1、原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)( (補(bǔ)充內(nèi)容）補(bǔ)充內(nèi)容）非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 與與RNARNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)聚合酶結(jié)合位點(diǎn)啟動(dòng)子啟動(dòng)子不編碼蛋白質(zhì)。不編碼蛋白質(zhì)。：編碼蛋白質(zhì)：編碼蛋白質(zhì) , ,連續(xù)不間斷連續(xù)不間斷編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)原核原核細(xì)胞細(xì)胞的的 基因基因結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)調(diào)控遺傳信息表達(dá)調(diào)控遺傳信息表達(dá), ,上上 游有啟動(dòng)子，下游有終止子游有啟動(dòng)子，下游有終止子真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)（補(bǔ)充內(nèi)容）真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)（補(bǔ)充內(nèi)容）編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與與RNARNA聚合酶聚合酶結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)含子內(nèi)

2、含子 外顯子外顯子 啟動(dòng)子啟動(dòng)子終止子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 真核真核細(xì)胞細(xì)胞的的 基因基因結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列：有調(diào)控作用有調(diào)控作用, ,上游有啟動(dòng)子，下上游有啟動(dòng)子，下游有終止子游有終止子非編碼序列：非編碼序列： 包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子原核細(xì)胞原核細(xì)胞真核細(xì)胞真核細(xì)胞不同點(diǎn)不同點(diǎn)編碼區(qū)是編碼區(qū)是_的的編碼區(qū)是間隔的、編碼區(qū)是間隔的、_的的相同點(diǎn)相同點(diǎn)都由能夠編碼蛋白質(zhì)的都由能夠編碼蛋白質(zhì)的_和具和具有調(diào)控作用的有調(diào)控作用的_

3、區(qū)組成的區(qū)組成的原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較連續(xù)連續(xù)不連續(xù)不連續(xù)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼非編碼基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1 1、目的基因的獲取、目的基因的獲取2 2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3 3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4 4、目的基因的檢測與鑒定、目的基因的檢測與鑒定一、目的基因的獲取一、目的基因的獲取1 1、目的基因主要是指、目的基因主要是指_編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因2 2、獲取目的基因的常用方法、獲取目的基因的常用方法（1 1）從基因文庫中獲取）從基因文庫中獲取（2 2）利用）利用PCR

4、PCR技術(shù)擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增（3 3）人工合成）人工合成例如：蘇云金桿菌抗蟲基因、人胰島素基因、人干擾素基因、例如：蘇云金桿菌抗蟲基因、人胰島素基因、人干擾素基因、植物抗病基因等植物抗病基因等1、從基因文庫中獲取目的基因、從基因文庫中獲取目的基因 將含有某種生將含有某種生物不同基因的許多物不同基因的許多DNADNA片斷，導(dǎo)入到片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，受體菌的群體中，各個(gè)受體菌分別含各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同有這種生物的不同基因，稱為基因文基因，稱為基因文庫。庫。基因文庫基因文庫 基因組文庫基因組文庫部分基因文庫部分基因文庫(CDNA文庫文庫)基因文庫基因文庫 基因組文庫基因組文庫部分基因文

5、庫部分基因文庫(CDNA文庫文庫)某生物體內(nèi)全部某生物體內(nèi)全部DNA DNA 許多許多DNADNA片段片段受體菌群體受體菌群體基因組文庫的構(gòu)建基因組文庫的構(gòu)建限制酶限制酶與運(yùn)載體連接與運(yùn)載體連接 導(dǎo)入導(dǎo)入基因組文庫基因組文庫某種生物某個(gè)時(shí)期的某種生物某個(gè)時(shí)期的mRNAmRNAcDNAcDNA反轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄受體菌群體受體菌群體與運(yùn)載體連接與運(yùn)載體連接 導(dǎo)入導(dǎo)入部分基因文庫部分基因文庫（cDNA文庫）文庫）cDNA文庫的構(gòu)建文庫的構(gòu)建基因組文庫和部分基因文庫比較基因組文庫和部分基因文庫比較（3）如何從基因文庫中得到所需要的基因？如何從基因文庫中得到所需要的基因？依據(jù)：目的基因的有關(guān)信息。依據(jù)：目的基

6、因的有關(guān)信息。如：根據(jù)基因的核苷酸序列如：根據(jù)基因的核苷酸序列 基因的功能基因的功能 基因在染色體上的位置基因在染色體上的位置 基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA 基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì) 等特性。等特性。（2 2）利用）利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因PCR多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 是一項(xiàng)生物體外復(fù)制特定是一項(xiàng)生物體外復(fù)制特定DNA片片段的核酸合成技術(shù)。通過此技術(shù)使其段的核酸合成技術(shù)。通過此技術(shù)使其數(shù)量呈指數(shù)方式增加，可獲取大量的數(shù)量呈指數(shù)方式增加，可獲取大量的目的基因。目的基因。PCR技術(shù)技術(shù) 原理：原理： 前提：前提： 原料：原料： 方式方式DNA復(fù)制復(fù)

7、制一段已知目的基因的核苷酸序列一段已知目的基因的核苷酸序列：以：以_方式擴(kuò)增，方式擴(kuò)增， 即即_（n n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）指數(shù)指數(shù)2 2n n一段已知目的基因的核苷酸序列（一段已知目的基因的核苷酸序列（DNADNA模板模板）引物；引物；四種脫氧核苷酸；四種脫氧核苷酸；熱穩(wěn)定熱穩(wěn)定DNA聚合酶（聚合酶（Taq酶）酶） 過程：“變性、退火、延伸” 三步曲變性：加熱至加熱至9095雙鏈DNA解鏈成為單鏈DNA退火：冷卻至冷卻至5560部分引物與模板的單鏈DNA的特定互補(bǔ)部位相配對和結(jié)合延伸：加熱至加熱至7075以目的基因?yàn)槟０澹铣苫パa(bǔ)的新DNA鏈變性變性退火退火延伸延伸逆轉(zhuǎn)錄法逆

8、轉(zhuǎn)錄法目的基因的信使目的基因的信使RNARNA 雙鏈雙鏈DNADNA（目的基因（目的基因) )化學(xué)合成法化學(xué)合成法蛋白質(zhì)的氨基酸序列蛋白質(zhì)的氨基酸序列信使信使RNARNA序列序列基因的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因目的基因人工合成人工合成逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶3 3、人工合成目的基因、人工合成目的基因推測推測推測推測單鏈單鏈DNADNADNADNA聚合酶聚合酶1、下列獲取目的基因的方法中需要模板鏈的是、下列獲取目的基因的方法中需要模板鏈的是從基因文庫中獲取目的基因從基因文庫中獲取目的基因 利用利用PCR技術(shù)技術(shù)擴(kuò)增目的基因擴(kuò)增目的基因 反轉(zhuǎn)錄法反轉(zhuǎn)錄法 通過通過DNA合成儀利合成儀利用化學(xué)方法人

9、工合成用化學(xué)方法人工合成A B C DD3、目的基因主要是指、目的基因主要是指_的結(jié)構(gòu)基因。的結(jié)構(gòu)基因。獲得目的基因的常見方法有三種：（獲得目的基因的常見方法有三種：（1）從基因文庫中）從基因文庫中獲取目的基因，根據(jù)基因的獲取目的基因，根據(jù)基因的_序列，基因在序列，基因在_上的位置，基因的上的位置，基因的_產(chǎn)物產(chǎn)物mRNA，基，基因的因的_產(chǎn)物蛋白質(zhì)等獲取目的基因。（產(chǎn)物蛋白質(zhì)等獲取目的基因。（2）利用）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，該技術(shù)是一項(xiàng)在技術(shù)擴(kuò)增目的基因，該技術(shù)是一項(xiàng)在_完完成的核酸合成技術(shù)，前提條件是有一段已知目的基因的成的核酸合成技術(shù)，前提條件是有一段已知目的基因的_序列，以便于合

10、成序列，以便于合成_。（。（3）如果基）如果基因較小且核苷酸序列已知，可以通過因較小且核苷酸序列已知，可以通過_方方法。法。 編碼蛋白質(zhì)編碼蛋白質(zhì)核苷酸核苷酸染色體染色體轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄表達(dá)表達(dá)體外體外核苷酸核苷酸引物引物人工合成人工合成基因表達(dá)載體的作用：基因表達(dá)載體的作用：a、使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給子代、使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給子代b、同時(shí)使目的基因能表達(dá)和發(fā)揮作用、同時(shí)使目的基因能表達(dá)和發(fā)揮作用思考：思考：作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因就可作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？以完成任務(wù)嗎？為什么？二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建二、基因表達(dá)

11、載體的構(gòu)建核心核心不可以。因?yàn)槟康幕蛟诒磉_(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，不可以。因?yàn)槟康幕蛟诒磉_(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，還需要有其他控制元件，如啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。還需要有其他控制元件，如啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。必須構(gòu)建上述元件的主要理由是：必須構(gòu)建上述元件的主要理由是：（1） 生物之間進(jìn)行基因交流，只有使用受體生物自身基因生物之間進(jìn)行基因交流，只有使用受體生物自身基因的啟動(dòng)子才能比較有利于基因的表達(dá)；的啟動(dòng)子才能比較有利于基因的表達(dá)；（2） 通過通過cDNA文庫獲得的目的基因沒有啟動(dòng)子，只將編碼文庫獲得的目的基因沒有啟動(dòng)子，只將編碼序列導(dǎo)入受體生物中無法轉(zhuǎn)錄；序列導(dǎo)入受體生物中

12、無法轉(zhuǎn)錄；（3） 目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標(biāo)記；目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標(biāo)記；（4） 為了增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一些其為了增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，如增強(qiáng)子等；他調(diào)控元件，如增強(qiáng)子等；（5） 有時(shí)需要確定目的基因表達(dá)的產(chǎn)物存在于細(xì)胞的什么有時(shí)需要確定目的基因表達(dá)的產(chǎn)物存在于細(xì)胞的什么部位，往往要加上可以標(biāo)識存在部位的基因（或做成目的基部位，往往要加上可以標(biāo)識存在部位的基因（或做成目的基因與標(biāo)識基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基因等。因與標(biāo)識基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基因等。2 2、基因表達(dá)載體的組成：、基因表達(dá)載體的組成：

13、目的基因目的基因+ +啟動(dòng)子啟動(dòng)子+ +終止子終止子+ +標(biāo)記基因標(biāo)記基因它們各自它們各自的作用是的作用是什么什么?啟動(dòng)子：位于基因的首端的啟動(dòng)子：位于基因的首端的一段特殊的一段特殊的DNADNA片斷，它是片斷，它是RNARNA聚合酶識別和結(jié)合的部聚合酶識別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出錄出mRNAmRNA，最終獲得蛋白質(zhì)，最終獲得蛋白質(zhì)終止子：位于基因的尾端的終止子：位于基因的尾端的一段特殊的一段特殊的DNADNA片斷，能終片斷，能終止止mRNAmRNA的轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄標(biāo)記基因的作用是為了鑒別標(biāo)記基因的作用是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基受體細(xì)胞中是否含有目的基

14、因，從而將有目的基因的細(xì)因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來胞篩選出來（1 1）用一定的）用一定的_切切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切口，割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切口，露出露出_。（2 2）用）用_切斷目切斷目 的基因，使其產(chǎn)生的基因，使其產(chǎn)生_ _ _。（3 3）將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的）將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的_處，再加入適量處，再加入適量_，形成了一個(gè)重組，形成了一個(gè)重組 DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一種限制酶同一種限制酶的黏性末端的黏性末端切口切口DNADNA連接酶連接酶相同相同1.1.過程過程: :1、下列關(guān)于基因表達(dá)載體的敘述不正確的是、

15、下列關(guān)于基因表達(dá)載體的敘述不正確的是A啟動(dòng)子是與啟動(dòng)子是與RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，是起聚合酶識別和結(jié)合的部位，是起始密碼子始密碼子B啟動(dòng)子和終止子都是特殊結(jié)構(gòu)的啟動(dòng)子和終止子都是特殊結(jié)構(gòu)的DNA短片段，對短片段，對mRNA的轉(zhuǎn)錄起調(diào)控作用的轉(zhuǎn)錄起調(diào)控作用C標(biāo)記基因是為了鑒別受體細(xì)胞中是否有目的基因標(biāo)記基因是為了鑒別受體細(xì)胞中是否有目的基因從而便于篩選從而便于篩選D基因表達(dá)載體的構(gòu)建視受體細(xì)胞及導(dǎo)入方式不同基因表達(dá)載體的構(gòu)建視受體細(xì)胞及導(dǎo)入方式不同而有所差別而有所差別A2、目前轉(zhuǎn)基因工程可以、目前轉(zhuǎn)基因工程可以A. 打破地理隔離但不能突破生殖隔離打破地理隔離但不能突破生殖隔離B. 打破生殖

16、隔離但不能突破地理隔離打破生殖隔離但不能突破地理隔離C. 完全突破地理隔離和生殖隔離完全突破地理隔離和生殖隔離D. 部分突破地理隔離和生殖隔離部分突破地理隔離和生殖隔離 C( (三三) )將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化目的基因進(jìn)入目的基因進(jìn)入_內(nèi)，并且在內(nèi)，并且在 受體細(xì)胞內(nèi)維持受體細(xì)胞內(nèi)維持_和和_的過程的過程受體細(xì)胞受體細(xì)胞穩(wěn)定穩(wěn)定表達(dá)表達(dá)方法方法導(dǎo)入植物細(xì)胞導(dǎo)入植物細(xì)胞導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞導(dǎo)入微生物細(xì)胞導(dǎo)入微生物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法顯微注射法顯微注射法 感受態(tài)細(xì)胞吸收感受態(tài)細(xì)胞吸收DNADNA分子分子( (三三)

17、)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞（1）農(nóng)桿菌）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化法特點(diǎn)特點(diǎn):能感染雙子葉植物和祼子植物能感染雙子葉植物和祼子植物,對對單子葉植物無感染能力單子葉植物無感染能力Ti質(zhì)粒的質(zhì)粒的TDNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并整合到其染色體上胞并整合到其染色體上轉(zhuǎn)化過程轉(zhuǎn)化過程:Ti質(zhì)粒質(zhì)粒目的基因目的基因構(gòu)建構(gòu)建表表達(dá)達(dá)載載體體導(dǎo)入導(dǎo)入植植物物細(xì)細(xì)胞胞插入插入植物細(xì)胞植物細(xì)胞染色染色DNA表達(dá)表達(dá)新新性性狀狀轉(zhuǎn)入轉(zhuǎn)入農(nóng)農(nóng)桿桿菌菌（2）基因槍法）基因槍法 基因槍法又稱微彈轟擊法，是利用壓縮氣體產(chǎn)生的動(dòng)力，基因槍法又稱微彈轟擊法，是

18、利用壓縮氣體產(chǎn)生的動(dòng)力，將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體DNA打入受體細(xì)胞中，使目打入受體細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法。的基因與其整合并表達(dá)的方法。（3）花粉通道法）花粉通道法 植物花粉在柱頭上萌發(fā)后，花粉管要穿過花柱直通胚囊。植物花粉在柱頭上萌發(fā)后，花粉管要穿過花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管還未愈合花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管還未愈合前，剪去柱頭，然后，滴加前，剪去柱頭，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞。因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞。2 2、將目的

19、基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞、將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞方法：顯微注射法方法：顯微注射法程序：程序：目的基因表達(dá)載體提純目的基因表達(dá)載體提純 取卵（受精卵）取卵（受精卵） 顯微注射顯微注射 受精卵受精卵 新性狀動(dòng)物新性狀動(dòng)物3、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞常用法：常用法：Ca2+處理處理常用菌：大腸桿菌常用菌：大腸桿菌微生物作受體細(xì)胞原因：微生物作受體細(xì)胞原因：繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對少繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對少過程：過程：Ca2+處理處理大腸桿菌大腸桿菌感受態(tài)感受態(tài)細(xì)胞細(xì)胞表達(dá)載體表達(dá)載體與感受態(tài)與感受態(tài)細(xì)胞混合細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)感受態(tài)細(xì)胞吸收胞吸收DNA1、基因工程中科學(xué)

20、家常用細(xì)菌、酵母菌等微生物作、基因工程中科學(xué)家常用細(xì)菌、酵母菌等微生物作為受體細(xì)胞，原因是為受體細(xì)胞，原因是 A結(jié)構(gòu)簡單、操作方便結(jié)構(gòu)簡單、操作方便 B繁殖速度快繁殖速度快 C遺傳物質(zhì)含量少、簡單遺傳物質(zhì)含量少、簡單 D性狀穩(wěn)定、變異少性狀穩(wěn)定、變異少2、基因工程常用的受體細(xì)胞有、基因工程常用的受體細(xì)胞有 大腸桿菌大腸桿菌 枯草桿菌枯草桿菌 支原體支原體 動(dòng)植物細(xì)胞動(dòng)植物細(xì)胞A B C DBD3、基因工程是在、基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的，在分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的，在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對的步驟是基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對的步驟是A.人工合成基因

21、人工合成基因 B.目的基因與運(yùn)載體結(jié)合目的基因與運(yùn)載體結(jié)合C.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 D.目的基因的檢測和表達(dá)目的基因的檢測和表達(dá)C4. 采用基因工程的方法培育抗蟲棉，下列導(dǎo)入目的基因采用基因工程的方法培育抗蟲棉，下列導(dǎo)入目的基因的做法正確的是的做法正確的是將毒素蛋白質(zhì)注射到棉受精卵中將毒素蛋白質(zhì)注射到棉受精卵中 將編碼毒素蛋白將編碼毒素蛋白的的DNA序列注射到棉受精卵中序列注射到棉受精卵中 將編碼毒素蛋白的將編碼毒素蛋白的DNA序列與細(xì)菌質(zhì)粒重組，注射到棉的子房并進(jìn)入受精序列與細(xì)菌質(zhì)粒重組，注射到棉的子房并進(jìn)入受精卵中卵中 將編碼毒素蛋白的將編碼毒素蛋白的DNA序列與質(zhì)

22、粒重組，導(dǎo)入序列與質(zhì)粒重組，導(dǎo)入細(xì)菌感染棉的體細(xì)胞，再進(jìn)行組織培養(yǎng)細(xì)菌感染棉的體細(xì)胞，再進(jìn)行組織培養(yǎng)A B C DC5. 下列屬于基因工程中導(dǎo)入目的基因方法的是下列屬于基因工程中導(dǎo)入目的基因方法的是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法基因槍法 花粉管道法花粉管道法 顯微注顯微注射法射法 胚胎移植胚胎移植 DNA分子雜交法分子雜交法A BC DC( (四四) )目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定檢測檢測導(dǎo)入檢測：目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞導(dǎo)入檢測：目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞方法方法 DNADNA分子雜交分子雜交表達(dá)檢測表達(dá)檢測轉(zhuǎn)錄檢測轉(zhuǎn)錄檢測分子雜交分子雜交翻譯檢測翻譯檢測抗原抗體抗原抗體雜交雜

23、交分分子子檢檢測測法法鑒定鑒定抗蟲鑒定抗蟲鑒定抗病鑒定抗病鑒定活性鑒定等活性鑒定等個(gè)體水平的鑒定個(gè)體水平的鑒定知識延伸知識延伸DNADNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù) 該方法是根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則，把互補(bǔ)的雙鏈該方法是根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則，把互補(bǔ)的雙鏈DNA解開，把單股的解開，把單股的DNA小片段用同位素、熒光分子或小片段用同位素、熒光分子或化學(xué)發(fā)光催化劑等進(jìn)行標(biāo)記，之后同被檢測的化學(xué)發(fā)光催化劑等進(jìn)行標(biāo)記，之后同被檢測的DNA中的中的同源互補(bǔ)序列雜交，從而檢出所要查明的同源互補(bǔ)序列雜交，從而檢出所要查明的DNA或基因。或基因。1、用、用-珠蛋白的珠蛋白的DNA探針可以檢測出的遺傳病是探針可以檢測出

24、的遺傳病是 A鐮刀狀細(xì)胞貧血癥鐮刀狀細(xì)胞貧血癥 B白血病白血病C壞血病壞血病 D苯丙酮尿癥苯丙酮尿癥 A2、應(yīng)用基因工程技術(shù)診斷疾病的過程中必須使用基、應(yīng)用基因工程技術(shù)診斷疾病的過程中必須使用基因探針才能達(dá)到檢測疾病的目的。這里的基因探針是因探針才能達(dá)到檢測疾病的目的。這里的基因探針是 A用于檢測疾病的醫(yī)療器械用于檢測疾病的醫(yī)療器械B用放射性同位素或熒光分子等標(biāo)記的用放射性同位素或熒光分子等標(biāo)記的DNA分子分子C合成合成-珠蛋白的珠蛋白的DNAD合成苯丙羥化酶的合成苯丙羥化酶的DNA片段片段B思考與探究：思考與探究：2.根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機(jī)理根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉

25、植物的機(jī)理,你能分你能分析出不能導(dǎo)入單子葉植物的原因嗎析出不能導(dǎo)入單子葉植物的原因嗎?若將一個(gè)抗病基因?qū)魧⒁粋€(gè)抗病基因?qū)胄←溨腥胄←溨?理論上講你應(yīng)該怎樣做理論上講你應(yīng)該怎樣做?要選擇合適的農(nóng)桿菌菌株，因?yàn)椴皇撬械霓r(nóng)桿菌菌株都要選擇合適的農(nóng)桿菌菌株，因?yàn)椴皇撬械霓r(nóng)桿菌菌株都可以侵染單子葉植物；要加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì)，一般為乙可以侵染單子葉植物；要加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì)，一般為乙酰丁香酮等，目的是使農(nóng)桿菌向植物組織的受傷部位靠攏酰丁香酮等，目的是使農(nóng)桿菌向植物組織的受傷部位靠攏（趨化性）和激活農(nóng)桿菌的（趨化性）和激活農(nóng)桿菌的Vir區(qū)（誘導(dǎo)）的基因，使區(qū)（誘導(dǎo)）的基因，使T-DNA轉(zhuǎn)移并插入到染

26、色體轉(zhuǎn)移并插入到染色體DNA上。上。3.3.利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素，聯(lián)系前面有關(guān)細(xì)胞器功利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素，聯(lián)系前面有關(guān)細(xì)胞器功能的知識，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要能的知識，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價(jià)結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價(jià)結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細(xì)胞中，大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器，因此，在大于真核細(xì)胞中，大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器，因此，在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。4.-4.-珠蛋白是動(dòng)物血紅蛋白的重要組成成分。當(dāng)它的成分異珠蛋白是動(dòng)物血紅蛋白的重要組成成分。當(dāng)它的成分異常時(shí)，動(dòng)物有可能患某種疾病，如鐮刀形細(xì)胞貧血癥。假