1、實驗1.大腸桿菌的培養與別離8/25/20221蒼南中學 許允文第一頁，共二十一頁。微生物病毒細菌放線菌真菌原生生物原核細胞真核細胞非細胞結構特點：結構簡單,形體微小.通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細胞結構.一、根底知識: 1.微生物的種類:8/25/20222蒼南中學 許允文第二頁，共二十一頁。關于大腸桿菌:革蘭氏染色：代謝類型：主要分布：危害：應用：革蘭氏陰性菌不著色異養兼性厭氧型腸道一般無害，少數有害是基因工程中的主要受體菌之一2核糖體 1閱讀P18-198/25/20223蒼南中學 許允文第三頁，共二十一頁。2.微生物的培養:1)培養基的營養成分:2)培養基的種類

2、:碳源 氮源 水分 無機鹽 生長因子按物理性質分液體培養基:擴大培養固體培養基:別離、鑒定、純化按功能分普通培養基：選擇培養基：篩選鑒別培養基：鑒定含氨卞青霉素的培養基伊紅美藍培養基8/25/20224蒼南中學 許允文第四頁，共二十一頁。3.細菌的別離:原理: 不同的細胞具有不同的菌落特征; 有些微生物對抗生素、高鹽等具有抗性的特點。方法: 劃線法、涂布法 選擇培養基培養8/25/20225蒼南中學 許允文第五頁，共二十一頁。二、大腸桿菌的培養與別離實驗目的:1、進行大腸桿菌的擴增，利用_培養基進行細菌培養操作。2、進行大腸桿菌的別離，利用_培養基進行細菌的劃線培養。3、說明大腸桿菌培養的條件

3、和操作要求的原理。液體固體8/25/20226蒼南中學 許允文第六頁，共二十一頁。一、配制培養基，調整pH并滅菌，倒平板備用。按一定營養比例配制培養基+瓊脂，融化調整pH 滅菌 倒平板、擱斜面細菌:中性偏堿霉菌:中性偏酸1、放走冷空氣；2、滅菌鍋壓力與大氣壓相同時才能翻開。8/25/20227蒼南中學 許允文第七頁，共二十一頁。倒平板、擱置斜面待培養基冷卻到50 左右時，在酒精燈附近倒平板。凝固后，倒置放置思考：如何鑒定滅菌是否徹底？放入培養箱中，2d后觀察平板是否有菌落生成8/25/20228蒼南中學 許允文第八頁，共二十一頁。二、接種、擴大培養1、擴大培養所用的培養基是？2、接種的場所是？

4、3、為何要等接種環冷卻后，再取菌體？8/25/20229蒼南中學 許允文第九頁，共二十一頁。三、劃線別離1、第2、3、4級劃線前是否都要對接種環進行滅菌？2、下級劃線開始于上一級劃線的起始端還是末端？8/25/202210蒼南中學 許允文第十頁，共二十一頁。8/25/202211蒼南中學 許允文第十一頁，共二十一頁。四、培養 將接種后的培養皿放入恒溫箱內，在37下倒置培養12-24h。平板稀釋涂布法平板劃線法8/25/202212蒼南中學 許允文第十二頁，共二十一頁。平板劃線別離法用途：一般多用于從菌種的純化；優點：可以觀察菌落特征，對混合菌進行別離；缺點：不能計數稀釋涂布平板法 用途：一般多

5、用于篩選菌株。一般用于平板培養基的回收率計數。優點：可以計數，可以觀察菌落特征。缺點：吸收量較少，較麻煩，平板不枯燥效果不好，容易蔓延。如果菌液密度大的話，長不出單菌落。8/25/202213蒼南中學 許允文第十三頁，共二十一頁。五、純化與保存 1、如何進一步純化菌種？ 2、如何保存菌種？8/25/202214蒼南中學 許允文第十四頁，共二十一頁。 1.培養基滅菌后，需要冷卻到50 左右時，才能用來倒平板。你用什么方法來估計培養基的溫度？問題討論 答：可以用手觸摸盛有培養基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌

6、，防止瓶口的微生物污染培養基。8/25/202215蒼南中學 許允文第十五頁，共二十一頁。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在皿蓋與皿壁的部位，這個平板還能用來培養微生物嗎？為什么？ 答：可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成菌落的細菌隨水而擴散，得不到單細胞菌落；防止雜菌污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿壁的培養基上滋生而造成污染，因此最好不要用這個平板培養微生物。8/25/202216蒼南中學 許允文第十六頁，共二十一頁。5.如何操作才可以盡量防止被雜菌污染？6.在培養后如何判斷是否有雜菌污染？7.實驗完成后，接觸過細菌的器皿應如何處理？操作

7、快捷,減少操作時間;滅菌要徹底,降低環境污染幾率;注意微生物生長條件,如pH、滲透壓、溫度等。是否有不同形態的菌落；用顯微鏡鏡檢細胞、孢子、芽孢等形態。高壓蒸氣滅菌8/25/202217蒼南中學 許允文第十七頁，共二十一頁。8、轉基因用的質粒通常參加了如抗氨芐青霉素基因。轉基因質粒轉化進入大腸桿菌后，能在含有氨芐青霉素的培養基中生長，而未被轉化的就不能生長，其他沒有抗氨芐青霉素基因的雜菌與不能生長。如何別離轉基因工程菌，并保證不被普通的大腸桿菌污染？將菌種接種在含氨芐青霉素的培養基中培養。8/25/202218蒼南中學 許允文第十八頁，共二十一頁。1、高壓蒸氣滅菌2、灼燒滅菌3、紫外線滅菌4、

8、過濾去除雜菌思考：滅菌與消毒有何區別？滅菌的方法：消毒：利用化學或物理方法，殺死大部份致病微生物的過程。滅菌:以化學劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而到達完全無菌之過程。8/25/202219蒼南中學 許允文第十九頁，共二十一頁。菌落單個或少數細菌在固體培養基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態結構的子細胞群體。菌落是鑒定菌種的重要依據。8/25/202220蒼南中學 許允文第二十頁，共二十一頁。內容總結實驗1.大腸桿菌的培養與別離。3/10/2022。蒼南中學 許允文。特點：結構簡單,形體微小.通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有