1、學號：071040128 本科(bnk)畢業(yè)論文 題 目: 不同(b tn)生長期異堇葉碎米薺葉 揮發(fā)性成分(chng fn)及硒含量分析 姓 名： 牟 迪 班 級： 0710401 專 業(yè)： 生物工程 指導教師： 周毅峰 副教授 中國恩施二O一四年五月ID:071040128BACHELORS THESIS OF HUBEI UNIVERSITY FOR NATIONALTIES Analyse the volatile components and selenium contents of Cardamine violifolia at different growth periods N

2、ame: Di MouGrade: 0710401Profession: Biological engineeringTutor: Coprof.Yi-feng ZhouEnshi ChinaMay, 2014學術(xush)聲明堅持(jinch)以“求實、創(chuàng)新”的科研(k yn)精神從事研究工作。本論文中除引文外，數據和有關材料均是真實的。其他同志對本研究所做的貢獻已在論文中做了聲明并表示了謝意。本聲明的法律后果由本人承擔。 作者簽名：年 月 日導 師 審 核 聲 明本人鄭重聲明：該生上交的學士學位論文，是在本人的指導下獨立進行研究所取得的成果。其內容均經本人審核，同意作為該生的學位論文提交

3、。 導師簽名： 年 月 日不同(b tn)生長期異堇葉碎米薺葉揮發(fā)性成分及硒含量分析牟 迪（湖北民族(mnz)學院生物科學與技術學院，湖北恩施，445000）摘 要：為了探尋異堇葉碎米(su m)薺葉片不同生長期揮發(fā)性成分和硒含量，主要通過頂空固相微萃取氣相色譜-質譜聯(lián)用儀（SPME-GC/MS）測定揮發(fā)性成分，通過石墨消解儀將葉片消解后，用雙道原子熒光光度計測定出硒含量。結果表明：1）異堇葉碎米薺葉片揮發(fā)性物質主要為異硫氰酸芐酯、2,2,4,6,6-五甲基庚烷、苯乙腈，其相對含量在各個時期中較高；2）異硫氰酸芐酯在不同時期異堇葉碎米薺葉片中相對含量較高，在幼苗期高達82.22%；3）隨著異堇

4、葉碎米薺的生長葉片硒含量呈顯著性增加，到開花期時，達到最高，隨后變化不顯著，幼苗期硒含量最低為339.00mgKg-1，花期硒含量最高為1103.55 mgKg-1。關鍵詞: 異堇葉碎米薺；揮發(fā)性成分；硒Analyse the volatile components and selenium contents of Cardamine violifolia at different growth periodsDi Mou (College of Biological Scientific and technical,Hubei Minzu University , Hubei Enshi,

5、445000，)Abstract:In order to explore the volatile components and selenium content of Cardamine violifolia at different growth periods, we measure the volatile components by using SPME-GC-MS and determine the selenium contents by digesting with Graphite digestion apparatus and detecting with double c

6、hannel atomic fluorescence spectrometer. It turn out that：1)the main volatile substances which relative contents are higher in every periods of Cardamine violifolia are Benzyl mustard oil、2,2,4,6,6-Pentamethylheptane and Benzyl cyanide;2)Benzyl mustard oil is the highest substance in Cardamine violi

7、folia at different growth periods, which reach to the maximum of 82.22% at seeding stage;3)As the Cardamine violifolia grows older,the more selenium contents are accumulated，and the content come to the highest at flowering stage, but the change is not significant afterwards. At the seeding stage ,se

8、lenium contents are in a minimum of 339.00mgKg-1 ,while the selenium contents are the highest during flowering stage of 1103.55 mgKg-1.Key words: Cardamine violifolia；volatile substances；seleniumTOC o 1-4 h u 目錄(ml) HYPERLINK l _Toc168 1 文獻(wnxin)綜述 1 文獻(wnxin)綜述1.1 硒的性質(xngzh)及藥用價值1.1.1硒的性質(xngzh)硒

9、（Selenium）是一種化學元素，符號為Se，與氧、硫同族，屬于第四周期VI A族，是一種非金屬元素，其性質與硫接近。瑞典化學家J.J.Berzelius在1817年發(fā)現(xiàn)硒1。硒主要以有機硒和無機硒這兩種方式存在。無機硒一般主要指亞硒酸鹽和硒酸鹽這兩種物質，這兩種物質主要是從硒礦床中獲得。湖北恩施是天然富硒區(qū)，其土壤中無機硒含量較高，同時有著硒礦床。有機硒是生物對無機硒進行代謝轉化產生，然后存在于生物體內。 人體內缺少合成有機硒的功能，必須從攝取的食物中獲得2。由于硒是人體必不可少的元素，對人體有重要作用，保持人體內硒含量的穩(wěn)定十分重要，而食物中有著豐富的有機硒，人體可以通過直接食用補充體內

10、缺少的硒。在一般情況下，每個人只需要保持每天均衡飲食，就可以滿足人體對于硒的要求，保證人體內硒含量處于正常的水平。人體內硒含量較低時，會使許多組織器官受到損害，導致疾病的發(fā)生，如：食道癌、冠心病3等。因此，對于體內硒含量偏低的人群，必須通過外部因素進行補充有機硒來保持人體內硒含量處于正常的水平，從而保證人體能夠進行正常的新陳代謝，維持人體正常的生理機能。1.1.2硒的藥用價值1.1.2.1抗癌硒在癌癥基因調控中屬于調控因子，對于癌癥基因表達有著重要的意義。細胞有絲分裂時，硒對蛋白質和DNA的合成產生抑制，有效延長有絲分裂間期，為DNA修復創(chuàng)造條件4。從而一定程度上減少細胞癌變的幾率，對機體有著

11、抗癌的效果。流行病學研究表明，在很多硒含量較低，甚至缺硒的地區(qū)，其居住的人群癌癥的發(fā)病率和死亡率均高于硒含量較高地區(qū)的人群，死于癌癥的人群體內的血硒水平較低。通過對缺硒人群進行補硒發(fā)現(xiàn)，硒能夠降低癌癥的發(fā)病率和死亡率，增強人體的免疫能力4。因此，對于缺硒的人群來說，通過外部條件補充體內硒含量，使得體內硒含量處于正常水平，對身體健康有著重要的影響。1.1.2.2抗氧化硒是抗氧化酶系的組分(zfn)，能夠通過改變抗氧化酶，讓機體(jt)抗氧化。同時可以(ky)對自由基進行直接清除，發(fā)揮抗自由基損傷的作用5。自由基具有很強的氧化性，是屬于一種在機體發(fā)生氧化反應的過程中產生的有害化合物，這種有害化合物

12、可以損傷對機體具有重要作用的生物大分子如核酸、蛋白質等，使得生物體的部分遺傳信息遭到破壞，從而導致遺傳信息表達時，蛋白質在合成的過程中發(fā)生錯誤，造成異常物質的在細胞內積累而使細胞老化。因此，硒在發(fā)揮抗自由基損傷作用時，機體內細胞的老化變緩，使得細胞代謝在較長時間都處于高效率階段，從而可以起到抗衰老的作用。 1.1.2.3解毒作用硒與硫同主族，其性質二者之間相似，都是屬于帶負電荷的非金屬離子。在機體內能夠和帶正電荷的有害金屬離子發(fā)生結合，生成金屬硒蛋白質復合物6。通過這種方式，這樣就可以將含金屬離子的復合物從體內排出，緩解了有害金屬對人體造成的傷害，保持人體正常的新陳代謝，起到解毒作用。特別是對

13、于一些汞、鉛、鎘等重金屬有著重要的作用，如鎘會導致人體腎損傷、高血壓、貧血等癥狀，硒在人體內能使得鎘在器官組織和細胞中再分配，同時硒使鎘從低分子量的關鍵蛋白質結合轉為較高分子量的代謝關系不大的蛋白質結合，生成的物質使得鎘的濃度降低，從而降低鎘對人體的傷害。1.1.2.4硒的其他作用硒還具有提高人體免疫力7。對于動脈硬化、白內障等疾病的治療和預防有著很好的效果。目前硒的研究正被越來越多的人所重視，硒對身體的作用的更深層次的研究有著巨大的作用。1.2 植物富硒1.2.1植物富硒能力的劃分植物按照富硒能力的劃分方法主要有兩種：一種方法是分為聚硒植物和非聚硒植物，聚硒植物體內硒含量較高，能夠作為硒指示

14、植物，如黃芪屬植物，地上部分硒含量每千克可達幾百甚至幾千微克8-9；非聚硒植物硒含量較低，大部分農作物屬于非聚硒植物，體內硒含量不超過30mgKg-110。另一種方法是將植物分為累積植物、中度含硒植物與低度含硒植物11。其中累積植物的體內硒含量最高，其體內硒含量每千克能夠達到幾千毫克12。累計植物對于硒的耐受能力最強，一般生長在高硒土壤環(huán)境中；中度含硒植物體內硒含量次之；低度含硒植物體內硒含量最低，對于硒的耐受能力也最弱，當土壤中硒含量較高時，會導致植物死亡。1.2.2植物(zhw)對硒的吸收和代謝硒主要是通過(tnggu)植物根部上的硫轉運蛋白進入植物體內，從而(cng r)進行相關的代謝。

15、硒與硫對于細胞膜上的硫轉運蛋白產生競爭作用13。二者均依靠硫轉運蛋白轉運，進入到細胞中，而不同種類的硫轉運蛋白在硒酸鹽吸收的過程中有著不同的作用。硒酸鹽以同向協(xié)同運輸方式進行轉運進入細胞，每吸收3個質子的同時吸收一個硒酸鹽14。植物主要吸收硒酸鹽和亞硒酸鹽，這兩種鹽在植物體內的代謝機理不同，見下圖1.115-17。硒酸鹽在硫轉運蛋白的作用下進入葉綠體中，然后在ATP硫酸化酶（ATPS）的作用下產生5-磷酸硒腺苷（APSe）。而亞硒酸鹽在亞硫酸還原酶（SiR）的作用下進一步還原成Se2-。Se2-在半胱氨酸合成酶的作用下生成硒代半胱氨酸（SeCys）。一部分硒代半胱氨酸是在硒代半胱氨酸甲基轉移酶

16、（SMT）的作用下，生成甲基硒代半胱氨酸，進而產生甲基硒代半胱氨酸硒氧化物；然后在半胱氨酸亞砜裂解酶的作用下生成膠太硒甲烷，最后生成二甲基二硒化物（DMDSe）。另一部分硒代半胱氨酸是胱硫醚-合成酶對硒代半胱氨酸產生催化，生成硒代胱硫醚，而胱硫醚-裂解酶對硒代胱硫醚作用，生成硒代高半胱氨酸，然后進一步生成硒代蛋氨酸。其中一部分硒代蛋氨酸進入細胞質，在蛋氨酸甲基轉移酶作用下產生硒甲基蛋氨酸，在高半胱氨酸甲基轉移酶（BHMT）作用下生成硒代高半胱氨酸；而硒甲基蛋氨酸通過甲基蛋氨酸水解酶生成二甲基硒化物。對于不耐(b nai)硒植物來說，當植物吸收(xshu)硒以后，硒經過有毒的硒代半胱氨酸在半胱氨

17、酸脫硫酶作用下形成單質硒，而單質硒就會和鐵硫蔟中的硫發(fā)生競爭(jngzhng)而形成鐵硒簇，而鐵硒簇沒有鐵硫蔟穩(wěn)定，可以參與到蛋白質的形成，從而可以形成硒蛋白，但是由于硒的加入使蛋白質的折疊發(fā)生了改變，進而影響蛋白質的功能，從而導致對植物的毒害。硒化合物有著促氧化的作用，當硒通過硫轉運蛋白進入植物細胞后，會形成硒代谷胱甘肽，由于谷胱甘肽是植物體內一種主要的抗氧化物質，所以造成植物體內谷胱甘肽的含量減少，使得活性氧的積累增加。造成植物體內的氧壓力增加，最終導致毒害作用18。這些原因導致了不耐硒植物在富硒土壤中難以生存，但是一些植物能夠通過將吸收的硒代謝生成二甲基二硒化物和二甲基硒化物排出體外，從

18、而降低體內硒含量，起到植物解毒的功能，使得植物有一定的耐硒能力。在富硒植物中，硒酸鹽在進入植物體內后經代謝產生的甲基硒代半胱氨酸無法進入蛋白質中，只能獨自存在于細胞質中。所以硒能夠在植物組織中不斷積累，從而使得植物體內硒含量達到較高的水平19。這個代謝過程一定程度的解釋了植物對硒的耐受，使得硒含量在植物體內增加。圖1.1植物硒代謝(dixi)途徑Fig1.1Selenium metabolic fate in plants1.3異堇葉碎米(su m)薺的性質1.3.1異堇葉碎米(su m)薺特征 異堇葉碎米薺，也名壺瓶碎米薺20。它是一種十字花科（Brassicaceae）碎米薺屬（Carda

19、mine Linn）的一年生草本植物，能夠高度耐硒，其體內硒含量高，屬于聚硒植物。異堇葉碎米薺的葉片形狀呈圓心形或腎狀心形，葉片邊緣有齒狀；頂生小葉面積較大，有較長的小葉柄19。異堇葉碎米薺的生長時期主要分為幼苗期、抽苔期、開花期、結莢期這四個時期，在這四個時期中，其葉片在形狀上大致相同，面積大小差異較大。花瓣呈白色，沒有明顯的花柱。異堇葉碎米薺可當做野菜食用，也可以入藥，能夠清熱解濕。用于尿道炎，膀胱炎，痢疾，白帶；外用治疔瘡，具有十分重要的藥用價值。下圖1.2為種植的異堇葉碎米薺。圖1.2種植(zhngzh)的異堇葉碎米薺Fig 1.2 plant of Cardamine violifo

20、lia1.3.2異堇葉碎米(su m)薺的地理分布異堇葉碎米(su m)薺生長溫度一般為1025。當溫度比10低時，異堇葉碎米薺的生長就會受到影響，發(fā)育變得緩慢；當高于25，其品質會下降，溫度過高甚至死亡20。因此異堇葉碎米薺對于溫度要求較高，生活在低溫環(huán)境中。但是異堇葉碎米薺在各種光照強度下均能生存，對于光照要求不嚴格。異堇葉碎米薺在適宜溫度下，偏好弱光。同時異堇葉碎米薺一般生活在pH值偏堿性的土壤中，由于有很強的耐硒能力，因此一般生活在富硒土壤環(huán)境中。主要分布在湖北省的西部、安徽省的九華山以及浙江的柴橋等地21。湖北恩施雙河地帶土壤具有高濃度的硒環(huán)境，海拔1400多米，在其地區(qū)上生長的異堇

21、葉碎米薺主要分布在含硒量較高的土壤中，其土壤疏松，空氣中水分含量較高，特別是在硒礦旁的小水溝邊生長極其旺盛。1.3.3異堇葉碎米薺的研究現(xiàn)狀由于碎米薺有著很強的耐硒能力，其體內有著很高的硒含量，具有很高的價值，目前國內對于碎米薺的研究有很多。盧金清等22對華中碎米薺揮發(fā)性物質通過氣相色譜-質聯(lián)用進行了測定，分析出華中碎米薺中各種化學成分以及相對百分含量。丁莉等23對堇葉碎米薺營養(yǎng)成分進行了分析，發(fā)現(xiàn)維生素C、纖維素、硒這三種物質的質量分數為49.327mg/100g、10.037%、26.408gg-1，含量均比同類蔬菜高。一定程度證實了碎米薺中硒含量較高，而且擁有很好的食用價值，對于富硒產品

22、的開發(fā)有著一定的參考價值。彭誠等24對堇葉碎米薺不同時期營養(yǎng)成分與含硒量的關系進行了研究，表明含硒量和可溶性蛋白、可溶性糖含量變化趨勢基本一致，在苔期達到最高。說明了硒含量和可溶性蛋白、可溶性糖三者之間可能存在一定的聯(lián)系，這個猜想需要進一步的研究。牟敏等25對恩施堇葉碎米薺通過采用環(huán)已烷萃取有機硒，將無機硒與總硒同時測定，通過恩施雙河漁塘壩溪溝邊、石煤渣堆和坡地上生長的三種恩施堇葉碎米薺進行測定，表明堇葉碎米薺有機硒含量最低92%以上，生長在溪溝邊的堇葉碎米薺總硒和有機硒含量最高；雷紅靈等26對恩施碎米薺葉片的抗氧化酶活性進行了研究，通過不同硒濃度研究，得出恩施碎米薺的葉片抗氧化酶活力的最適硒

23、質量濃度是3060mgL-1。證實了恩施碎米薺的高度耐硒能力，為研究恩施碎米薺提供了一定的參考價值。向天勇等27通過不同濃度的外加硒對恩施碎米薺生長發(fā)育進行了研究，發(fā)現(xiàn)了恩施碎米薺對硒的耐受能力隨著成熟度的增加而提高。還有很多關于碎米薺的研究，但總的來說這些研究都為碎米薺與硒的關系提供了很好的研究價值，建立了一定的研究體系。1.5選題(xun t)意義硒作為一種人體必需的營養(yǎng)元素，在我們的生活(shnghu)中對于疾病的預防和治療有著重要(zhngyo)的作用，通過對植物中硒含量的研究，進而研究植物中硒的代謝途徑，了解植物體內硒的代謝機理，通過一定技術手段，從而提高植物內硒含量，對于有機硒的應

24、用有著重要的意義。我國大部分地區(qū)屬于低硒、缺硒地帶，人們在平時生活飲食中的硒攝入量不足，嚴重影響著我國人口的身體健康，對于缺硒人群進行補硒迫在眉睫。因此生產富硒產品，進而提高缺硒人群體內的硒含量顯得十分重要。而異堇葉碎米薺在富硒土壤中生存，對于硒有著強耐受能力，其體內硒濃度很高，屬于聚硒植物，研究其體內硒代謝途徑，對于開發(fā)富硒產品，從而提高人體的硒含量，保持人體內正常的硒含量水平，對于疾病的預防和治療有著重要的指導意義。通過測定異堇葉碎米薺不同時期葉片的揮發(fā)性成分以及硒含量，尋找揮發(fā)性物質中是否存在硒化合物，為研究硒在異堇葉碎米薺中的代謝機理奠定了一定的基礎，為開發(fā)新的富硒產品提供了一定的參考

25、價值。2材料(cilio)與方法2.1材料(cilio)供實驗用的異堇葉碎米(su m)薺來自于2012年湖北恩施雙河的種子，通過取自湖北恩施雙河的硒礦渣培育獲得的不同生長時期異堇葉碎米薺。2.2藥品優(yōu)級純：硝酸；鹽酸分析純：無水氯化鈣；硼氫化鉀；氫氧化鉀10gmL-1硒標準溶液2.3設備 分析天平（ME204E/02，瑞士梅特勒-托利多有限公司）；石墨消解儀（SH220，濟南海能儀器有限公司）；數顯鼓風干燥箱（GZX-9420MBE，上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠）；氣相色譜-質譜聯(lián)用儀（Agilent6890N/5975C，美國安捷倫公司）；萃取頭（DBV/CAR/PDMS 50/30m，

26、美國Supelco公司）；雙道原子熒光光度計（AFS-9760，北京海光儀器公司）2.4異堇葉碎米薺葉片的揮發(fā)性物質測定2.4.1樣品準備取處于幼苗期、抽苔期、開花期、結莢期的異堇葉碎米薺葉片，按照葉片大小的不同，取樣的數量不同。一般表面積較大的葉片取1片，表面積較小的葉片取2-3片，輕輕去掉葉片上面的雜質，用濾紙擦干葉片表面的水分。2.4.2 SPME-GC-MS測定揮發(fā)性物質取樣：稱取2g無水氯化鈣（用于干燥）放入潔凈干燥的50mL試劑瓶中，剪取一張與50mL試劑瓶瓶底大小一致的濾紙放入瓶中，完全蓋住無水氯化鈣。將擦拭干凈的葉片放入瓶中的濾紙上，用8層封口膜對試劑瓶瓶口進行密封，并用2根橡

27、皮筋將瓶口的封口膜扎緊。萃取(cuq)：放入設置(shzh)為60的數顯鼓風干燥箱中，保持30min，然后將裝有樣品的試劑瓶取出冷卻至室溫，迅速插入已在進樣口（250）老化30min的萃取頭，用手柄推出纖維(xinwi)頭，在常溫下萃取30min。進樣：將已經萃取好的纖維頭推回，將萃取頭迅速插入氣相色譜-質譜聯(lián)用儀的進樣口，推出纖維頭，解吸3min，進行測定。色譜條件：HP-5MS石英毛細管柱（0.25m0.25mm30m),載氣為氦氣，流速為1mLmin-1，進樣口溫度為250，不分流進樣。程序升溫條件（40保持2min，再以5min-1升溫至130，保持1min；再以15min-1升溫至2

28、80，保持2min）。質譜條件：離子源EI源，電子能量70eV，離子溫度230，四級桿溫度150，倍增管電壓1.2kV，掃描質量范圍m/z35550。2.5異堇葉碎米薺葉片硒含量測定2.5.1標準曲線繪制分別量取10mL濃度為1、2、4、8、10、20gL-1的硒標準溶液在原子熒光光度計上測定硒含量，以B道濃度為橫坐標，以B道熒光值為縱坐標作圖，得到圖2.1。得出線性回歸方程y=182.126x-76.886。相關系數為R2=0.9993，說明1-20gL-1之間線性關系良好。圖2.1硒含量測定標準曲線Fig2.1 The standard curve of selenium contents

29、2.5.2樣品消解將彎嘴漏斗(ludu)、消解管、25mL容量瓶、10mL離心管、燒杯(shobi)、50mL量筒(lingtng)、玻璃棒放入酸缸（里面為20%HNO3）中浸泡一夜，然后取出清洗，經UP水潤洗后，放入設置為60的數顯鼓風干燥箱中干燥備用。 取處于不同時期異堇葉碎米薺的葉片，首先用自來水沖洗干凈后，然后用UP水潤洗，再放入經UP水潤洗后的潔凈干燥燒杯中，最后將燒杯放入設置為60的數顯鼓風干燥箱中將葉片烘干（約8小時），再用經UP水潤洗后的干燥潔凈的研缽將干燥的葉片磨碎，裝入2mL離心管中備用。 用分析天平分別稱取50mg樣品并記錄，加入消解管，同時增加一組不加入樣品的空白對照。

30、向消解管中加入5mL濃硝酸，蓋上彎嘴漏斗，放入設置溫度為160的石墨消解儀中，直至消解管中液體透明、無顆粒物質。將消解管上的彎嘴漏斗取開，繼續(xù)消解，直至消解管中液體體積剩余2mL左右，從石墨消解儀上取下消解管，將消解管及其液體冷卻至室溫。向冷卻的消解管中加入2mL濃度為6molL-1鹽酸溶液，輕輕震蕩均勻，放入石墨消解儀中在160條件下保持6min，再從石墨消解儀上取下消解管，并冷卻至室溫。最后將消解管中的液體轉入對應編號的25mL容量瓶中，用5%鹽酸定容，震蕩均勻。2.5.3樣品硒含量測定分別量取10L定容后的液體，轉入對應編號的事先準備的10mL離心管中，用10%鹽酸定容至10mL，通過雙

31、道原子熒光光度計進行測定。標準系列：10%鹽酸；載流：10%鹽酸；還原劑：1%硼氫化鈉+0.5%氫氧化鈉儀器條件：總燈電流：80mA；輔陰極燈電流：40mA；光電倍增管負高壓：280V；原子化器高度：8mm；載氣流量：300mLmin-1；屏蔽器流量：800mLmin-12.6數據分析 本實驗中的數據主要是通過OrginPro8.0和SPSS V19.0這兩種軟件進行分析，然后得出相應的結論。3結果(ji gu)與分析3.1不同時期異堇葉碎米薺葉片(ypin)揮發(fā)性成分分析(fnx)對于處于不同時期異堇葉碎米薺的葉片按照上述方法進行測定后，對總離子流圖譜中的各峰經質譜掃描后得質譜圖，經NIST

32、08.L質譜數據庫進行檢索，并結合有關文獻，確定了異堇葉碎米薺葉片中揮發(fā)性成分的化學組成，其結果見下圖。圖3.1幼苗期異堇葉碎米薺葉片揮發(fā)性成分總離子流Fig 3.1Total ion in seedling stage of Cardamine violifolia leaf volatile components圖3.2抽苔(chu ti)期異堇葉碎米薺葉片揮發(fā)性成分總離子流Fig3.2Total ion in bolting stage of Cardamine violifolia leaf volatile components analysis圖3.3開花期異堇葉碎米(su m)薺

33、葉片揮發(fā)性成分總離子流Fig3.3Total ion in blossom period of Cardamine violifolia leaf volatile components analysis圖3.4結莢期異堇葉碎米薺葉片(ypin)揮發(fā)性成分總離子流Fig3.4Total ion in fruiting period of Cardamine violifolia leaf volatile components analysis將四個時期異堇葉碎米(su m)薺葉片的揮發(fā)性成分(chng fn)總離子流圖譜進行疊加后，得到下圖3.5。圖3.5不同時期異堇葉碎米薺葉片揮發(fā)性成分總

34、離子流疊加圖Fig3.5Total ion in different period of Cardamine violifolia leaf volatile components flow superposition graph 將不同時期(shq)異堇葉碎米薺葉片(ypin)揮發(fā)性成分總離子流圖譜進行(jnxng)分析后，得出成分分析表，見下表3.1。 表3.1不同時期異堇葉碎米薺葉揮發(fā)性物質Table3.1 Analysis of different growth period of Cardamine violifolia leaf volatile components 序號名稱R.

35、T.生長期（相對面積%）幼苗期抽苔期開花期結莢期1二氧化碳1.387-9.03-2三氯甲烷2.3871.39-3.14-31-戊烯-3-醇3.067-7.0813.0911.144順-2-戊烯-1-醇4.703-6.318.811.4453-己烯醛5.377-4.2-6異硫氰酸異丙酯6.292-4.47-7反式-2-己烯醛6.912-1.898順-3-己烯醇6.982-10.269.49異硫氰酸丁酯9.228-3.8-10異硫氰酸異丁酯9.982-1.916.81-11苯甲醛10.309-3.465.38-122,2,4,6,6-五甲基庚烷11.11.6816.312.157.7313苯乙腈1

36、5.8717.225.71-14異硫氰酸芐酯22.28482.2238.4611.1943.02實驗結果表明，處于不同時期的異堇葉碎米薺的葉片，其揮發(fā)性成分有較大的差異，其中異硫氰酸芐酯在各個時期相對(xingdu)含量較高，在幼苗期、抽苔(chu ti)期、結莢期均達到最高，在幼苗(yumio)期高達82.22%；2,2,4,6,6五甲基庚烷在四個時期中相對含量也較大，在抽苔期相對其他物質相對含量達到最大，達到12.15%。苯乙腈隨著植株的生長，揮發(fā)性成分相對含量降低，在開花期時檢測不到，在幼苗期最高，為7.22%。其中1-戊烯-3-醇在幼苗期以后相對含量較高，在開花期相對含量達到13.09

37、%。順-2-戊烯-1-醇隨著異堇葉碎米薺的生長，從抽苔期開始，其相對含量增加，在結莢期時達到最大，為11.44%在幼苗期，異堇葉碎米薺的揮發(fā)性成分相對含量高的種類較少，一共為4種；處于開花期的葉片揮發(fā)性成分相對含量較高的較多，達到12種。總的來說，異堇葉碎米薺隨著生長，其葉片的揮發(fā)性成分種類增多，在開花期時，揮發(fā)性物質相對含量高于1%的種類數目達到最高，在結莢期開始下降。3.2不同時期異堇葉碎米薺葉片硒含量分析為了解不同時期異堇葉碎米薺葉片硒含量變化，通過雙道原子熒光光度計進行測定，其結果見圖3.6。結果表明異堇葉碎米薺葉片在開花期硒含量最高，達到1103.55mgKg-1，和幼苗期、抽苔期葉

38、片硒含量都有極顯著差異，和結莢期葉片硒含量無顯著性差異，其硒含量超過幼苗期硒含量的3倍；幼苗期葉片硒含量最低，為339mgKg-1，和抽苔期葉片硒含量無顯著性差異，和開花期、結莢期葉片硒含量有著極顯著差異。異堇葉碎米薺在發(fā)育的過程中，葉片硒含量呈現(xiàn)增加的趨勢，在開花期葉片硒含量達到最高，進入結莢期硒含量降低。圖3.6不同時期(shq)異堇葉碎米薺硒含量 Fig3.6 Cardamine violifolia in different periods of selenium content（注：大寫字母均表示(biosh)極顯著性差異（P0.01），小寫字母(zm)均表示顯著性差異 （P0.05

39、）。）4小結與討論本實驗通過對不同時期異堇葉碎米薺葉片揮發(fā)性成分及硒含量分析，得出異堇葉碎米薺處于開花期這個階段時，揮發(fā)性物質相對含量較高的種類最多有12種，而且硒含量在此時也達到最高為1103.55mgKg-1。在幼苗期的時候，葉片揮發(fā)性物質相對含量較高的種類最少，為4種，同時硒含量也最低，為339mgKg-1。在結莢期時，二者均下降，可以猜測異堇葉碎米薺葉片揮發(fā)性成分相對含量較多的種類數目和硒含量存在一定的關系，需要進一步實驗進行論證。本實驗為以后研究異堇葉碎米薺，開發(fā)富硒產品，提供了一定的基礎。在實驗中，由于取的葉片除去水分不徹底，導致在揮發(fā)性成分測定(cdng)中有較多的水分，加入無水

40、氯化鈣后，或許(hux)對于結果也有一定(ydng)的影響。因此，在取樣的時間上進行控制，盡量選取晴天，或許會減少水分。當然這只是猜想，天晴中，或許溫度、光照等會對葉片揮發(fā)性成分產生一定的影響，需要進一步的研究。同時，由于葉片在采摘過程中，存在一定程度損傷，葉片會發(fā)生一定的應激反應，或許會導致?lián)]發(fā)性成分的改變，這個也需要進一步的研究。在測定葉片硒含量過程中，由于相同種類的植株，在不同環(huán)境中生長，其葉片含硒量存在一定的不同，因此本實驗結果是否能夠代表不同時期異堇葉碎米薺葉片硒含量，需要進一步通過實驗進行驗證。參考文獻1郭宇.恩施地區(qū)硒的地球化學研究及富硒作物栽培實驗研究D.湖北武漢：中國地質大學

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