1、第一章 實驗室設備和一般技術第一節 組培實驗室植物細胞工程實驗室的組成 在建造植物組織培養室時，應選擇采光好、通風好、環境干凈的地點，以利于組織培養的順利進行和降低培養過程的污染率。洗滌室藥品室稱量室滅菌室緩沖室4 鑒定室（觀察室）3 培養室5 溫室培養基配制室2 接種室1 通用實驗室植物細胞工程實驗室的組成1 通用實驗室準備室（又稱化學實驗室），明亮，通風。功能洗滌室、配置室、滅菌室功能：用于玻璃器具的 清洗、干燥和貯 存；接種材料沖 洗。配備：上下水；水槽；塑料筐；干燥箱；晾干架等。1.1 洗滌室面積：根據規模，可與配置室合并，一般20m2 。1.2 配置室功能：用于培養基的配制、試管苗出

2、瓶、清洗。配備：藥品柜，天平，工作臺，蒸餾水器，磁力攪拌器，冰箱，電爐或電飯鍋，酸度計，培養箱設計要求：明亮、通風、潔凈。藥品柜冰箱天平磁力攪拌器恒溫水浴鍋酸度計電蒸餾水器水處理中心純 水 器恒溫培養箱電飯鍋電爐人工氣候室功能：完成培養基、接種工具等的高壓滅菌過程。配備：高壓滅菌器或微波爐，烘干箱。1.3 滅菌室洗滌室藥品室稱量室滅菌室緩沖室4 鑒定室（觀察室）3 培養室5 溫室培養基配制室2 接種室1 通用實驗室植物細胞工程實驗室的組成2 接種室功能：用于植物材料的無菌分離、接種和轉移培養物。結構：緩沖間+接種室配備：超凈臺，工作臺，擱架，醫用平車， 細菌過濾器、解剖鏡、紫外燈等。面積：一般

3、57m2設計要求:地面、頂棚及墻壁平坦無縫，密閉光滑，干爽安靜，清潔明亮，配置橫拉門，門窗嚴密。接種設備-無菌超凈工作臺:用于培養材料的消毒及接種。使用前，將超凈工作臺上面的排風和殺菌按鈕開啟，滅菌15-30min后，關閉殺菌按鈕，打開照明按鈕，即可在上面進行操作。接種箱返回Good Manufacturing Practice 良好作業規范 優良制造標準洗滌室藥品室稱量室滅菌室緩沖室4 鑒定室（觀察室）3 培養室5 溫室培養基配制室2 接種室1 通用實驗室植物細胞工程實驗室的組成3 培養室 配備：培養架 邊臺 解剖鏡 照明設備 定時器 空調器 干濕溫度計 工作臺 除濕機 換氣扇 面積：根據規

4、模定 功能：培養植物材料。4.觀察室功能：觀察并研究培養材料的生長分化情況及其形態發生規律；檢查培養材料是否脫毒和發生變異。主要配備：生物顯微鏡，切片機，酶聯免疫檢測儀，PCR擴增儀等。要求：室內清潔、明亮、安靜，設備先進。 倒置顯微鏡體視顯微鏡 生物顯微鏡 熒光顯微鏡超低溫冰箱手持式基因槍固定式基因槍高速冷凍離心機PCR 儀冷凍干燥機移 液 器酶 標 儀電穿孔儀洗滌室藥品室稱量室滅菌室緩沖室4 鑒定室（觀察室）3 培養室5 溫室培養基配制室2 接種室1 通用實驗室植物細胞工程實驗室的組成5. 溫室要求：能夠控溫調濕、控光通風。面積：據規模來定。注：室內馴化與設施下馴化均可。功能：提供組培苗煉

5、苗的環境。空調操作臺工作臺黑板講臺烘箱 化學實驗室 接種室培養室 緩沖間超凈工作臺培養架培養架工作室藥品柜推拉門搖床蒸餾水 工作臺滅菌鍋水槽空調第一章 實驗設備及培養條件第一節 實驗室設計第二節 常用設備和器材第三節 玻璃器皿的選擇與清洗第二節設備和器材1 高壓蒸氣滅菌鍋2 接種工具3 培養設備4 化學實驗及分析設備 5 培養物細胞學觀察設備1. 高壓蒸氣滅菌鍋用于培養基、蒸餾水和接種器械的滅菌消毒。工作原理：在密閉的蒸鍋內，的壓力下，鍋內溫度達121。在此蒸氣溫度下，可以很快殺死各種細菌及其高度耐熱的芽孢。1.外桶 2.鍋蓋3.安全閥4.排氣閥5.氣壓表6.內桶7.排氣軟管8.支架 手提式高

6、壓蒸氣滅菌鍋1 高壓蒸氣滅菌鍋使用方法：首先檢查滅菌鍋內是否有水，而且水剛好淹住加熱器，然后放入滅菌材料，對稱擰緊滅菌鍋上的螺絲，關閉放氣閥通電。待壓力上升到時，打開放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關閉放氣閥。三次放氣后，關閥再通電，壓力表上升達時，維持20min后，斷電，待壓力降至零時，打開入入氣閥，取出滅菌材料。注意事項：對高壓滅菌后不變質的物品，如無菌水、栽培介質、接種用具，可以延長滅菌時間或提高壓力。而培養基要嚴格遵守保壓時間，既要保壓徹底，又要防止培養基中的成分變質或效力降低，不能隨意延長時間；對于一些布制品，如實驗服、口罩等也可用高壓滅菌。洗凈晾干后用耐高壓塑料袋裝好，高壓

7、滅菌20-30min；高壓滅菌前后的培養基，其pH值下降單位。因此，調pH值時，可適當調高個單位。鑷子類：接種、轉移材料或分離莖尖用，以100ml三角瓶為培養瓶，可用20cm長。2 接種用具2.2 剪刀類：醫用剪刀，剪切割外植體或繼代培養時分離材料。2.3 解剖刀：切割芽、莖段、愈傷組織等，繼代時分離材料，也可用于微小外植體的接種等。、解剖針：轉移細胞或愈傷組織，微莖尖分離及接種等。2.5.其它：周轉筐 搪瓷盤 移液管架、玻璃棒、酒精燈、試管架等。3 培養設備空調定時器溫度控制器增濕機或去濕機培養架搖床或旋轉床日光燈光照培養箱 4 化學實驗及分析設備天平酸度計蒸餾水器烘箱或玻璃烘干器電爐藥品柜

8、冰箱水槽涼干架污物桶5 培養物細胞學觀察設備顯微觀察設備組織切片染色設備照相及沖洗設備倒置顯微鏡體視顯微鏡 生物顯微鏡 熒光顯微鏡第三節 玻璃器皿的選擇和清洗1 玻璃器皿的選擇2 清洗1.1 對玻璃器皿要求：1）耐腐蝕；耐高溫、高壓；2）透明度好；3）便于接種。1 選擇 （1）試管- 適合于初代培養、用少量培養基及試驗各種不同配方時選用 （2）三角錐瓶 適用于各種培養（如固體培養、液體培養、大規模培養或一般培養）。 （3）L形管和T形管 為專用的旋轉式液體培養試管。 （4）培養皿 適于作單細胞的固體平板培養、胚和花藥培養和無菌發芽。 （5）角形培養瓶和圓形培養瓶 適用于液體培養用，如單細胞和原

9、生質體的淺層培養。 （6）果醬瓶 常用作組培苗大量繁殖用的培養瓶。 （7）蘭花瓶適于蝴蝶蘭、大花蕙花等蘭花的組培苗大量繁殖用的培養瓶。三角瓶：50、100、250、500ml或用250ml罐頭瓶代替，2000-3000ml。培養皿：6、9、12cm試管：18180mm或20200mm量筒：10、50、100、500、1000ml燒杯：50、100、200、500、1000ml容量瓶：100、200、500、1000ml試劑瓶（棕色）：50、100、250、500、1000ml移液管：、2、5、10ml 微量移液器 玻璃棒、酒精燈1.2 玻璃器皿的規格：2 清洗2.1.清洗玻璃器皿用的洗滌劑有肥皂、洗潔精、洗衣粉、和鉻酸鉀洗滌液。2.2 原則： （1）清洗時先將器皿中的殘渣除去，用清水洗凈，再用熱的肥皂水或洗潔精洗凈，清水沖洗干凈后用蒸餾水沖洗一次，干后備用 （2）洗凈的玻璃器皿應透明發亮、內外壁水膜均勻，不掛水珠。 2.3 新購的玻璃器皿先用1%稀鹽酸洗后用洗潔精清洗，用自來水、蒸餾水沖洗。用重鉻酸鉀+濃硫酸洗液浸泡4h后，自來水徹底沖洗。用過的玻璃器皿流水沖洗后，泡入洗潔精水中刷洗，用自來水蒸餾水沖洗污染瓶清洗：有可能被病原菌污染的器皿，必須經過適當消毒后，將污垢除去，用皂液洗刷，再用流水沖洗干凈。若用皂液未能洗凈的器皿，可用洗液浸泡適