1、結核桿菌特異性細胞免疫反應檢測結核桿菌特異性細胞免疫反應檢測 準確、快速、簡便的結核感染檢測2u感染人數：全球人口的1/3，中國的感染率為44.5%；感染者一生中會有約10%的風險發展成為結核?。籾年新發病例數：全球每年報告新病例約800-1000 萬；中國每年報告新病例約150萬；u死亡人數：全球每年死亡病例約300萬；其中中國約13萬；u中國是全球22個結核病高負擔國家之一。3u影像學方法：特異性較差，與醫師的經驗有關，主觀性強。u培養：結核病診斷金標準，敏感性為30-50%且耗時2-8周；u抗酸染色法（俗稱涂片）：敏感性為30-40%；u血清結核抗體定性檢測：敏感性在0-100%，特異性

2、約為47-100%；u分子診斷方法（如PCR）：重復性較差，需要痰標本；u結核菌素試驗（TST）：受卡介苗干擾，特異性差，在肺結核病人中存在10-25%的假陰性。4應用現狀：技術是國際最新的用于結核桿菌感染的體外免疫診斷方法；u在北美、歐洲和日本已被廣泛應用于結核桿菌感染的檢測，包括結核病輔助診斷；公共衛生突發事件；健康人群體檢等；u美國和日本已經將該技術寫入該國用于結核防治的指導原則中。5 細胞IGRA； 全血IGRA； 尚未獲得中國SFDA批準進入中國； 全血IGRA；結核桿菌特異性細胞免疫反應檢測結核桿菌特異性細胞免疫反應檢測2011年7月6日，獲中華人民共和國食品藥品監督管理局（SFD

3、A）批準上市生生 產產 企企 業業： ?？诰S瑅璦生物研究院注注 冊冊 號號： 國食藥監械（準）字2011第3400801；產品標準編號產品標準編號： YZB/國 2442-2011，項項 目目 類類 別別： 體外三類診斷試劑 原理與技術背景- -干擾素釋放實驗（干擾素釋放實驗（IGRA） （IGRA，interferon- gamma release assay）酶聯免疫技術（酶聯免疫技術（ELISELISA A） （ELISA，Enzyme-Linked ImmunoAssay）結核桿菌特異抗原結核桿菌特異抗原 早期抗原靶6（ESAT-6） early secreted antigenic

4、target 6 培養濾液蛋白10（CFP 10） （culture filtrate protein 10 ）l基本原理基本原理1 機體感染結核桿菌后產生的T淋巴細胞在體外受到特異性抗原刺激時會釋放-干擾素，通過對 -干擾素的定量分析可判斷是否具有結核桿菌的特異性T細胞反應。-干擾素釋放實驗（IGRA）-干擾素抗原呈遞細胞脫毒的炭疽毒素致死因子片段LFn，可以起到分子注射器的作用LFnESAT6 / LFnCFP10產品特點產品特點2高靈敏度高靈敏度 結核感染引起的細胞免疫反應早于細菌學及影像學表現； 無需帶菌標本無需帶菌標本，適用于“菌陰肺結核菌陰肺結核”及“肺外結核肺外結核” 的鑒別 受

5、個體免疫功能低下影響??；受個體免疫功能低下影響??； 高特異性高特異性 不受卡介苗與絕大多數環境非結核分枝桿菌影響 安全快速安全快速 只需患者提供 3ml 靜脈全血，次日可出報告A.TBA.TB臨床性能指標臨床性能指標國內臨床數據1 1085 085 例樣本 試驗組 472 472 例： 菌陽結核 菌陰結核 對照組 613 例： 健康志愿者 非結核其它肺部疾病 臨床診斷性能臨床診斷性能診斷性能指標診斷性能指標結果（結果（95%CI）敏感性83.3%79.9%-86.7%特異性85.6%82.8%-88.4%準確度84.6%82.5%-86.7%陽性預測值81.7%78.2%-85.2%陰性預測值

6、86.9%84.2%-89.6%陽性似然比 5.84.8-7.1陰性似然比 0.20.16-0.24疾病類型 例數 A.TB 陽性陰性 艾滋病感染者合并活動性結核 88(100%) 0(0%) 糖尿病合并活動性結核 1312(92.3%) 1(7.7%) 類風濕合并活動性結核 54(80%) 1(20%) 結核性胸膜炎同時服用免疫抑制劑 97(77.8%) 2(22.2%) 合 計 3531(88.6%) 4(11.4%) A.TBA.TB臨床診斷數據臨床診斷數據-2-2樣本要求樣本要求1. 新鮮采集的肝素鈉肝素鈉抗凝全血2. 每份樣本不得少于3 ml3 ml3. 樣本常溫常溫（15-25）保

7、存，不得冷凍或冷藏4. 樣本采集后 16 16 小時小時內進行前處理（抗原刺激）A.TBTM 操作過程操作過程陰性刺激劑陽性刺激劑A.TB刺激劑樣本采集：3ml新鮮全血，肝素鈉抗凝37 16小時內運輸常溫22-24小時血漿收獲標準曲線制備、樣品檢測450nm讀數37 第一步：樣本的刺激第一步：樣本的刺激第二步：第二步：ELISAELISA定量定量IFN-IFN-N P TN P T0.5小時約3小時樣本的刺激和孵育A.TBTM 報告單報告單姓名年齡性別 ID號科別診斷樣本 樣本號檢測項目檢測項目測定結果測定結果 單位單位計算公式計算公式T/P參考范圍參考范圍 提示提示混合淋巴細胞培養 + 干擾

8、素（P）9.86IU/ml0.24 0.6陰性（-）混合淋巴細胞培養 + 干擾素（T）2.34IU/ml備注：患者樣本經結核分枝桿菌RD1區編碼的全抗原刺激后，特異性釋放的-干擾素水平為 2.34 IU/ml；非特異釋放的-干擾素水平為 9.86 IU/ml；兩者的比值為： 0.24 ；是否為活動性結核，請結合臨床進行判斷。N值體現的是機體的本底干擾素水平值體現的是機體的本底干擾素水平P 值體現的是整體的機體免疫水平是否正常值體現的是整體的機體免疫水平是否正常T 值體現的是機體內值體現的是機體內T淋巴細胞對結核桿菌特異性抗原刺激的反應淋巴細胞對結核桿菌特異性抗原刺激的反應 交叉反應性交叉反應性

9、 以IL-1，IL-2，IL-4，IL-5，IL-6，IL-8，IL-10，TNF-，GM-CSF等 9種細胞因子作為干擾物在反應體系中的濃度與-干擾素的濃度相當或為-干擾素濃度的2-4倍時，無明顯交叉反應性。 干擾樣本對檢測的影響干擾樣本對檢測的影響溶血：游離血紅蛋白濃度達156.6 - 683.9 g/ml時，對本產品的檢測結果未見顯著影響脂血：甘油三酯水平最高達9.35mmol/L 對本產品的檢測結果沒有顯著影響類風濕：類風濕因子11.3-79.6U/ml，C反應蛋白為96.3-245.9mg/L 時對檢測結果沒有明顯影響免疫抑制劑：腎上腺皮質激素類免疫抑制劑強的松（血藥濃度32.1-75.1 ng/ml）對本產品的檢測結果沒有影響；大環內脂類免疫抑制劑FK506患者的樣本不推薦用本產品檢測 20艾滋病毒和結核菌雙重感染者；結核病高危人群：如糖尿病、矽肺、胃切除后等，應用免疫抑制劑者，及強制性脊柱炎使用TNF治療前等；（見前述P5,P6）u體檢（含不孕不育體檢）等21u感染人數：全球人口的1/3，中國的感染率為44.5%；感染者一生中會有約10%的風險發展成為結核病；u年新發病例數：全球每年報告新病例約800-1000 萬；中國每年報告新病例約150萬；u死亡人數：全球每