1、細胞工程大題精做十四精選大題例：（2018全國卷III)2018年細胞期刊報道，中國科學家率先成功地應用體細胞對非人靈長類動物進行克隆，獲得兩只克隆猴“中中”和“華華”。回答下列問題：（1）“中中”和“華華”的獲得涉及核移植過程，核移植是指_ 。通過核移植方法獲得的克隆猴，與核供體相比，克隆猴體細胞的染色體數目_（填“減半”“加倍”或“不變”）（2）哺乳動物的核移植可以分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植，胚胎細胞核移植獲得克隆動物的難度_（填“大于”或“小于”）體細胞核移植，其原因是_ 。（3）在哺乳動物核移植的過程中，若分別以雌性個體和雄性個體的體細胞作為核供體，通常，所得到的兩個克隆動物體細

2、胞的常染色體數目_（填“相同”或“不相同”），性染色體組合_（填“相同”或“不相同”）。【答案】（1）將動物的一個細胞核，移入一個已去掉細胞核的卵母細胞 不變 （2）小于 胚胎細胞分化程度低，恢復全能性相對容易 （3）相同 不同【解析】（1）核移植是指將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發育成一個新的胚胎，這個胚胎最后發育成為動物個體；通過核移植方法獲得的克隆猴的細胞核來自供體，因此克隆猴體細胞的染色體數目和供體一致；（2）胚胎細胞核移植的難度小于體細胞核移植，其原因是動物胚胎細胞分化程度低，恢復其全能性相對容易；（3）哺乳動物雌性個體和雄性個體的體細胞染色

3、體常染色體相同，性染色體前者是XX，后者是XY，因此分別以雌性個體和雄性個體的體細胞作為核供體，通常所得到的兩個克隆動物體細胞的常染色體數目相同，性染色體組合不同。模擬精做1（2019屆寧夏吳忠市高三上學期期末考試（一輪聯考)）Rag2基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞。科研人員利用胚胎干細胞(ES細胞)對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療。其技術流程如圖：(1)Rag2基因表達的場所最可能在_(填寫器官)(2)步驟中，重組胚胎培養到_期時，可從_分離出ES細胞。(3)步驟中，需要構建含有基因Rag2的表達載體。可以利用_擴增Rag2基因片段。用 HindIII和PstI限制酶分別在片段兩側進行

4、酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有_和_的酶切位點。(4)為檢測Rag2基因的表達情況，可提取治療后小鼠骨髓細胞的_，用_進行雜交實驗。【答案】（1）骨髓或胸腺 （2）囊胚 內細胞團 （3）pcr 技術 Hind Pst （4）蛋白質 Rag2蛋白的抗體 【解析】（1）Rag2基因表達的場所最可能在骨髓或胸腺。（2）內細胞團位于囊胚中，所以步驟中，重組胚胎培養到囊胚期時，可從其內細胞團分離出ES細胞。（3）步驟中，利用pcr技術擴增Rag2基因片段。基因工程中構建基因表達載體時，應用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，若用HindI

5、II和PstI限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag2基因片段，則為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有Hind和Pst酶的酶切位點。（4）為檢測Rag2基因的表達情況，可采用抗原-抗體雜交法，即提取治療后的小鼠骨髓細胞的蛋白質（抗原），用抗Rag2蛋白的抗體進行雜交實驗。2（2019屆甘肅省隴南市隴南第一中學高三第二學期模擬考試）利用現代生物工程技術可以改變傳統育種方式，培育出新品種。如圖表示綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的具體培育過程。請回答下列問題：(1)上述過程涉及的現代生物工程技術中屬于分子水平的技術是_。(2)圖中B過程常用_法將綠色熒光蛋白基因導入到成纖維細胞中。(3)

6、C過程要獲得單個的成纖維細胞進行培養，需用_處理豬胚胎的部分組織；E過程中若要獲得大量的卵母細胞需用_激素處理成年母豬；在進行H過程之前，需要對代孕母豬進行_處理。(4)G過程中，當胚胎發育到囊胚時期時，聚集在胚胎一端，個體較大的細胞是_，將來可發育成胎兒各種組織；滋養層細胞_(填“能”或“不能”)用于性別鑒定，該處細胞將來會發育成_。【答案】（1）基因工程 （2）顯微注射 （3）胰蛋白酶(或膠原蛋白酶) 促性腺 同期發情 （4）內細胞團 能 胎膜和胎盤 【解析】（1）由圖分析可知，該綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的形成涉及了多項生物工程技術，首先導入目的基因的豬的成纖維細胞，要經過動物細胞培養篩選

7、出轉基因體細胞，然后該細胞與成年母豬的卵細胞進行細胞核移植獲得重組細胞，重組細胞經過早期胚胎培養到桑椹胚或囊胚階段，最后經過胚胎移植技術將早期胚胎移植到代孕母豬子宮內，最后生下綠色熒光蛋白轉基因克隆豬，綜上分析，該過程涉及到的生物工程技術有基因工程、核移植、動物細胞培養、胚胎移植等，其中基因工程技術屬于分子水平。（2）將目的基因導入動物細胞常用顯微注射技術，故圖中B過程常用顯微注射法將綠色熒光蛋白基因導入到成纖維細胞中。（3）動物細胞培養前，要先用胰蛋白酶處理組織，使組織中的細胞分散開來，以獲得單個細胞。用促性腺激素處理母豬可使其超數產卵，以便獲得大量的卵母細胞。H為胚胎移植，在進行H過程之前

8、，需要對代孕母豬進行同期發情處理，以便為供體的胚胎植入受體提供相同的生理環境。（4）囊胚時期可發育成胎兒各種組織，個體較大的細胞是內細胞團細胞，而滋養層細胞可以用于性別鑒定，該處細胞將來會發育成胎膜和胎盤。3（2019屆西藏自治區拉薩中學高三第五次月考）已知細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。將這兩種細胞在培養皿中混合，加促融劑促進細胞融合，獲得雜種細胞，并生產單克隆抗體。請回答下列有關問題：（1）生產單克隆抗體時，一般不直接利用B淋巴細胞，主要原因是_ 。（2）過程

9、中，常用的與植物細胞融合相同的誘導劑是_。（3）過程為_培養，培養液中還需通入氣體物質，其中通入CO2的目的是_。（4）表示雜交瘤細胞的擴大培養，其既可在體外培養，也可注射到小鼠_內培養，體內培養與體外培養相比，其優點是_ 。（5）為了從培養液中分離出雜交瘤細胞，需要過程向培養液中加入_，理由是雜交瘤細胞可利用_途徑合成DNA，從而才能在該培養液中增殖。【答案】（1）B淋巴細胞不能無限增殖 （2）聚乙二醇 （3）細胞 維持培養液的pH （4）腹腔 無需再提供營養物質以及無菌環境，操作簡便 （5）氨基嘌呤 淋巴細胞中的S 【解析】（1）生產單克隆抗體時，一般不直接利用B淋巴細胞，主要原因是B淋巴

10、細胞屬于高度分化的細胞，不能無限增殖。（2）植物細胞常采用電刺激、聚乙二醇等手段進行融合，而動物細胞采用電刺激、聚乙二醇、仙臺病毒等手段進行融合。因此，過程中常用的與植物細胞融合相同的誘導劑是聚乙二醇。（3）過程為細胞培養，培養液中還需通入氣體物質，其中通入氧氣維持細胞呼吸，通入CO2維持培養液的pH。（4）雜交瘤細胞既可在體外培養，也可注射到小鼠腹腔內培養。體內培養與體外培養相比，其優點是無需再提供營養物質以及無菌環境，操作簡便。（5）人淋巴細胞、鼠骨髓瘤細胞在培養皿中混合，加聚乙二醇促進細胞融合，培養液中的細胞有以下5種：人淋巴細胞、鼠骨髓瘤細胞、人淋巴細胞與人淋巴細胞融合細胞、鼠骨髓瘤細

11、胞與鼠骨髓瘤細胞融合細胞以及雜交瘤細胞。其中，人淋巴細胞、人淋巴細胞與人淋巴細胞融合細胞不能無限繁殖，不久會衰老、死亡。向培養液中加入氨基嘌呤，氨基嘌呤可阻斷D途徑，只有D途徑的鼠骨髓瘤細胞、鼠骨髓瘤細胞與鼠骨髓瘤細胞融合細胞無法增殖，而雜交瘤細胞可利用S途徑合成DNA，繼續繁殖，從而分離出雜交瘤細胞。4（2019屆吉林省長春外國語學校高三上學期期末考試）科研工作者欲根據如圖所示的流程圖生產治療H7N9型禽流感的抗體，請據圖回答相關問題：(1)給小鼠注射的抗原是_，將過程獲得的B細胞直接和骨髓瘤細胞融合，將獲得_(填“一種”或“多種”)雜交細胞，這些細胞需在具有_作用的特定培養基上培養。(2)

12、過程代表將經選擇性培養的雜交瘤細胞，在進行_和_后，獲得足夠數量的能夠產生所需抗體的細胞。(3)過程代表將雜交瘤細胞在_(填“體內”或“體外”)條件下大規模培養，提取大量的單克隆抗體，單克隆抗體最主要的優點是_。(4)單克隆抗體的主要用途有_。【答案】（1）減毒或滅活的H7N9型禽流感病毒 多種 篩選 （2）克隆化培養 抗體檢測 （3）體外 特異性強、靈敏度高、可大量制備 （4）作為診斷試劑；用于治療疾病和運載藥物 【解析】（1）該實驗的目的是制備治療H7N9型禽流感的抗體，因此給小鼠注射的抗原是減毒或滅活的H7N9型禽流感病毒；直接將程獲得的B細胞直接和骨髓瘤細胞融合，將獲得多種雜交細胞，因

13、此需要將這些細胞放在具有篩選作用的特定培養基上培養。（2）過程代表將經選擇性培養的雜交瘤細胞，在進行克隆化培養和抗體檢測后，獲得足夠數量的能夠產生所需抗體的細胞。（3）單克隆抗體具有特異性強、靈敏度高、可大量制備等優點。（4）單克隆抗體的主要用途有作為診斷試劑、用于治療疾病和運載藥物等。答案與解析模擬精做1. 【答案】（1）骨髓或胸腺 （2）囊胚 內細胞團 （3）pcr 技術 Hind Pst （4）蛋白質 Rag2蛋白的抗體 【解析】（1）Rag2基因表達的場所最可能在骨髓或胸腺。（2）內細胞團位于囊胚中，所以步驟中，重組胚胎培養到囊胚期時，可從其內細胞團分離出ES細胞。（3）步驟中，利用p

14、cr技術擴增Rag2基因片段。基因工程中構建基因表達載體時，應用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，若用HindIII和PstI限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag2基因片段，則為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有Hind和Pst酶的酶切位點。（4）為檢測Rag2基因的表達情況，可采用抗原-抗體雜交法，即提取治療后的小鼠骨髓細胞的蛋白質（抗原），用抗Rag2蛋白的抗體進行雜交實驗。2. 【答案】（1）基因工程 （2）顯微注射 （3）胰蛋白酶(或膠原蛋白酶) 促性腺 同期發情 （4）內細胞團 能 胎膜和胎盤 【解析】（1）由圖分析可知，該綠色熒光蛋白轉基因克隆

15、豬的形成涉及了多項生物工程技術，首先導入目的基因的豬的成纖維細胞，要經過動物細胞培養篩選出轉基因體細胞，然后該細胞與成年母豬的卵細胞進行細胞核移植獲得重組細胞，重組細胞經過早期胚胎培養到桑椹胚或囊胚階段，最后經過胚胎移植技術將早期胚胎移植到代孕母豬子宮內，最后生下綠色熒光蛋白轉基因克隆豬，綜上分析，該過程涉及到的生物工程技術有基因工程、核移植、動物細胞培養、胚胎移植等，其中基因工程技術屬于分子水平。（2）將目的基因導入動物細胞常用顯微注射技術，故圖中B過程常用顯微注射法將綠色熒光蛋白基因導入到成纖維細胞中。（3）動物細胞培養前，要先用胰蛋白酶處理組織，使組織中的細胞分散開來，以獲得單個細胞。用

16、促性腺激素處理母豬可使其超數產卵，以便獲得大量的卵母細胞。H為胚胎移植，在進行H過程之前，需要對代孕母豬進行同期發情處理，以便為供體的胚胎植入受體提供相同的生理環境。（4）囊胚時期可發育成胎兒各種組織，個體較大的細胞是內細胞團細胞，而滋養層細胞可以用于性別鑒定，該處細胞將來會發育成胎膜和胎盤。3. 【答案】（1）B淋巴細胞不能無限增殖 （2）聚乙二醇 （3）細胞 維持培養液的pH （4）腹腔 無需再提供營養物質以及無菌環境，操作簡便 （5）氨基嘌呤 淋巴細胞中的S 【解析】（1）生產單克隆抗體時，一般不直接利用B淋巴細胞，主要原因是B淋巴細胞屬于高度分化的細胞，不能無限增殖。（2）植物細胞常采

17、用電刺激、聚乙二醇等手段進行融合，而動物細胞采用電刺激、聚乙二醇、仙臺病毒等手段進行融合。因此，過程中常用的與植物細胞融合相同的誘導劑是聚乙二醇。（3）過程為細胞培養，培養液中還需通入氣體物質，其中通入氧氣維持細胞呼吸，通入CO2維持培養液的pH。（4）雜交瘤細胞既可在體外培養，也可注射到小鼠腹腔內培養。體內培養與體外培養相比，其優點是無需再提供營養物質以及無菌環境，操作簡便。（5）人淋巴細胞、鼠骨髓瘤細胞在培養皿中混合，加聚乙二醇促進細胞融合，培養液中的細胞有以下5種：人淋巴細胞、鼠骨髓瘤細胞、人淋巴細胞與人淋巴細胞融合細胞、鼠骨髓瘤細胞與鼠骨髓瘤細胞融合細胞以及雜交瘤細胞。其中，人淋巴細胞、人淋巴細胞與人淋巴細胞融合細胞不能無限繁殖，不久會衰老、死亡。向培養液中加入氨基嘌呤，氨基嘌呤可阻斷D途徑，只有D途徑的鼠骨髓瘤細胞、鼠骨髓瘤細胞與鼠骨髓瘤細胞融合細胞無法增殖，而雜交瘤細胞可利用S途徑合成DNA，繼續繁殖，從而分離出雜交瘤細胞。4. 【答案】（1）減毒或滅活的H7N9型禽流感病毒 多種 篩選 （2）克隆化培養 抗體檢測 （