1、藥品衛(wèi)生與微生物學(xué)培訓(xùn)PEKING PHARM FIRST1什么是微生物微生物是廣泛存在于自然界的一群體形微小（直徑小于1mm）、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、肉眼看不見(jiàn)，必須藉助光學(xué)或電子顯微鏡放大數(shù)百至數(shù)萬(wàn)倍才能觀(guān)察到的生物。 2微生物具有以下特點(diǎn)：1.體積小，面積大2.吸收多，轉(zhuǎn)化快（2000倍體重/h）3.生長(zhǎng)旺，繁殖快（20min分裂一次）4.易變異，適應(yīng)強(qiáng)5.分布廣，種類(lèi)多（10萬(wàn)種以上）3微生物如何分類(lèi)？微生物按其生理結(jié)構(gòu)及化學(xué)組成差異可分成三大類(lèi)：1.真核細(xì)胞型細(xì)胞核的分化程度較高，有核膜、核仁和染色體；胞質(zhì)內(nèi)有完整的細(xì)胞器（如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體及線(xiàn)粒體等）。真菌屬于此類(lèi)型微生物。4微生物如何分類(lèi)？2

2、.原核細(xì)胞型細(xì)胞核分化程度低，僅有原始核質(zhì)，沒(méi)有核膜與核仁；細(xì)胞器不很完善。這類(lèi)微生物種類(lèi)眾多，有細(xì)菌、支原體、衣原體、立克次體、螺旋體和放線(xiàn)菌。5微生物如何分類(lèi)？3.非細(xì)胞型沒(méi)有典型的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，亦無(wú)產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng)，只能在活細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)繁殖。體積微小，能通過(guò)除菌濾器。病毒屬于此類(lèi)型微生物。6微生物的分布微生物在自然界里分布非常廣泛土壤：土壤具有保溫性，土壤環(huán)境適合微生物的生長(zhǎng)水環(huán)境：水中溶解和懸浮有機(jī)、無(wú)機(jī)物，流動(dòng)水有氧滲入可供微生物生長(zhǎng)環(huán)境空氣：空氣不是微生物生長(zhǎng)繁殖的主要場(chǎng)所，但是空氣中飄浮著許多微生物。7在一般空氣中，微生物達(dá)8003500個(gè)/m3，在土壤中達(dá)1500108個(gè)/g，在嚴(yán)重

3、污染的水中可達(dá)107個(gè)/ml。人的頭皮上有140萬(wàn)個(gè)/cm2，兩手上約有440萬(wàn)個(gè)，1g指甲污垢有38億個(gè)，1g糞便可達(dá)101000億個(gè)。可以說(shuō)微生物是無(wú)處不在，無(wú)處不有。 微生物的分布8中等大小的細(xì)菌，1000個(gè)疊加在一起只有句號(hào)那么大。想像一下一滴牛奶，每毫升腐敗的牛奶中約有5千萬(wàn)個(gè)細(xì)菌。細(xì)菌繁殖速度之快是驚人的。大腸桿菌的代時(shí)為20分鐘，以此計(jì)算，在最佳條件下8小時(shí)后，1個(gè)細(xì)胞可繁殖到200萬(wàn)上，10小時(shí)后可超過(guò)10億，微生物的大小與繁殖速度91細(xì)菌（原核單細(xì)胞生物）細(xì)菌按形狀可分為：球菌（0.52m）、桿菌（長(zhǎng)15m，寬0.31m）和螺形菌（大小與桿菌相似）。按革蘭氏染色法染色的不同，

4、分為革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌。微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)102霉菌（絲狀真菌的通稱(chēng)，真核多細(xì)胞生物）霉菌是真菌的一部分。在培養(yǎng)基上長(zhǎng)成絨毛狀或棉絮狀的菌絲體的真菌統(tǒng)稱(chēng)為霉菌。霉菌細(xì)胞呈狹長(zhǎng)的管狀，稱(chēng)為菌絲。菌絲直徑比細(xì)菌、放線(xiàn)菌大，約210m。菌絲分枝連接，交錯(cuò)集合在一起的總體稱(chēng)為菌絲體。113酵母菌（真核單細(xì)胞生物，屬真菌）酵母菌以單細(xì)胞存在，呈圓形、卵圓形和香腸形，比細(xì)菌大，細(xì)胞長(zhǎng)530m，寬15m。酵母菌是重要的工業(yè)微生物，用于釀酒，生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白、B族維生素、核酸、輔酶A、細(xì)胞色素C等。一般對(duì)人體無(wú)害124放線(xiàn)菌（原核單細(xì)胞生物）放線(xiàn)菌有生長(zhǎng)發(fā)育良好的菌絲體，呈分枝狀，菌絲寬為0.21.2m，

5、革蘭氏陽(yáng)性。菌落常呈幅射狀，因此稱(chēng)放線(xiàn)菌。135病毒病毒是一類(lèi)體積十分微小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，只含一種核酸（DNA或RNA），沒(méi)有產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng)，只能在活細(xì)胞內(nèi)以復(fù)制方式增殖的非細(xì)胞型微生物。病毒是最常見(jiàn)的致病微生物，人類(lèi)傳染病中大約75%是由病毒引起的。141營(yíng)養(yǎng)物2pH值：大多數(shù)細(xì)菌最適pH為6.87.43溫度：一般細(xì)菌最適溫度為3040，真菌為2030。細(xì)胞生長(zhǎng)的溫度極限為-790微生物生長(zhǎng)的影響因素 154氧氣：大多數(shù)細(xì)菌和所有霉菌都是需氧菌，少數(shù)細(xì)菌是厭氧菌，有些細(xì)菌和酵母菌是兼性需氧厭氧的5滲透壓：微生物細(xì)胞膜和所有生物膜一樣是一種半透膜，可讓水自由通過(guò)，對(duì)溶質(zhì)則有選擇性。6表面張力：表

6、面活性劑可降低表面張力，它是影響細(xì)菌生長(zhǎng)的因素之一161熱原質(zhì)（Pyrogen）:熱原質(zhì)即菌體中的脂多糖，大多是革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的。注入人或動(dòng)物體內(nèi)能引起發(fā)熱反應(yīng)，故名熱原質(zhì)。熱原質(zhì)耐高熱，高壓蒸汽滅菌（121，20）不能使其破壞，加熱（1804h;25045;6501）才使熱原質(zhì)失去作用。熱原質(zhì)可通過(guò)一般細(xì)菌濾器，但沒(méi)有揮發(fā)性，所以，除去熱原質(zhì)最好的方法是蒸餾。微生物的產(chǎn)物：172毒素：細(xì)菌可產(chǎn)生內(nèi)、外毒素，與細(xì)菌的致病性密切相關(guān)。內(nèi)毒素（Endotoxin）即革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的脂多糖，其毒性成分為類(lèi)脂A。菌體死亡崩解后釋放出來(lái)。外毒素(Exotoxin)是由革蘭氏陽(yáng)性菌及少數(shù)革蘭氏陰性菌

7、在生長(zhǎng)代謝過(guò)程中釋放至菌體外的蛋白質(zhì)。具有抗原性強(qiáng)、毒性強(qiáng)、作用特異性強(qiáng)的突出特點(diǎn)。3.抗生素18人是潔凈室最大的污染源，占90%左右。一般男性每人每分鐘向周?chē)欧?000個(gè)以上的含菌粒子，女性為750個(gè)以上。穿無(wú)菌服時(shí)，靜止時(shí)的發(fā)菌量為10300個(gè)/min，一般活動(dòng)時(shí)發(fā)菌量為1501000個(gè)/min，行走時(shí)發(fā)菌量為9002500個(gè)/min。咳嗽一次發(fā)菌量為70700個(gè)/min，噴嚏一次為400060000個(gè)/min。所以在潔凈室中，人的數(shù)量和活動(dòng)應(yīng)有特別嚴(yán)格的限制。人是最大的污染源？19為什么GMP中要控制微生物？微生物種類(lèi)繁多，有的對(duì)人有益，有的有害，有的無(wú)益也無(wú)害。但在藥品生產(chǎn)過(guò)程中，不

8、可能對(duì)環(huán)境中的各種微生物加以區(qū)別對(duì)待，為保證藥品的安全有效，需要對(duì)其進(jìn)行控制。空氣中的微生物多數(shù)附著在灰塵上，或以芽孢形式懸浮于空氣中，1m以下者處于懸浮狀態(tài)，10m以上者會(huì)逐漸沉下來(lái)而形成菌塵。所以也要對(duì)塵粒進(jìn)行控制。20大量臨床資料表明，注射劑（尤其是靜脈注射劑）如污染了712m的塵粒，可導(dǎo)致熱原反應(yīng)、肺動(dòng)脈炎、微血栓或異物肉芽腫等，嚴(yán)重的還會(huì)致人死命。而如果污染了細(xì)菌，輕則局部紅腫化膿，重則引起全身細(xì)菌性感染。21“欣弗事件” 反映了我國(guó)一些企業(yè)在微生物控制方面存在的嚴(yán)重問(wèn)題；而更為嚴(yán)重的是一些企業(yè)普遍存在的無(wú)菌檢查認(rèn)識(shí)誤區(qū) ！22藥品生產(chǎn)潔凈室（區(qū)）空氣潔凈度等級(jí)藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（

9、2010年修訂)23水和一些物料的衛(wèi)生學(xué)（法定）標(biāo)準(zhǔn)注：#：包括有乳糖、藥用炭、淀粉、葡萄糖、糊精。%：XX膠囊屬中藥制劑，含胎盤(pán)粉，按中國(guó)藥典2005版一部規(guī)定，還不得檢出沙門(mén)菌。*：XX霜屬中藥制劑，用于創(chuàng)傷、燒傷，故要求細(xì)菌總數(shù)100個(gè)/g、霉菌數(shù)10個(gè)/g。說(shuō)明：表示每1g或每1ml不得檢出。 NC：表示無(wú)規(guī)定。可不檢查。24Disinfection殺死物體上病原微生物的方法,并不一定能殺死含芽胞的細(xì)菌或非病原微生物殺滅物體上所有微生物的方法。 不存在活菌的意思。 防止或抑制體外細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法。消毒：滅菌：無(wú)菌：防腐：AsepsisSterilizationAntisepsis消毒

10、與滅菌的基本概念25無(wú)菌制劑不存在活的微生物的制劑（GMP指南）。非無(wú)菌制劑所含活的微生物量符合衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的制劑（GMP指南）。26熱力滅菌法 常用滅菌方法高溫殺滅細(xì)菌焚燒-最徹底的滅菌方法燒灼-直接用火焰滅菌方法干烤-加熱160-180 2小時(shí)干熱滅菌法27濕熱滅菌法加壓蒸汽滅菌法最有效的滅菌方法121，20-30分鐘煮沸消毒法水煮100 5分鐘(繁殖體)-2小時(shí)(芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法間歇蒸汽滅菌法水蒸汽100，15-30分鐘(繁殖體)反復(fù)多次流動(dòng)蒸汽間歇加熱滅菌較低的溫度（61 30分鐘）殺滅致病菌28濕熱滅菌與干熱滅菌的比較同一溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好1、濕熱中細(xì)菌菌體

11、蛋白較易凝固2、濕熱的穿透力比干熱大3、濕熱的蒸汽有潛熱29化學(xué)消毒滅菌法 利用化學(xué)試劑殺滅微生物的方法類(lèi)別作用機(jī)制常用種類(lèi)酚類(lèi)蛋白變性，細(xì)胞膜損傷石炭酸醇類(lèi)蛋白變性乙醇氧化劑氧化、蛋白沉淀高錳酸甲、過(guò)氧乙酸、碘酒重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞表面活性劑蛋白變性，細(xì)胞膜損傷新潔而滅染料干擾氧化、抑制繁殖龍膽紫常用消毒劑種類(lèi)30消毒劑常 用 量用途乙醇 70%75%水溶液 0.5%洗必泰溶于70%乙醇，再加入2%甘油用于皮膚、器具等消毒供洗手用消毒異丙醇75%水溶液用于皮膚、器具等消毒甲醛37%40%甲醛液89ml，再加入45g高錳酸鉀每m3熏蒸量，密閉1224h。刺激性強(qiáng)戊二醛2%水溶液

12、用于空氣、器具等消毒。廣譜、高效、低毒，可殺芽孢和病毒。刺激性較輕。常用消毒劑用量及用途31 新潔爾滅（苯扎溴銨）0.1%水溶液用于皮膚、粘膜、器具等消毒，有清潔和消毒雙重功效。抗菌譜較窄。 杜滅芬（消毒寧）0.05%0.1%水溶液用于皮膚、器具等消毒 過(guò)氧乙酸 0.2%0.5%水溶液 新配0.5%水溶液 1g/m3用于器具等消毒抗菌譜廣，可用于皮膚消毒殺滅某些病毒熏蒸，但性質(zhì)不穩(wěn)定 乳酸 0.331mol/L 11.5ml/m3熏蒸或與等量苯酚合用熏蒸噴霧，用于空氣消毒，有強(qiáng)殺菌作用熏蒸，密閉12h以上 麝香草酚5%麝香草酚溶于50%乙醇噴灑墻面、地面，殺霉菌32消毒劑使用注意 長(zhǎng)期使用同一

13、種消毒劑，往往會(huì)使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，達(dá)不到應(yīng)有的效果所以，在實(shí)際生產(chǎn)使用中， 應(yīng)定期更換不同的消毒劑。 33輻射有兩種類(lèi)型：一種是電磁波輻射，如紫外線(xiàn)、紅外線(xiàn)、微波；一種是電離輻射，如可引起被照射物電離的X射線(xiàn)、射線(xiàn)。輻射滅菌法34輻射滅菌法紫外線(xiàn) 紫外光波長(zhǎng)在136390nm之間，其中260nm左右能破壞核酸，殺菌作用最強(qiáng)。紫外線(xiàn)消毒的效果與光源的功率、光源與被照射物的距離、照射時(shí)間、溫度和濕度等因素有關(guān)。紫外燈的輸出功率隨使用時(shí)間增加而降低。國(guó)產(chǎn)紫外燈的平均壽命一般為2000h，超過(guò)平均壽命時(shí)必須更換。紫外線(xiàn)的穿透力很弱，不能穿透一般包裝材料，如玻璃、塑料薄膜、紙等。35紅外線(xiàn) 通過(guò)加熱碳化

14、硅板產(chǎn)生的輻射熱能，由空氣傳導(dǎo)加熱滅菌。如紅外線(xiàn)烤箱，溫度可達(dá)180左右。熱效應(yīng)特點(diǎn)是由表及里。微波 微波滅菌主要是因其熱效應(yīng)。微波加熱升溫快，溫度高且均勻，殺菌作用強(qiáng)。熱效應(yīng)特點(diǎn)是由里及表。不同性質(zhì)的物品吸收微波的能力不同，其熱效應(yīng)和消毒效果也不同。3660Co滅菌 放射性同位素60Co（或137Cs）衰變時(shí)可放射出射線(xiàn)，射線(xiàn)的能量高、穿透力強(qiáng)，可使細(xì)胞內(nèi)各種活性物質(zhì)發(fā)生化學(xué)變化，從而使細(xì)菌損傷或死亡。經(jīng)60Co輻射滅菌的物品溫度升高很少，一般僅約5，故又稱(chēng)“冷滅菌”。37濾過(guò)除菌法 用物理阻留的方法將液體或空氣中的 細(xì)菌除去,以達(dá)到除菌目的。濾菌器含有微細(xì)小孔0.22微米,只允許液體或氣體

15、通過(guò),而大于孔徑的細(xì)菌等顆粒不能通過(guò) 。適用范圍血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌 38濾菌過(guò)程39臭氧是一種高效廣譜殺菌劑，對(duì)細(xì)菌、病毒、霉菌、芽孢、真菌和微生物等都具有極強(qiáng)的殺滅力。臭氧的殺菌能力比紫外線(xiàn)高20%，且在空氣中自行擴(kuò)散，殺菌無(wú)死角，在水中的殺菌速度比氯快600倍。它滅活病毒機(jī)理是通過(guò)直接破壞其RNA或DNA物質(zhì)來(lái)完成的，而殺滅細(xì)菌、霉菌類(lèi)微生物，則是臭氧首先作用于細(xì)胞核，繼而破壞膜內(nèi)組織，直至殺死。由于臭氧最終還原為氧氣，所以它對(duì)人體和環(huán)境沒(méi)有任何副作用，沒(méi)有二次污染。它不但對(duì)大腸桿菌、綠膿桿菌及雜菌等有消毒能力，而且對(duì)霉菌也很有效。臭氧滅菌40 GMP所制定的條款主要是針對(duì)

16、消滅任何藥品生產(chǎn)中的隱患，這種隱患是無(wú)法靠對(duì)成品檢驗(yàn)完全預(yù)防的。這里指的隱患基本上有兩個(gè)方面：即生產(chǎn)過(guò)程中的交叉污染和混藥差錯(cuò) 進(jìn)入潔凈室(區(qū))的空氣必須凈化，并根據(jù)生產(chǎn)工藝要求劃分空氣潔凈級(jí)別。潔凈室(區(qū))內(nèi)空氣的微生物數(shù)和塵粒數(shù)應(yīng)定期監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)結(jié)果應(yīng)記錄存檔。GMP相關(guān)預(yù)防微生物污染措施41 潔凈室(區(qū))的窗戶(hù)、天棚及進(jìn)入室內(nèi)的管道、風(fēng)口、燈具與墻壁或天棚的連接部位均應(yīng)密封。 潔凈室(區(qū))內(nèi)安裝的水池、地漏不得對(duì)藥品產(chǎn)生污染。 不同空氣潔凈度級(jí)別的潔凈室(區(qū))之間的人員及物料出入，應(yīng)有防止交叉污染的措施。 廠(chǎng)房必要時(shí)應(yīng)有防塵及捕塵設(shè)施。GMP相關(guān)預(yù)防微生物污染措施42與藥品直接接觸的設(shè)備表面應(yīng)光潔、平整、易清洗或消毒、耐腐蝕，不與藥品發(fā)生化學(xué)變化或吸附藥品。設(shè)備所用的潤(rùn)滑劑、冷卻劑等不得對(duì)藥品或容器造成污染。潔凈工作服的質(zhì)地應(yīng)光滑、不產(chǎn)生靜電、不脫落纖維和顆粒性物質(zhì)