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1、1實驗九：實驗九：醋酸纖維素薄膜電泳2一、實驗目的一、實驗目的 了解生物大分子的電泳分離原理 了解電泳的基本操作方法3二、實驗原理二、實驗原理電泳和電泳技術：混懸于溶液中的帶電質點在外加電場作用下，向著與之帶相異電荷的電極方向移動的現象叫做“電泳”。利用電泳現象來達到將多組分物質分離分析或分離制備的技術叫做電泳技術。醋酸纖維素薄膜電泳：蛋白電泳支持介質的種類較多，如濾紙、醋酸纖維素膜、瓊脂糖等。蛋白質和氨基酸都是兩性電解質，其分子中的羧基（COOH）和氨基（NH2）在溶液中均可解離。血清蛋白質的等電點均低于pH7.0，在pH8.6的緩沖液中帶負電，向陽極移動，分子小且帶電荷多者，則移動速度較快

2、。4三三 實驗試劑實驗試劑、電泳緩沖液（PH8.6，巴比妥酸巴比妥鈉緩沖液）、血清蛋白染色液（氨基黑試劑）、漂洗液（乙醇醋酸溶液）5醋酸纖維素薄膜電泳：醋酸纖維素薄膜電泳：、薄膜的準備：薄膜在毛面距短邊處用鉛筆輕輕劃一條點樣線。浸入電泳緩沖液，充分浸泡，分鐘左右。（取出膜片并用濾紙吸去多余的緩沖液，不可吸得過干）、電泳槽準備：電泳槽里加入緩沖液，用兩張大濾紙的一端鋪在電泳槽支架上，另一端浸入緩沖液。（濾紙橋）待濾紙吸飽緩沖液后，用玻璃棒輕輕搟走氣泡，使粗濾紙緊貼在支架上。四四 、實驗操作步驟、實驗操作步驟6、點樣：用玻璃棒蘸取血清少量，在載玻片短邊中央的一段輕輕涂布適量血清，均勻點壓在纖維素薄

3、膜加樣線上，使血清滲透到薄膜內，形成均勻直線。、電泳：用鑷子將薄膜加樣的毛面向下搭在濾紙橋上，點樣端在負極。薄膜與濾紙橋要垂直，中間不能下垂。電泳：100V,60min,從負極向正極移動。、染色：用鑷子取出薄膜，置染色液中分鐘。(一般蛋白質染色常使用氨基黑和麗春紅，糖蛋白用甲苯胺藍或過碘酸-Schiff試劑，脂蛋白則用蘇丹黑或品紅亞硫酸染色)7、漂洗：在漂洗液中漂洗至背景藍色退去，即可取出。吹干，觀察。(對水溶性染料最普遍應用的脫色劑是5醋酸水溶液。為了長期保存或進行光吸收掃描測定，可浸入冰醋酸：無水乙醇30:70（V/V）的透明液中。)五、實驗結果五、實驗結果六、結果分析：六、結果分析：1.點樣量大小、均勻

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