1、 ICS 07.140CCS C06SF中華人民共和國司法行政行業標準SF/T 00982021大麻的法醫學STR遺傳標記分型檢驗要求Requirements for genotyping of forensic STR markers for Cannabis sativa L.2021-11-17發布2021-11-17實施 SF/T 00982021目次前言. II12345678范圍. 1規范性引用文件 . 1術語和定義 . 1縮略語 . 1總體要求 . 1檢驗程序 . 2鑒定意見 . 3鑒定文書 . 3參考文獻 . 4I SF/T 00982021前言本文件按照GB/T 1.1202

2、0標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則的規定起草。II SF/T 00982021大麻的法醫學STR遺傳標記分型檢驗要求1范圍本文件規定了大麻樣本進行STR遺傳標記分型的總體要求以及檢驗程序、鑒定意見和鑒定文書的要求。本文件適用于法醫學實驗室對大麻樣本進行個體識別。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。SF/T 00692020法醫物證鑒定實驗室管理規范SF/Z JD01050122018個體識別技術規范3術語和定義下列

3、術語和定義適用于本文件。短串聯重復序列 short tandem repeat，STR存在于基因組DNA中的一類具有長度多態性的DNA序列.注：由26個堿基的重復單位串聯構成。基因座 locus基因在染色體的特定位置。等位基因 allele同一基因座上存在DNA一級結構差異的基因。似然率 likelihood ratio，LR評估遺傳標記分型提供證據強度的指標。注：數值上似然率是兩個條件概率的比值，LR數值越大，越支持原告假設。45縮略語下列縮略語適用于本文件。DNAPCRRNA脫氧核糖核酸（Deoxyribonucleic Acid）聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reac

4、tion）核糖核酸（Ribonucleic Acid）總體要求1 SF/T 00982021鑒定人應具有法醫物證鑒定執業資格，熟悉并掌握基于毛細管電泳進行STR遺傳標記分型檢測的方法和原理，并能正確使用分析軟件對分型結果進行分析與評價。鑒定活動應包括檢驗、鑒定意見和鑒定文書撰寫等環節。鑒定活動完畢后，應將各個環節的記錄進行歸檔。其中：檢驗程序、鑒定意見和鑒定文書應符合第6章第8章的規定。實驗室以及樣本管理、設備管理和質量管理等應符合SF/T 00692020的規定。6檢驗程序采樣要求樣本的采集、包裝和保存要求如下：a)樣本可為大麻的葉片、花和果實等組織，也可為大麻植物干品和大麻樹脂等。有條件的

5、情況下，宜選擇新鮮的檢材；b)c)樣本應分別包裝，注明檢材的編號、采樣日期和采樣人等；樣本采集后應干燥保存。DNA提取和純化6.2.1樣本前處理在DNA提取前，宜根據樣本的狀態與形態采用適宜的方法（包括物理法、化學法和酶解法等）破壞細胞壁。例如：大麻新鮮組織宜經液氮速凍進行研磨粉碎；陳舊組織在研磨過程中，可加入石英砂進行共研，更充分地破壞細胞壁；若樣本為大麻樹脂，宜先采用無水乙醚進行脫脂處理。6.2.2 DNA提取經6.2.1處理后的樣本宜采用CTAB法、SDS法、高鹽低PH法和堿裂解法等方法進行大麻基因組DNA的提取。也可采用相關商業化植物DNA提取試劑盒進行基因組DNA的提取。6.2.3

6、DNA純化宜采用相關商業化試劑盒進行基因組DNA的純化，以去除蛋白質、RNA、酚類物質及多糖等成分。DNA定量宜采用分光光度計對 DNA樣品進行定量并檢測其純度，所測得的 OD260/OD280比值應在 1.82.0范圍內。若OD260/OD280比值低于1.8，表明提取的DNA中含有蛋白質或糖類等雜質，應做進一步的分離純化；若OD260/OD280比值高于2.0，表明提取的DNA可能有RNA污染。PCR擴增與PCR產物分型6.4.1基因座應選用多態性STR基因座進行PCR擴增，基因座選擇應符合以下條件：a)b)c)d)已有基因座定義和其特征的文獻報道；已實施種屬特異性、靈敏性和穩定性研究；已

7、有可供使用并公開發表的遺傳學數據，例如：等位基因頻率；基因座選用三核苷酸重復（例如：B05 CANN1、ANUCS 305、D02 CANN1、B01 CANN1、nH09、ANUCS 302、E07 CANN1、C11 CANN1、H06 CANN2、ANUCS 301、ANUCS 303、ANUCS 304、ANUCS306和B02 CANN2等）、四核苷酸重復（例如：1528、9043、3735、9269、4910和5159等）、五核苷酸重復（例如：ANUCS 501）或六核苷酸重復（例如：CS1）等；包含大麻性別判斷的特異性片段（例如：DM016、DM029和DM011等）。e)6.4

8、.2 PCR擴增2 SF/T 00982021對6.4.1中選用基因座進行PCR擴增要求如下：a)應選用商品化試劑盒或自行構建并已完成法醫學驗證的檢測體系進行 PCR擴增。檢測體系的累積個體識別能力不應小于0.9999，計算按照SF/Z JD01050122018中第6章的方法執行；每批擴增均應設置陽性對照樣本和不含大麻基因組 DNA的陰性對照樣本，其中陽性對照樣本是已知濃度和基因型的對照品DNA或以前檢驗過的、已知正確基因型的樣本；b)c) PCR擴增體系與PCR擴增參數應按相關操作說明進行。6.4.3 PCR產物分型與結果判讀應使用遺傳分析儀對PCR擴增產物進行毛細管電泳。按照操作手冊使用

9、相關軟件進行結果判讀。7鑒定意見應根據性別判斷的特異性片段分型結果，對大麻樣本的性別作出判斷。應根據DNA分型結果，對樣本是否來自同一株大麻作出判斷。具體如下：a)若兩份大麻樣本的DNA分型結果不一致，鑒定意見可表述為“排除兩份樣本來自同一株大麻”；若兩份大麻樣本的DNA分型結果一致，應按照SF/Z JD01050122018中第7章的方法計算LR值，鑒定意見可表述為“LR值為XXX，不排除兩者來源于同一株大麻”。b)8鑒定文書鑒定人應根據檢驗結果和鑒定意見撰寫鑒定文書。鑒定文書的格式應按照主管部門頒布的相關規定執行。3 SF/T 00982021參考文獻1 Michele Di Nunzio

10、, Madeline Roman, Rachel Houston, et al. European validation of aCannabis sativa 13-locus STR multiplex kit for genetic identification: A preliminary studyJ. Forensic Sci Int Genet, 2019, 7(1): 224-226.2 de Oliveira Pereira Ribeiro L, Avila E, Mariot R F, et al. Evaluation of two 13-lociSTR multiple

11、x system regarding identification and origin discrimination of BrazilianCannabis sativa samples J. Int J Legal Med, 2020, 134:1603-1612.3 Valverde L, Lischka C, Erlemann S, et al. Nomenclature proposal and SNPSTR haplotypesfor 7 new Cannabis sativa L. STR loci J. Forensic Sci Int Genet, 2014, 13:185-6.4 Valverde L, Lischka C, Scheiper S, et al. Characterization of 15 STR cannabis loci:nomenclature proposal and SNPSTR haplotypes J. Forensic Sci Int Genet, 2014, 9:61-5.5 Knight G, Hansen S, Connor M, et al. The results of an exp