淀并堵塞毛細管等，要更換成可揮發的有機緩沖鹽。4、緩沖鹽會導致離子抑制，因此要控制緩沖液的強度，10mM。5、去污劑、外表活性劑會有離子抑制現象發生， 外表活性劑產生的加合物和離子簇會干擾質譜數據，因此作液質聯用儀時，不要使用洗滌劑清洗玻璃器皿等容器，如果一定要用，建議超聲清洗屢次。比方分析的樣品必須要干凈，這樣既可以保護色譜柱，也可以防止污染質譜；分析了大量的生物樣品后，沖洗系統時，先用高比例的水相沖洗，把源也給洗一下，然后再換用高比例的

14、有機相，這時要把柱后管路從源上拿下來，防止柱中的雜質給沖進質譜前處理：樣品一定要干凈，不管是為了質譜還是為了保護柱子，生物樣品提取的好些，如果直接沉淀，一定要注意，盡量高轉速12000rpm以上，低溫離心，最好離2次保險一點，轉移樣品也要仔細，從中間慢慢吸，有時會有漂浮物，島津的質譜好似做直接沉淀的源比擬容易堵，Waters的好些。2.樣品濃度：質譜是靈敏度很高的儀器，進樣濃度一定不能太高，12ug/ml已經可以啦，太高的濃度對儀器來說比擬容易造成殘留，而且定量也會不準啦。3.流動相:流動相中盡量加易揮發的鹽，盡量不要加外表活性劑之類的，容易離子抑制，如果遇到離子抑制，可以試試把你的樣品峰往后

15、推推或者改變提取方法，也可以試試用APCI源。如果你的液相是低壓混合的，盡量不要跑梯度，那樣很費時間，如果沒方法，一針又要走很長時間的話，可以考慮切換，只測樣品出峰前后的那段時間，這樣可以保護質譜。但是如果你用粗柱子，較高流速的也可以考慮跑梯度，如API4000，但要盡量減小死體積。4.沖洗:沖柱子自然不用說了，低有機相和高有機相分別沖一定時間各至少半個小時以上吧，柱子保存在高有機相中。做完試驗，沖源也是很重要的，也是低有機相和高有機相沖，但是時間可以不用則長，你可以先沖源再沖柱子，或者兩者分開沖，個人覺得分開沖好些，這樣柱子上的臟東西就不會進到源里面去啦。沖源的時候氣可以關小些。waters

16、的液質有在線除鹽的功能1、樣品必須過0.22um濾膜過濾，不得有顆粒物；2、上樣的溶劑，必須是色譜純，最好和你的流動相比例一致；3、反相體系，不允許用正己烷之類極性弱的溶劑溶解樣品并上樣。4、水，自然是純潔水了；5、樣品不允許含有金屬離子、外表活性劑不要用洗潔精洗瓶子、磷酸鹽、硼酸鹽等不揮發鹽；6、淋洗液緩沖溶劑必須用可揮發的，如乙酸、乙酸銨、氫氧化四丁基銨等，色譜純級別。7、樣品pH57嚴禁含有無機或有機強酸強堿。8、六通閥處變三通，最好把沒有信號的區域，切換到廢液，這樣減少源的污染9、定期振氣、清洗離子源，換油、1.峰漂移的程度與進樣體積有關，一般體積越小，對峰漂移的影響越小，缺點是響應也

17、減小。2.峰漂移與其出鋒時間流動相的組成有關，如果出峰時間流動相強度很大影響就很小。個人觀點，僅供參考。一般氣源檢查，總壓力不能過大，檢查泵油位置，查看真空度等，勤沖洗管路。定期震氣，更換機械泵油、濾網，必要時儀器除塵等。2.每個工程做完，大約1000個樣品后，清洗離子源、樣品錐孔、預四級桿等。3.定期對質譜進展期間核查、校準等。儀器狀態正常時，以上是最根本的維護。還有一些考前須知：1.每次進完樣后，液相和質譜局部都要沖洗干凈。2.樣品前處理一定要干凈。3.非揮發性的鹽不能用在質譜中。4.如果遇到放長假，實驗室沒有人，最最保險的方法就是關機，以免遇到停電的情況。5.質譜所處的工作環境最好要無塵

18、，溫、濕度要嚴格控制。6.樣品濃度不能太高，以免污染離子源和四級桿。7.做實驗時，經常關注真空、柱壓、碰撞氣壓力等，如遇情況可以及時處理。8.操作人員一定要培訓后才能上崗。一般也就是勤沖洗，特別是測完樣品后多沖，離子源多清洗，泵油定期檢查、更換，濾網及時更換清洗，其它的也沒什么好做的了。首先流速不能過大，液質是不能承載過大流速的；其次電壓不要加到極限，尤其是正負離子轉換時要適當調整；最后是做完樣一定要及時沖洗和吹掃管路。注意：做液質時跑一針的時間最好不要超過45分鐘，否則儀器會很累。做液質三年了，島津、waters、ABI和finigan的都摸過，經歷談不上，說點自己的注意點吧。1.前處理：樣

19、品一定要干凈，不管是為了質譜還是為了保護柱子，生物樣品提取的好些，如果直接沉淀，一定要注意，盡量高轉速12000rpm以上，低溫離心，最好離2次保險一點，轉移樣品也要仔細，從中間慢慢吸，有時會有漂浮物，島津的質譜好似做直接沉淀的源比擬容易堵，Waters的好些。2.樣品濃度：質譜是靈敏度很高的儀器，進樣濃度一定不能太高，12ug/ml已經可以啦，太高的濃度對儀器來說比擬容易造成殘留，而且定量也會不準啦。3.流動相：流動相中盡量加易揮發的鹽，盡量不要加外表活性劑之類的，容易離子抑制，如果遇到離子抑制，可以試試把你的樣品峰往后推推或者改變提取方法，也可以試試用APCI源。如果你的液相是低壓混合的，

20、盡量不要跑梯度，那樣很費時間，如果沒方法，一針又要走很長時間的話，可以考慮切換，只測樣品出峰前后的那段時間，這樣可以保護質譜。但是如果你用粗柱子，較高流速的也可以考慮跑梯度，如API4000，但要盡量減小死體積。4.沖洗：沖柱子自然不用說了，低有機相和高有機相分別沖一定時間各至少半個小時以上吧，柱子保存在高有機相中。做完試驗，沖源也是很重要的，也是低有機相和高有機相沖，但是時間可以不用則長，你可以先沖源再沖柱子，或者兩者分開沖，個人覺得分開沖好些，這樣柱子上的臟東西就不會進到源里面去啦。沖源的時候氣可以關小些。日常維護:注意用流動相HPLC級,水用超純水,不含磷酸鹽等緩沖液.防濕防塵(用除濕機

21、各遮布).用UPS電源以防臨時停電影響.樣品分析后用異丙醇液清洗霧化室.此外,定期清洗霧化針和查看泵油液面等.液相局部：應勤過濾流動相或更換新流動相，一般配制一次水相使用時間不要超過三天；及時清洗流動相濾頭；假設發現排空壓力增大應及時更換泵頭濾芯；每天做完樣應及時沖洗管路及色譜柱。質譜局部：勤洗離子源，并定期進展一次徹底的清洗維護，不定時檢查霧化針的情況并可定期用異丙醇或異丙醇：水懸空超聲清洗；每天進樣時檢查霧化狀況；每天檢查氣源情況，防止氣源缺乏造成斷氣既影響工作又影響儀器使用壽命；定期檢查前級泵泵油情況，及時震氣使油回流；假設長時間分析樣品，每天或每隔幾天應重啟電腦及與質譜的通訊設備，防止

22、因通訊故障造成質譜采樣出錯或無法連接。簡單說說IT-TOF日常維護：1 每分析完一批樣品大概30-40個生物樣品，IT-TOF中的離子源及Heat Block模塊要用甲醇或異丙醇清洗2 每隔一段時間要進展一次儀器調諧以保證準確質量數；平時可只做TOF的調諧；調諧完畢之后要先用乙腈以0.2mL/min的流速沖洗30min以上并清洗離子源。3 LC中假設使用緩沖鹽，實驗完畢之后先用水沖洗柱子，柱子最后要保存在有機相中；用于洗泵頭的溶劑要經常更換5 每4個月更換一次泵油；每隔兩星期翻開真空泵放氣閥約30min，關閥后要再往盤旋2圈。說說我們在建立方法時感觸最深的幾點：1. 選擇的離子對一定要穩定，質

23、譜的參數要細細優化：尤其在選擇用加合離子定量時，尤其要注意這一點，一般加合離子需要在一定的條件下酸堿度、離子強度等才能保持離子化程度一樣，就響應一樣。用對照品溶液測定時可能一致，可實際樣品中要復雜的多，其他物質對離子化可能有影響。2.確定待測物在柱上是否有保存：計算一下管路的死體積、柱的死體積之和，除以你的流速所得到的值，一定要小于你的待測物的出峰時間，最好差值在0.5min以上。因為液質不同液相，柱上沒有保存在前面流出的物質噴霧時不穩定，會導致低濃度點、尤其定量下限附近同一樣品響應不穩定。我們在測得時遇到低濃度點的QC能相差雙倍，怎么也不符合要求80120，于是就將同一樣品重復進樣，發現重復

24、性非常差，也是成倍的差異，于是就尋找原因，什么都試了就是不行，后來咨詢了應用工程師，才疑心是否有保存。于是，改變比例，推遲出峰，嘿，問題就解決了。就此問題，浪費了我們一個多星期來找原因。3. 樣品的處理方法及內標的選擇：當測定復雜樣品時，如生物樣品血漿、膽汁、尿等，一定要考察在不同的實際樣品中，內標、待測物是否能保持一致。我們就遇到特別郁悶的事情，在空白血漿中內標提取后響應非常一致，線性及QC樣品都很好，可參加不同時間點采得的血漿后，發現內標出現上下不平的現象，有時甚至相差1倍。可能為不同時間點的血漿中的背景物質、或pH等不一致、導致其在提取、離子化過程中存在差異。質譜儀所能檢測的最小到最大的質量*圍： 不同儀器： 四極桿 1600Da，14000Da，磁質譜：110000Da，飛行時間質譜：無上限，離子阱質譜：12000Da，14000Da，質譜圖中的橫坐標，質量與電荷之比。假設離子所帶電荷為z = 1，則質荷比等于該離子的質量數。離子是以12C原子的1/12定義為一個質量單位，用u表示。 1u=1.66054*10-27kg其它常用符號，Da, 道爾頓 1Da=1u分辨力(Resolution Power, RP) 分辨力：分開兩個鄰近質量峰的能力。 何為分開：假設兩個相鄰峰的峰谷低于峰高的10%(或5%，50%)，則認為是分開的。磁