1、昆 明 醫 科 大 學 教 案課程名稱：法醫物證學 授課對象：法醫學專業五年級本科生一、 講授題目：第一節 概論；第二節ABO血型二、 講授時數：3學時三、 講授人：景強 職稱：教授 四、 本課目的、要求1.掌握血型抗原、抗體的分類及特點；2.熟悉紅細胞凝集過程及促進因素；3.掌握ABO血型系統的普通表型；4.熟悉ABO血型系統的主要變異體；5.了解ABO血型抗原的發育及其生成途徑；6.了解ABH血型物質在人體內的分布情況；7.了解ABO血型的人群分布；8.掌握ABO血型的檢測方法。五、本章節重點、難點重點1.血型抗原、抗體的分類及特點2.ABO血型系統的普通表型；3.ABO血型系統的主要變異

2、體；4.ABO血型的檢測方法。難點：1.ABO血型系統的主要亞型；2.ABO血型系統的主要變異體；3.ABO血型系統的遺傳；4.ABO血型抗原的生成途徑。六、教學方法： 傳統式、提問式、直觀教學式、自學式等方法結合。七、使用教具：多媒體八、思考題：1.ABO血型系統的普通表型是哪些？依據什么分型？ 2.ABO血型系統有哪些主要亞型和主要變異體？3.什么是CIS AB，獲得性B？4.ABO血型抗體有何特點？5.ABH血型物質的區別與聯系。6.可以根據新生兒的ABO血型進行親子鑒定嗎？7.ABO血型如何檢測？8.根據性質的不同，血型抗原、抗體如何分類？9.紅細胞凝集的促進因素有哪些？九：要求參考書

3、目及章節：人類血型遺傳學，趙桐茂編著，科學出版社出版十、講課內容及時數安排時間：5min多媒體幻燈片第一節 概論引言人類的血液都是一樣的嗎？有無種類之分？有無個體特異性？這些問題，在今天看來，是不難回答的；但在人類進入本世紀以前，這些問題卻未能找到滿意的答案。在發現血型之前的輸血治療實踐中，有的病人輸入血液后反應良好，有的卻由此而送掉了性命。即使在有血緣關系的同一家庭成員之間輸血，也不時導致這種不幸事故的發生。這究竟是怎么一回事呢？于是乎有人開始著手人血的異同研究，當抽取不同人的血液進行混合時，發現有些人的血液相互混合后融合得很好，而有些人的血液相互混合后卻出現了凝集現象。由此看來，人類的血液

4、并不完全相同，有著類型的區別。(Blood could also sort people into several kinds.)血型（blood group）是人類血液由遺傳控制的個體性狀之一，是血液的遺傳標記（genetic marker）。紅細胞血型是指紅細胞表面抗原由遺傳所決定的個體差異(RBC blood group is decided by the red blood cells surface antigen between two individuals.)。由于血型具有個體特異性和終身不變的特征，作為人類遺傳標記在法醫學個體識別和親子鑒定具有重要的意義。血型在臨床輸血、器官

5、移植及人類學研究中也是重要的指標。時間：15min多媒體幻燈片一、 血型的命名 傳統的紅細胞血型命名沒有統一規定， 由發現者根據具體情況命名，如 ABO 系統是依據抗原的種類確定名稱，Rh 系統是根據免疫動物命名，Lewis、Duffy 等是根據首次發現含有抗體的患者的姓氏命名的。國際輸血學會（ISBT）經過20 多年的努力，建議對紅細胞血型系統使用數字命名二、紅細胞血型抗原 (RBC blood group antigens)紅細胞膜由蛋白質、多糖與脂質組成，含50%的蛋白質，40%的脂質，不足10%的糖。以蛋白質與脂質作為載體，多糖作為側鏈。 脂質中的磷脂 （60%-50%）、 膽固醇（2

6、5%-30%）和糖鞘脂（5%-10%）構成雙層類脂結構。蛋白質中有嵌入雙層類脂的膜蛋白和存在于膜內面的“骨架蛋白”（specrin及actin）。時間：15min多媒體幻燈片紅細胞血型抗原根據化學結構可分為3類：1.ABH、Lewis 與P抗原等是糖脂質(Glucolipid)，型特異性決定于寡糖的結構；Rh及 Kell 抗原等是膜內鑲嵌蛋白，型特異性決定于蛋白質的結構；2.MN 與 Ss 抗原分別為血型糖蛋白(glycophorin) A（PAS1 及 2）及血型糖蛋白B（PAS3），是膜內中性唾液酸糖蛋白，可被蛋白水解酶或神經氨酸酶破壞，型特異性與蛋白和寡糖的結構均有關；3.分泌型個體的體

7、液與分泌液中的 A、B、H及 Lewis 抗原等屬于水溶性糖蛋白(Water-soluble glycoprotein)，型特異性決定于寡糖的結構。 類似的血型抗原還廣泛存在于哺乳類、兩棲類、魚類、植物果實和種子以及某些微生物中。如高等的靈長類動物（如猩猩、長臂猿以及猴）有類似人類的 A、 B物質，大腸桿菌O86 有類B型物質；肺炎雙球菌14型含類 A物質。三、紅細胞血型抗體 (RBC blood group antibody)抗體屬于血清蛋白的球蛋白中，統稱為免疫球蛋白 （immunoglobulin，Ig），分為IgG、IgM、IgA、IgD 及IgE 5大類。免疫球蛋白的基本結構由4條多

8、肽鏈組成，2 條輕鏈，2 條重鏈，一條重鏈與一條輕鏈由二硫鍵連結，二條重鏈間也由二硫鍵連結，形成Y字型。4條多肽鏈的氨基末端是高度可變區，為抗原結合部位，其余部分為恒定區，決定了抗體蛋白自身性質。 血型抗體根據產生的機制可分為“天然”抗體和“免疫”抗體兩類。天然抗體(Natural Antibody)指的是沒有經過確切的抗原刺激而存在于人血清中的抗體，也稱作“規則”抗體(This antibody exists in human serum even there has no exact antigenic stimulation.)。如人體內的抗 A抗體與抗 B抗體即屬于此類，分別存在于B型

9、和 A型人血清中。免疫抗體(Immunity Resistant)是指有明確抗原刺激或經過人工免疫而產生的抗體，也稱作“不規則”抗體，如抗M抗體等(This antibody exists in human serum when there has exact antigenic stimulation.)。 血型抗體根據血清學反應特點不同又分為“寒冷”抗體與“溫暖”抗體。“寒冷”抗體("Cold" antibodies)的最適反應溫度為 420，可在鹽水介質中與紅細胞發生凝集反應(Agglutination Reaction)，故又稱鹽水抗體或完全抗體(Complete

10、Antibody)，一般多為IgM類。“溫暖”抗體("Warm" antibodies)的最適反應溫度為 37，需要加入其他試劑才可出現可見的凝集反應，因而又稱為不完全抗體(Incomplete Antibody)。不完全抗體在鹽水中雖不出現凝集，但已與紅細胞上的抗原決定簇發生了特異性結合，此時再加入完全抗體也不會出現凝集反應，因其阻斷了后者與紅細胞的結合，所以也稱遮斷抗體或封閉抗體(Blocking Antibody)。 時間：15min多媒體幻燈片四、紅細胞血型檢測 (RBC blood group testing)紅細胞血型的檢測通常應用凝集反應（agglutinat

11、ion），即在顆粒性抗原懸液中加入對應的抗體，抗體與抗原決定蔟特異結合，使顆粒性抗原集聚成團塊的現象。紅細胞與對應的抗體發生的凝集反應稱作紅細胞凝集反應。 （一）紅細胞的凝集反應 （agglutination）可以分為兩個步驟， 即紅細胞抗原與抗體的特異性結合（致敏）和結合了抗體的紅細胞形成網狀團塊（凝集）。(Agglutination can be Divided into two steps, one step is Red blood cell antigen and antibody combined specificity: Sensitization, second step is

12、 the coalition form lumps of mesh: Agglutination)1. 致敏 Sensitization抗體的特異性結合部位與抗原決定蔟結構互補，由離子間相反電荷、氫鍵、疏水鍵等的作用而發生結合。此種結合是可逆的，增加抗原與抗體的濃度、維持合適的pH值、降低反應介質的離子強度等可增加抗原-抗體復合物的產量。2. 凝集 Agglutination致敏的紅細胞是否產生凝集，取決于抗體的性質、抗原決定蔟的部位與數目及紅細胞動電位的大小。IgM 抗體由 5 個亞單位構成，理論上有 10 個抗原結合部位，兩個抗原結合部位間的最大距離為30 nm，可以在普通的介質（如鹽水）

13、中使紅細胞發生凝集。 IgG抗體有2個抗原結合部位，其間距離為14 nm，通常在普通的介質可使紅細胞致敏，但難以產生凝集現象。 ABO 抗原在紅細胞上數量豐富且其抗原決定蔟為糖脂的寡糖部位，突出于紅細胞的表面，使 IgG 抗體在普通的介質中引發紅細胞的凝集反應。Rh 抗原為膜內鑲嵌蛋白，位于細胞膜內且在紅細胞上抗原數量較少，鹽水介質中IgG類抗體難以引發紅細胞凝集反應。在正常情況下，紅細胞膜表面的N-乙酰-神經氨酸殘基電離，使紅細胞表面攜帶負電荷。由于同性相斥，使紅細胞在介質中相互分離，呈懸浮狀態，細胞間距保持約為 25nm。紅細胞膜表面攜帶的負電荷可吸引介質中的正離子，在紅細胞周圍形成一正離

14、子團， 由紅細胞表面的負電荷與正離子團外自由正離子間形成的電位差稱為紅細胞的動電位（zeta potential）。動電位的大小取決于紅細胞表面荷負電荷的程度與介質中的離子濃度，也決定了紅細胞間距，與凝集反應的發生有密切關系。時間：15min多媒體幻燈片時間：5min（二）紅細胞凝集反應的促進因素 Red cell contributing factors of agglutination 1. 縮小紅細胞的間距 (Narrow the distance between red blood cells)通過降低紅細胞的動電位和物理加壓的方法可以縮小紅細胞的間距。降低紅細胞的動電位： 蛋白水解酶

15、Proteolytic Enzyme（如胰蛋白酶、菠籮蛋白酶等）或神經氨酸酶處理紅細胞，裂解紅細胞表面的神經氨酸，減小紅細胞表面的負電荷數量，達到降低紅細胞的動電位的目的； 反應體系中加牛血清白蛋白BSA(Bovine Serum Albumin)，可降低介質中離子的介電常數并中和紅細胞表面的神經氨酸，達到降低紅細胞動電位的目的； 低離子強度溶液Negative ion solution（如7%葡萄糖溶液、10%蔗糖溶液等）作為反應介質，可以減少紅細胞吸引的陽離子數量，達到降低紅細胞的動電位的目的。 離心 Centrifuge含有紅細胞和抗體的反應溶液經12000r/min離心3min，離心力

16、對致敏紅細胞施加物理壓力，可減小紅細胞的間距，促進凝集。 2.在抗體間搭橋 Bridge between antibodies應用抗球蛋白實驗法，在含有紅細胞和抗體的反應溶液中加入與抗體對應的第二抗體（抗球蛋白抗體），連接已致敏紅細胞上的抗體，間接使紅細胞形成網狀團塊（凝集）。抗人球蛋白試驗又稱Coombs試驗，是檢測不完全抗體的抗原抗體反應的經典方法。間接抗球蛋白試驗則用于檢測紅細胞在體外與抗體的反應，用以測定某些紅細胞的血型、鑒定不規則抗體及作輸血前的配型等。間接抗球蛋白試驗的原理為待分型檢測的紅細胞與抗血清反應，相應血型抗體使紅細胞致敏。然后加入抗人球蛋白血清，抗人球蛋白抗體與致敏紅細胞

17、上的血型抗體發生抗原抗體反應，如同在致敏紅細胞間搭橋，使紅細胞出現可見凝集，證明待測紅細胞上具有與抗血型抗體相對應的抗原。陰性結果則證明待測紅細胞上沒有與血型抗體相對應的抗原，綜合紅細胞的反應結果，判斷紅細胞的血型。十一、課堂總結：血型是人類血液由遺傳控制的個體性狀之一，是血液的遺傳標記。紅細胞血型是指紅細胞表面抗原由遺傳所決定的個體差異。由于血型具有個體特異性和終身不變的特征，作為人類遺傳標記在法醫學個體識別和親子鑒定具有重要的意義。血型抗原和抗體根據結構、性質不同可以不同種類，分布于人體不同組織器官。ABO血型由于檢測方法簡單，可以測定ABH抗原和抗A、抗B抗體，兩種結果互相印證，可減少錯判的機會； ABH血型物質抗原