1、甲型肝炎病毒IgM抗體測定ppt酶聯免疫吸附試驗（ELISA法）將抗體(抗原)包被在固相表面后，按不同的步驟加入待測抗原(抗體)和酶標抗體(抗原)，充分反應后用洗滌的方法，使固相上形成的抗原抗體復合物與其他物質分離，洗去游離的酶標抗體(抗原)，最后加入底物，根據酶對底物催化的顯色反應程度，而對標本中的抗原(抗體)進行定性或定量。ELISA類型夾心法間接法測抗體競爭法捕獲法捕獲法測IgM抗體血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，后者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗本多用捕獲法。（1）包被抗體：用抗人鏈抗體包被固相載體上,形成固相抗人鏈;（2）加入病人的血清標本;（3）

2、加入特異性抗原試劑;，（4）加入針對特異性抗原的酶標抗體，（5）加底物顯色免疫球蛋白的結構一、基本結構：四肽鏈結構 由兩條相同的輕鏈（Light Chain）和兩條相同的重鏈（Heavy chain）通過鏈間二硫鍵連結形成。 分子式為：H2L2四條肽鏈兩端游離的NH2和COOH方向一致分別命名為N端和C端（一）輕鏈和重鏈輕鏈（L鏈） 鏈 鏈輕鏈決定型別 型 型正常人：2 ：1重鏈（H鏈）:根據其抗原性的差異，人類Ig的H鏈分為 鏈 鏈 鏈 鏈 鏈重鏈決定Ig類別 IgG IgA IgM IgD IgE捕獲法主要用于 血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測定。實驗原理用抗人鏈抗體包被酶標板，用以

3、捕獲血清中IgM類抗體，然后用特異性HAVAg與IgM抗體結合，再加酶標抗HAV抗體，最后加底物顯色，顯色深淺與HAVIgM的含量成正相關。試劑盒組成1 抗- 鏈包被干板條 412 孔2 抗-HAVIgM 陰性對照 1 ml1 瓶3 抗-HAVIgM 陽性對照 1 ml1 瓶4 HA-Ag 2.6 ml1 瓶5 酶結合物 2.6 ml1 瓶6濃縮洗滌液 20 ml1 瓶（用蒸餾水 1：20 稀釋）7 顯色劑 A 3 ml1 瓶8 顯色劑 B 3 ml1 瓶9 終止液 3 ml1瓶操作步驟1將微孔條固定在支架上，按順序編號。2分別將待測標本，陰、陽性對照100l（2滴）加入相應的孔中，設空白對照

4、孔。置3720分鐘。3洗滌：甩去孔內液體，用洗滌液注滿各孔，靜置5秒，共三次，每次洗后均需扣干。4每孔加HAAg50l，酶結合物50l（空白對照除外），振蕩混勻，置3720分鐘。5洗滌：重復上述36顯色：每孔加顯色劑A液50l，再加顯色劑B液50l，振蕩混勻，置3715分鐘。l結果判定酶標儀讀數：450nm波長630nm副波長讀數， ( 陰性對照 OD 小于 0.05 以 0.05 計算)結果判定: S/CO1 為 HAV-IgM 陽性， S/CO1，為陽性； S/CO值1，為陰性；競爭抑制法：若S/CO值1，為陰性。 HAV HBV 肝炎病毒- HCV HDV HEV 其他（HGV、TTV） （SEN、TLMV）甲型肝炎急性期血清標志物出現過程要點：1. HAV的傳播途徑(糞口)2. HAV的潛伏期(30天2周)3. 血清標志物出現的規(guī)律4. 免疫學檢測指標HAV Ag 抗HAV總抗體 抗HAV-IgM 臨床意義血清中抗HAVIgM出現于感染HAVIgM陽性,尤其是效價較高時,表明處于感染的早期,被公認為早期診斷甲肝的依據,是區(qū)別是急性感染還是慢性感染的有