1、土壤中分解尿素的細菌的分離與計數班級 姓名 1能夠測定樣品活菌數的方法是（ ）A稀釋涂布平板法 B直接計數法 C重量法 D平板劃線法2下列能選擇出分解尿素的細菌的培養基是AKH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂、水BKH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、瓊脂、水CKH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、瓊脂、水DKH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、水3分離土壤中分解尿素的細菌的實驗操作中，對于獲得純化的尿素分解菌的單菌落，影響最大的是A制備浸出液

2、的土壤取自土壤的表層B涂布前涂布器未在酒精燈外焰上灼燒滅菌C牛肉膏蛋白胨培養基中添加尿素作為氮源D接種操作者的雙手未用酒精棉進行消毒4下列有關微生物培養的敘述，不正確的是 ( )A測定土壤樣品中的細菌數目，常用稀釋涂布平板法進行菌落計數B在對微生物進行培養前，需要對微生物和培養基進行滅菌C酵母菌發酵過程產生的酒精，對其他微生物生長有一定的抑制作用D分離能分解尿素的細菌，要以尿素作為培養基中唯一的氮源5下列關于分解尿素的細菌，說法正確的是（ ）A以尿素作為唯一碳源B能分解尿素的原因是能合成并分泌蛋白酶C環境中含有大量的尿素誘導該細菌產生了分解尿素的特性D以尿素為唯一氮源且添加了酸堿緩沖劑的培養基

3、來培養該細菌后不會使酚紅指示劑變紅6關于生物技術實踐中的有關檢驗，不正確的是（ ）A在果酒制作實驗結束時要檢驗是否有酒精產生，正確的操作步驟是先在試管中加入適量的發酵液，然后再加入硫酸和重鉻酸鉀的混合液B在微生物培養中，檢驗培養基是否被污染的方法是用一組不接種或接種無菌水的培養基與接種培養物的培養基一起培養C檢驗以尿素為唯一氮源的培養是否分離出了分解尿素的細菌，方法是在培養基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，則說明分離成功D檢驗胡蘿卜素純度的方法是紙層析法，原理是不同的色素分子在層析液中的溶解度不同，故隨層析液在濾紙上擴散的速度不同，若樣品中有雜質，則會出現不同的色素點（帶）7請選出下列正確的操

4、作步驟（ ）土壤取樣稱取10g土壤取出加入盛有90ml無菌水的錐形瓶中吸取0.1ml進行平板涂布依次稀釋至101、102、103、104、105、106、107稀釋度8尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制選擇培養基時（ ）A葡萄糖在培養基中越多越好B尿素分解菌有固氮能力，故培養基中只需無機氮C尿素在培養基中越少越好D尿素分解菌無固氮能力，故培養基中的尿素為化合態氮9下列就“土壤中分解尿素的細菌的分離與計數”實驗的有關敘述，不正確的是A.經高壓蒸汽滅菌的培養基所倒平板和接種后培養時的平板均要倒置B.同一稀釋度下至少要涂布三個平板并且要培養到菌落數穩定時計數C.在稀釋度足夠高時，所形成的單個菌落中所

5、有細胞的遺傳信息必定相同D.在相同培養條件下，未接種的培養基表面無菌落生長說明培養基沒有被雜菌污染10在以尿素作為唯一氮源的培養基上大部分微生物無法生長；在培養基中加入青霉素可以抑制細菌和放線菌；在培養基中加入10%酚可以抑制細菌和霉菌。利用上述選擇培養基依次能從混雜的微生物群體中分離出( )A乳酸菌、金黃色葡萄球菌、放線菌B分解尿素的細菌、大腸桿菌、放線菌C分解尿素的細菌、霉菌、放線菌D固氮細菌、金黃色葡萄球菌、放線菌11下圖為“土壤中分解尿素的細菌的分離和計數”實驗中樣品稀釋示意圖。據圖分析正確的是A3號試管中的菌落稀釋倍數為103倍B4號中稀釋液進行平板培養得到的菌落平均數恰為5號的10

6、倍C5號試管的結果表明每克土壤中的菌株數為1.7×109個D該實驗方法統計得到的結果往往會比實際活菌數目要高123456789101112有些科學家欲從污染的土壤中分離篩選出能夠高效降解原油的菌株進行大規模培養并應用。請回答：（1）在篩選過程中，應將土壤樣品稀釋液接種于以 為唯一碳源的固體培養基上，從功能上講，該培養基屬于 培養基。篩選過程中，雖然土壤中微生物含量非常豐富，但在此培養基上長出的微生物菌落非常少，甚至有時一個培養皿中一個菌落都沒有，這是因為 。（2）純化菌種時，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即 。（3）通常情況下，在微生物培養過程中實驗室常用的滅菌方法有 。1

7、3在農業用地中發現一種廣泛使用的除草劑（含氮有機化合物）在土壤中不易降解，長期使用可污染土壤。為修復被該除草劑污染的土壤，可按下面程序選育能降解該除草劑的細菌（已知該除草劑在水中溶解度一定，該除草劑的培養基不透明）。（1）制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行_ 處理。（2）要從_ 的土壤中分離目的菌，上述培養皿中培養基的特點是：_體培養基且以_ 。若需要調節培養基pH，應該在各種成分都溶化后且分裝_（填“前”或“后”）進行。對培養基進行滅菌，常采用的方法是_。（3）若對活菌進行計數，常用的接種方法為_。（4）培養后發現，只有很少菌落出現，大部分細菌在此培養基上不能生長的主要原因

8、是_或有氧條件抑制了這些細菌的生長。（5） 為了計數微生物的數量，一位同學在4個平板培養基上分別接種稀釋倍數為106的土壤樣液01mL，培養后菌落數分別為155、160、176、149個，則每毫升原土壤樣液中上述微生物數量為_。14（10分）每生物興趣小組為了探究土壤中的微生物對尿素是否有分解作用，設計了以下實驗，并成功篩選到能高效降解尿素的細菌（目的菌）。培養基成分如下表所示，實驗步驟如下圖所示。請分析回答問題：KH2PO414 gNa2HPO421 gMgSO4·7H2O02 g葡萄糖1 g尿素10 g瓊脂15 g將上述物質溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL（1）簡述土壤中可

9、分解尿素的細菌的鑒定方法及原理：在以尿素為唯一氮源的培養基中加入_指示劑，細菌合成的_將尿素分解為_，pH升高，使指示劑變為紅色。（2）培養基中加入尿素的目的是篩選目的菌， 這種培養基屬于_培養基。（3）“目的菌”生長所需的氮源和碳源分別來自培養基中的_和_，實驗中需要振蕩培養，原因是_。（4）下圖是利用_法進行微生物接種，把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面。通常還可以_方法分離到一個細胞繁殖形成的菌落（5）關于上圖的操作方法和結果，敘述正確的是_。A操作時要將接種環放在火焰上灼燒滅菌B劃線操作須在火焰旁進行C多次劃線后培養才可以分離到一個細胞繁殖形成的菌落D在1、2、3、4、5區域中劃線

10、前后都要對接種環滅菌16（10分）：有2位同學用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品的細菌數。在對應稀釋倍數為106的培養基中，得到以下兩種統計結果：甲同學在該濃度下涂布了一個平板，統計的菌落數為230；乙同學在該濃度下涂布了3個平板，統計的菌落數分別為21、212、256，并且取平均值163作為統計結果。請評價這兩位同學的實驗結果的合理性。（1）甲同學_，原因是_。（2）乙同學_，原因是_。（3）正確做法是_。（4）稀釋涂布平板法所用培養基按物理性質劃分屬于_培養基；（5）倒平板前保證培養基無菌的常用方法是_。試卷第5頁，總5頁本卷由系統自動生成，請仔細校對后使用，答案僅供參考。參考答案AACBD

11、ACDCC B12（1）原油 選擇 大部分微生物無法分解原油（2）平板劃線法 稀釋涂布平板法（3）干熱滅菌法 高壓蒸汽滅菌法 灼燒滅菌13（1）稀釋（2）富含（或長期使用）該除草劑 固 除草劑為唯一氮源 前 高壓蒸汽滅菌（3）稀釋涂布平板法（4）培養基中缺少這些細菌可利用的氮源（5）16×10914（10分）（1）酚紅 脲酶 氨（2）選擇（3）尿素 葡萄糖 為目的菌提供氧氣（4）平板劃線 聚集的菌種逐步稀釋分散到固體培養基 稀釋涂布平板法 （5）ABCD參考答案1A【解析】利用稀釋涂布平板法能夠不影響生活的情況下將細菌個體從固體培養基上分離出來，并可以繁殖形成菌落，可根據菌落數測定出

12、測定樣品活菌數，故稀釋涂布平板法可用于測定樣品活菌數。答案是A?！究键c定位】測定某種微生物的數量【名師點睛】知識拓展：統計細菌數量的方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數，在統計菌落數目時，采用（平板劃線、稀釋涂布平板法）來培養細菌。當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個細菌，但菌落數往往比活菌的試劑數目低，為了保證結果準確，一般選擇菌落數在30-300的平板進行計數。另一種方法是直接計數法，這種方法要借助顯微鏡，且統計的數目也包括死亡的細菌。2A【解析】能合成脲酶的細菌才能分解尿素,選擇的原則是只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長。該選擇培養基應只含尿素一種氮

13、源并能讓該類細菌生長,需有碳源。分離微生物要用固體培養基;分解尿素的細菌屬于異養微生物,需要加葡萄糖作為碳源。B無氮源、C無碳源,D中牛肉膏、蛋白胨可作為氮源。答案是A。【考點定位】微生物的分離和培養3C【解析】試題分析：土壤的表層含有細菌較少，但仍含有分解尿素的細菌，經過培養可以得到尿素分解菌，A錯誤；未灼燒滅菌的涂布器雖含有雜菌，但在以尿素為唯一氮源的培養基上不能生存，B錯誤；分離土壤中分解尿素的細菌應以尿素為唯一氮源，牛肉膏蛋白胨培養基中含有氮，實驗不能得到分解尿素細菌的單菌落，C正確；未用酒精棉進行消毒的雙手，可能將雜菌帶入培養基，但雜菌在以尿素為唯一氮源的培養基上不能生存，D錯誤。考

14、點：本題考查微生物培養和利用的相關知識，意在考查考生能理解相關實驗的原理和方法，把握材料和試劑的選擇，熟練完成相關實驗的能力。4B【解析】試題分析:對微生物進行滅菌就等于是直接殺死了微生物，也就沒有培養的必要了?？键c：本題考查微生物培養方面的相關知識，屬于識記類考題，難度不大。5D【解析】試題分析：由于只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源，缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發育繁殖，所以分離分解尿素的細菌時以尿素作為唯一氮源，A項錯誤；分解尿素的細菌能分解尿素的原因是能合成并分泌脲酶，B項錯誤；該細菌產生脲酶是受基因控制的，而不是環境中的尿素誘導的，C項錯誤；細

15、菌合成的脲酶將尿素分解成的氨會使培養基的堿性增強，pH升高，所以在以尿素為唯一氮源的培養基中加入酚紅指示劑，培養該細菌后會使酚紅指示劑變紅，但如果培養基中添加了酸堿緩沖劑，則不會使酚紅指示劑變紅，D項正確。考點：本題考查分解尿素的細菌的分離的相關知識，意在考查考生理解所學知識的要點，把握知識間的內在聯系的能力。6A【解析】試題分析：先加硫酸形成酸性環境，再加重鉻酸鉀溶液檢測酒精，A錯。如果培養基污染，則不接種或接種無菌水的培養基會生成菌落，否則沒有，B正確。細菌分解尿素生成氨，培養基PH上升，酚紅指示劑變紅，C正確。檢驗胡蘿卜素純度的方法是紙層析法，色素在層析液溶解度不同，擴散速度不同而分離開

16、來，與標準樣品比較，若樣品中有雜質，則分離后會出現不同的色素點（帶），D正確。考點：本題考查生物技術實踐中的有關檢驗相關知識，意在考查考生能理解所學知識的要點，把握知識間的內在聯系，形成知識的網絡結構能力。7C【解析】試題分析：土壤取樣溶解梯度稀釋涂布平板，故C正確?？键c：稀釋涂布平板法是微生物實驗室分離的重要方法，考生需要識記相關操作過程，做到心中有數。8D【解析】試題分析：尿素既可以作為尿素分解菌的氮源，也可以作為其碳源，葡萄糖在培養基中并不是越多越好，A錯誤；尿素分解菌沒有固氮能力，故培養基中需要添加尿素作為氮源，B錯誤；添加尿素的目的是篩選尿素分解菌，其他微生物不能很好得生活在該培養基

17、上，尿素在培養基中不是越少越好，過少就失去選擇作用，過多又會使細胞失水死亡，C錯誤；尿素分解菌無固氮能力，故培養基中的尿素為化合態氮，D正確?？键c：本題主要考查尿素分解菌的篩選，意在強化學生對選擇培養基的作用的相關知識的時間、理解與運用。9C【解析】試題分析：“土壤中分解尿素的細菌的分離與計數”實驗中，經高壓蒸汽滅菌的培養基所倒平板和接種后培養時的平板均要倒置，以防止雜菌污染，A正確；同一稀釋度下至少要涂布三個平板并且要培養到菌落數穩定時計數，并求其平均數，B正確；細菌進行二分裂增殖，不能保證遺傳物質平均分配，在稀釋度足夠高時，所形成的單個菌落中所有細胞的遺傳信息不一定相同，C錯誤；在相同培養

18、條件下，未接種的培養基表面無菌落生長說明培養基沒有被雜菌污染，D正確?？键c：本題考查“土壤中分解尿素的細菌的分離與計數”實驗，意在考查考生能獨立完成“知識內容及要求”所列的生物實驗，包括實驗目的、原理、方法和操作步驟，掌握相關的操作技能，并能將這些實驗涉及的方法和技能進行綜合運用的能力。10C【解析】試題分析：乳酸菌屬于異養厭氧微生物，不能在缺氮培養基上生存；金黃色葡萄球菌屬于細菌，不能在添加青霉素的選擇培養基上生存，A錯誤；在缺乏氮源的選擇培養基上可以篩選分離固氮微生物，大腸桿菌不能在添加青霉素的選擇培養基上生存，B錯誤；在缺乏氮源的選擇培養基上可以篩選分離固氮微生物，在添加青霉素的選擇培養

19、基上可以篩選分離真菌（如霉菌），加入10%的酚可以抑制細菌和霉菌的生長可以篩選分離放線菌，C正確；在缺乏氮源的選擇培養基上可以篩選分離固氮微生物，金黃色葡萄球菌屬于細菌，不能在添加青霉素的選擇培養基上生存，D錯誤?？键c：本題主要考查微生物的相關知識，意在考查考生對所學知識的理解，把握知識間的內在聯系的能力。11B【解析】試題分析：3號試管是稀釋104倍，A錯誤；4號中稀釋液進行平板培養，稀釋倍數比5號的低10倍，如果稀釋倍數適當，得到的菌落平均數可能是5號的10倍，B正確；5號試管進行稀釋涂布平板法計數的結果表明每克土壤中的菌株數為（168+175+167）÷3×105&#

20、215;10=1.7×108個，C錯誤；稀釋涂布平板得到的菌落可能存在兩個或多個細菌細胞長成一個菌落，使該實驗方法統計得到的結果往往會比實際活菌數目要低，D錯誤?？键c：本題主要考查稀釋涂布平板法的相關知識，意在考查考生對所學知識的理解，把握知識間內在聯系的能力。12（1）原油 選擇 大部分微生物無法分解原油（2）平板劃線法 稀釋涂布平板法（3）干熱滅菌法 高壓蒸汽滅菌法 灼燒滅菌?！窘馕觥浚?）篩選能高效降解原油的菌種，其培養基應以原油為唯一碳源，該培養基屬于選擇培養基。只有能夠分解原油的微生物才能在該培養基中生長，由于大部分微生物無法分解原油，所以在此培養基上長出的微生物菌落非常少

21、，甚至有時一個培養皿中一個菌落都沒有。（2）純化菌種常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。（3）實驗室常用的滅菌方法是干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法和【考點定位】微生物的培養和分離。13（1）稀釋（2）富含（或長期使用）該除草劑 固 除草劑為唯一氮源 前 高壓蒸汽滅菌（3）稀釋涂布平板法（4）培養基中缺少這些細菌可利用的氮源（5）16×109【解析】試題分析：（1）制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行稀釋處理。（2）要從富含（或長期使用）該除草劑的土壤中分離目的菌；利用該培養基的目的是篩選能降解除草劑的細菌，因此需要使用選擇培養基，該培養基的特點是：固體培養基且以除草劑

22、為唯一氮源；若需要調節培養基pH，應該在各種成分都溶化后且分裝前進行，以保證各種pH相同；培養基一般采用高壓蒸汽滅菌。（3）若對活菌進行計數，常用的接種方法為稀釋涂布平板法。（4）培養后發現，只有很少菌落出現，大部分細菌在此培養基上不能生長的主要原因是培養基中缺少這些細菌可利用的氮源或有氧條件抑制了這些細菌的生長。（5）在4個平板培養基上分別接種稀釋倍數為106的土壤樣液01mL，培養后菌落數分別為155、160、176、149個，則每毫升原土壤樣液中上述微生物數量為（155160176149）÷4÷01×10616×109個。考點：本題考查選育能降解除

23、草劑的細菌的相關知識，意在考查考生運用所學知識與觀點，通過比較、分析與綜合等方法對某些生物學問題進行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結論的能力。14（10分）（1）酚紅 脲酶 氨（2）選擇（3）尿素 葡萄糖 為目的菌提供氧氣（4）平板劃線 稀釋涂布平板法 （5）ABCD【解析】（1）鑒定土壤中可分解尿素的細菌的方法及原理是：在以尿素為唯一氮源的培養基中加入酚紅指示劑，細菌合成的脲酶將尿素分解為氨，氨可使培養基的堿性增強（pH升高），使酚紅指示劑變紅。（2）培養基中加入尿素的目的是篩選能高效降解尿素的目的菌，這種培養基屬于選擇培養基。（3）培養基中的尿素和葡萄糖，可分別為“目的菌”的生長提

24、供氮源和碳源。振蕩培養的目的是為目的菌提供氧氣。（4）依圖示信息可推知，該圖是利用平板劃線法進行微生物接種，把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面。欲分離到一個細胞繁殖形成的菌落，還可以采用稀釋涂布平板法對微生物進行接種。（5）在實驗過程中，為了防止接種環上可能存在的微生物污染培養物，每次劃線操作須在火焰旁進行，而且操作時要將接種環放在火焰上灼燒滅菌；平板劃線法，需通過數次劃線培養，才可分離到由一個細胞繁殖形成的菌落，因此A、B、C、D四項均正確。【考點定位】微生物的培養和分離【名師點睛】正確解答本題的關鍵是：熟記并理解相關的生物學基礎知識，形成知識網絡。15（1）光合 生產者、消費者或分解者

25、 （2）分層 群落的結構更復雜，抵抗力穩定性更高（3）隨機 多個樣方實測數據的平均值 （4）次生林 此階段微生物呼吸作用強，有機碳被快速分解（5）高 成熟【解析】試題分析：（1）碳循環是組成生物體的碳元素在無機環境和生物群落之間不斷循環的過程，有機碳主要通過植物的光合作用將無機碳固定下來。土壤微生物在生態系統的成分中，可屬于生產者、消費者或分解者。（2）草叢群落在垂直方向上具有分層現象。與草叢相比，灌叢的群落結構更復雜，抵抗力穩定性更高，所以灌叢抵御環境變化的能力更強。（3）對不同植被類型土壤的相關指標進行測定時，為盡量減小實驗誤差，取樣時應該隨機選取多個樣方，然后將多個樣方實測數據的平均值記錄