1、微生物的培養(yǎng)(piyng)微生物的培養(yǎng)(piyng)與應(yīng)用共三十六頁培養(yǎng)基的類型(lixng)按物理狀態(tài)分固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基允許特定種類的微生物 生長，同時(shí)抑制或阻止 其他微生物生長根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)， 在培養(yǎng)基中加入某種指 示劑或化學(xué)藥品按功能分選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基類型(lixng)共三十六頁培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì) 水、無機(jī)鹽、碳源、氮源、生長因子培養(yǎng)基組分提供的主要營養(yǎng)牛肉膏 5g碳源、氮源、磷酸鹽、維生素蛋白胨 10g氮源、維生素NaCl 5g無機(jī)鹽水 1000ml氫元素、氧元素牛肉(ni ru)膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成培養(yǎng)基組成(z chn)共三十六頁可以作為(zuwi)硝化細(xì)菌碳

2、源、氮源和能源的是：ACO2、NH3、光能 B(CH2O)、N2、NH3CCO2、NH3、NH3 D(CH2O)、NH3、N2【解析】本題考查知識點(diǎn)：硝化細(xì)菌是化能自養(yǎng)型微生物；硝化細(xì)菌合成有機(jī)物所需能量來源(liyun)來自氧化分解外界環(huán)境中的NH3；合成有機(jī)物所需的碳源是CO2；NH3氧化分解的產(chǎn)物是NO3，也就是硝化細(xì)菌的氮源共三十六頁關(guān)于(guny)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是：A.是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源 B.凡碳源都提供能量C.除水以外的無機(jī)物只提供無機(jī)鹽 D.無機(jī)氮源也能提供能量【解析】 有的碳源只能是碳源，如二氧化碳； 有的碳源可同時(shí)是氮源，如NH4HCO3； 有的碳源

3、同時(shí)是能源(nngyun)，如葡萄糖； 有的碳源同時(shí)是氮源，也是能源，如蛋白胨。共三十六頁【解析】對于C選項(xiàng)，除水以外的無機(jī)物種類繁多功能也多樣。 二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源； NaHCO3可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機(jī)鹽；而NaCl則只能提供無機(jī)鹽。對于D選項(xiàng)，無機(jī)氮源提供能量(nngling)的情況還是存在的，如NH3可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。共三十六頁土壤中分解尿素(nio s)細(xì)菌的分離分解(fnji)纖維素的微生物的分離選擇培養(yǎng)基的成分：尿素作為唯一氮源選擇培養(yǎng)基的成分：纖維素作為唯一碳源鑒定方法：在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，pH升高，說明細(xì)菌能分解尿素鑒定方法

4、：剛果紅染色法共三十六頁透明(tumng)圈 透明圈越大，細(xì)菌(xjn)分解纖維素的能力越強(qiáng)共三十六頁(2013廣東)以下為某興趣小組獲得(hud)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果及其分析，正確的是： 解析：細(xì)菌分解纖維素后會形成(xngchng)一個(gè)透明圈， 透明圈越大，細(xì)菌分解能力越強(qiáng)。共三十六頁（2011新課標(biāo)全國卷）有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成(zo chn)的土壤污染，某同學(xué)欲從污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株?；卮饐栴}： (1)在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以_為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。 (3)為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小

5、，分解圈大說明該菌株的降解能力_。選擇(xunz)原油強(qiáng)共三十六頁(2)純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即_ 和_ _。(4)通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中，實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、_和_ _。無菌技術(shù)要求實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈_附近進(jìn)行，以避免(bmin)周圍環(huán)境中微生物的污染?；鹧?huyn)平板劃線法 稀釋涂布平板法干熱滅菌高壓蒸汽滅菌共三十六頁 富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離(fnl)微生物旺盛生長的特定環(huán)境條件，使其群落中的數(shù)量大大增加，從而分離出所需微生物的培養(yǎng)方法。對產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇_ _的培養(yǎng)基，并在_條件下培養(yǎng)。高溫(gown)以淀粉為

6、唯一碳源 脲酶可以將尿素分解為NH3，從而使尿素溶液pH升高，這可用_試劑來檢驗(yàn)。用纖維素作唯一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物，得到的纖維素分解菌中可能還混有_ _。自養(yǎng)微生物(硝化細(xì)菌)酚紅共三十六頁練習(xí)(linx)下表表示(biosh)某培養(yǎng)基的配方，下列有關(guān)敘述正確的是：A.從物理性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，從用途看該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基 B培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨 C該培養(yǎng)基缺少提供生長因子的物質(zhì) D該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到合適的pH后就可以接種菌種共三十六頁【解析】伊紅、美藍(lán)能使某些細(xì)菌著色，起鑒別作用；糖類(尤其是葡萄糖)是最常用的碳源；蛋白胨主要用作氮源，但也提

7、供生長因子，并作為(zuwi)異養(yǎng)型微生物的碳源、能源。 伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上大腸桿菌(d chn n jn)的菌落呈現(xiàn)黑色共三十六頁選擇培養(yǎng)基的制作方法(1)基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加抗性物質(zhì)。舉例：加高濃度食鹽：分離金黃色葡萄球菌。加青霉素：分離酵母菌和細(xì)菌。(2)通過改變培養(yǎng)基的成分。舉例：培養(yǎng)基中缺乏氮源：可分離自生固氮微生物。培養(yǎng)基中缺乏有機(jī)(yuj)碳源：可分離自養(yǎng)微生物。共三十六頁(3)利用培養(yǎng)基的特定成分。舉例：當(dāng)石油是唯一碳源：可分離出能消除石油污染的微生物。當(dāng)纖維素為唯一碳源：可分離纖維素分解(fnji)菌。(4)通過某些特殊環(huán)境分離微生物。舉例：在高鹽環(huán)境中可分離耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高

8、時(shí)易失水而不能生存。在高溫環(huán)境中可分離得到耐高溫的微生物，其他微生物在高溫環(huán)境中因酶失活而無法生存。共三十六頁消毒(xio d)和滅菌獲得(hud)純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵防止外來雜菌的入侵 指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外 所有微生物，包括芽孢和孢子。 使用較為溫和的物理或化學(xué)方法，僅 殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有 害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒滅菌常用的消毒和滅菌的方法 P15-16共三十六頁計(jì)算 稱量 溶化(rnghu) 滅菌 倒平板培養(yǎng)基的制備(zhbi)P17倒平板操作的討論：(1)培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？ 可以用手觸摸盛

9、有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。(2)為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。共三十六頁(3)平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。(4)在倒平板的過程(guchng)中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。共三十六頁純化(chn hu

10、)原理： 在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散(fnsn)成單個(gè)細(xì)胞，使其長成單個(gè)的菌落，這個(gè)菌落就是純化的細(xì)菌菌落。純化技術(shù)接種的方法平板劃線法稀釋涂布平板法共三十六頁平板(pngbn)劃線法共三十六頁稀釋(xsh)涂布平板法共三十六頁平板劃線操作的討論(1)為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，

11、以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)(jsh)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。共三十六頁(2)在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？ 以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。(3)在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始(q sh)處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。共三十六頁 顯微鏡直接計(jì)數(shù) 原理利用(lyng)特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量，但不能區(qū)分死菌與活菌統(tǒng)計(jì)微生物數(shù)目(

12、shm)的方法 活菌計(jì)數(shù)法 原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低共三十六頁(2)純化菌種時(shí)，為了得到(d do)單菌落，常采用的接種方法有兩種，即_ 和_ _。(4)通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中，實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、_和_ _。無菌技術(shù)要求實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈_附近進(jìn)行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染?；鹧?huyn)平板劃線法 稀釋涂布平板法干熱滅菌 高壓蒸汽滅菌（2011新課標(biāo)全國卷）有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染，某同

13、學(xué)欲從污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株?；卮饐栴}： 共三十六頁練習(xí)(linx)(2013四川)普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽胞桿菌的-淀粉酶基因(jyn)轉(zhuǎn)入酵母菌中，經(jīng)篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種（過程如圖甲所示）。工程酵母菌固體平板培養(yǎng)接種接種篩選、接種液體培養(yǎng)菌種-淀粉酶基因重組質(zhì)粒接種到新鮮培養(yǎng)基圖甲圖甲中，過程需要的酶有 。為達(dá)到篩選目的，平板內(nèi)的固體培養(yǎng)基應(yīng)以 作為唯一碳源。、過程需要重復(fù)幾次，目的是 。篩選出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌種限制酶和DNA連接酶 淀粉共三十六頁練習(xí)(linx) 某同學(xué)嘗試過程的操作，其中一個(gè)平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如

14、圖乙所示。該同學(xué)的接種方法是 ，推測該同學(xué)接種時(shí)可能的操作失誤是 。以淀粉為原料(yunlio)，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的適宜條件下密閉發(fā)酵，接種 菌的發(fā)酵罐需要先排氣，其原因是 。用凝膠色譜法分離-淀粉酶時(shí)，在色譜柱中移動速度較慢的蛋白質(zhì)，相對分子質(zhì)量較 。圖乙稀釋涂布平板法涂布不均勻（3）工程酵母 工程酵母菌利用淀粉的速度很快，發(fā)酵產(chǎn)生CO2的速度也很快 （4）小共三十六頁練習(xí)(linx)（2013新課標(biāo)卷II）臨床試用抗生素前，有時(shí)需要做細(xì)菌(xjn)耐藥實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實(shí)驗(yàn)步驟操作，以確定某致病菌對不同抗生素的敏感性?；卮鹣铝袉栴}：（1

15、）為了從樣本中獲取致病菌菌落，可用_法或_法將樣本借種于固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)過選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。（2）取該單菌落適當(dāng)稀釋，用_ _法接種于固體培養(yǎng)基表面，在37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，使其均勻生長，布滿平板。共三十六頁練習(xí)(linx)（3）為了檢測該致病菌對于抗生素的敏感性，將分別含有A，B，C，D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時(shí)間后，含A的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素A_；含B的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素B_；含C的濾紙片周圍的透明圈比含A的小，說明_ _；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個(gè)菌落，在排除雜菌污

16、染的情況下，此菌落很可能(knng)是抗生素D的_。（4）根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為達(dá)到抗菌目的，最好應(yīng)選擇抗生素_。共三十六頁練習(xí)(linx)【答案(d n)】（1）平板劃線 稀釋涂布平板 （2）稀釋涂布平板 （3）敏感 不敏感 該致病菌對C的敏感性比對A弱 耐藥菌 （4）A【解析】（1）分離菌落常用稀釋涂布平板法或平板劃線法（2）取該單菌落適當(dāng)稀釋，稀釋用涂布平板法進(jìn)行接種（3）含抗生素的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對該抗生素有敏感性，周圍沒有透明圈的說明該抗生素不具有敏感性。透明圈越大的敏感性越強(qiáng)。（4）實(shí)驗(yàn)結(jié)果抗生素A對該致病菌的作用最好。共三十六頁練習(xí)(linx)（2013上海）回答

17、下列關(guān)于微生物的問題。阿拉伯膠是一種多糖，研究者從某地合歡樹下距離地表深1015cm處的土樣中初篩到能合成阿拉伯膠降解酶的菌株SM01，以下(yxi)為該菌株的鑒定過程。 為獲得單菌落，可采用 法將初篩菌液接種在_培養(yǎng)基上。 表4中培養(yǎng)液pH均為6.0，若對SM01中阿拉伯膠降解酶的活力進(jìn)行測定，則應(yīng)選用表中的_培養(yǎng)液，針對不選用的其他培養(yǎng)液，分別說明原因。 共三十六頁練習(xí)(linx)答案：平板劃線法（或稀釋涂布平板法） 固體 D A培養(yǎng)液缺少(qusho)氮源，SM01不能很好生長B培養(yǎng)液缺少氮源，SM01不能很好生長；且有阿拉伯酶，會影響對SM01自身產(chǎn)生的酶活力的測定結(jié)果C培養(yǎng)液缺乏阿拉

18、伯膠酶催化底物阿拉伯膠，會影響SM01的生長，也無法對阿拉伯膠酶活力進(jìn)行測定共三十六頁練習(xí)(linx)（2011山東）研究(ynji)發(fā)現(xiàn)柚皮精油和乳酸菌素（小分子蛋白質(zhì)）均有抑菌作用，兩者的提取及應(yīng)用如圖所示。（2）篩選乳酸菌A時(shí)可選用平板劃線法或_接種。對新配制的培養(yǎng)基滅菌時(shí)所用的設(shè)備是_。實(shí)驗(yàn)前需對超凈工作臺進(jìn)行_處理。（3）培養(yǎng)基中的尿素可為乳酸菌A生長提供_。電泳法純化乳酸菌素時(shí)，若分離帶電荷相同的蛋白質(zhì)，則其分子量越大，電泳速度_。（4）抑菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，在長滿致病菌的平板上，會出現(xiàn)以抑菌物質(zhì)為中心的透明圈。可通過測定透明圈的_來比較柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。共三十六頁練習(xí)(linx)答案：(2)稀釋涂布平板法 高壓蒸汽(zhn q)滅菌鍋 紫外線消毒(3)碳源和氮源 越慢(4)大小 共三十六頁內(nèi)容摘要微生物的培養(yǎng)(piyng)。允許特定種類的微生物。根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，。碳源、氮源、