1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上選修一 生物技術(shù)實(shí)踐專題二 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)一、課題背景1研究和應(yīng)用微生物的前提是 。2在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物，一方面需要 ，另一方面需要 。二、培養(yǎng)基1概念：人們按照微生物對 的不同需求，配制出供其 的營養(yǎng)基質(zhì)稱為培養(yǎng)基。2種類：根據(jù)培養(yǎng)基的物理性質(zhì)可將培養(yǎng)基可以分為 、 和半固體培養(yǎng)基。3瓊脂：是一種從紅藻中提取的 ，在 以上熔化，在 以下凝固，在常規(guī)培養(yǎng)條件下呈現(xiàn) 。瓊脂是制備 培養(yǎng)基時最常用的 劑。4營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、 、 和無機(jī)鹽，另外還需要滿足微生物生長對 、 以及 的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加 ，

2、培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至 ，培養(yǎng)細(xì)菌時需將pH調(diào)至 或 ，培養(yǎng)厭氧微生物時則需要提供 的條件。5牛肉膏，蛋白胨來源于 ，含有 、 和 等營養(yǎng)。三、無菌技術(shù)1獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止 的入侵。2無菌技術(shù)圍繞著 展開，主要包括以下幾個方面：(1)對實(shí)驗(yàn)操作的 、操作者的衣著和 進(jìn)行清潔和 。(2)將用于微生物培養(yǎng)的器皿、 和 等進(jìn)行 。(3)為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在 附近進(jìn)行。(4)實(shí)驗(yàn)操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與_ _相接觸。3無菌技術(shù)的目的：(1)防止 ，(2)避免 。4消毒和滅菌消毒滅菌概念使用較為 的物理或化學(xué)方法殺死物體 或 的部分微生物(不包括_ 和

3、)使用 的理化因素殺死物體_的微生物(包括_和 )常用方法(1) 消毒法（在 煮 min）；(2) 消毒法（在 煮 min或在 煮 min）；(3) 消毒法（如用 擦拭雙手、用 消毒水源；紫外線照射前，適量噴灑 或 溶液等消毒液。）(4)紫外線消毒法：可以殺死 或 中的微生物。(1) 滅菌：直接在酒精燈火焰的 灼燒，如（ 、接種針或其他 用具）；(2) 滅菌（在 加熱 h）。適用于 、 的物品。如（ （吸管、培養(yǎng)皿）和 用具）；(3) 滅菌：壓力為 kpa，溫度為 條件下，維持 min。四、大腸桿菌的純化培養(yǎng)(一)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟：1計(jì)算：依據(jù)是培養(yǎng)基 的比例，計(jì)算配制某一體積

4、（如100ml）的培養(yǎng)基時，各種成分的用量。2稱量：牛肉膏比較 ，可用玻棒挑取到 上，同其一塊稱量。牛肉膏和蛋白胨易吸潮，稱取時動作要 ，稱后及時 。3溶化： 和稱量紙少量的水（ ）取出_ 加_和_ 加 (注意：不斷用玻璃棒攪拌，防止_而導(dǎo)致_)。當(dāng)_完全熔化后 補(bǔ)加蒸餾水至100 mL。調(diào)節(jié)_后再進(jìn)行滅菌。4滅菌5倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至_左右時，在 附近倒平板。(二)純化大腸桿菌1微生物的接種技術(shù)最常用的是 和 ，除此之外還包括 和 等方法。雖然這些技術(shù)方法各不相同，但是，其核心都是要防止 ，保證 。平板劃線法：通過接種環(huán)在 培養(yǎng)基表面 的操作，將聚集的菌種逐步 到培養(yǎng)基的表面。稀釋涂布平板

5、法：將 進(jìn)行一系列的 ，然后將不同 的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。兩種接種方法都是為了將聚集在一起的微生物 ，在 劃線培養(yǎng)后或者在 的菌液涂布后，可以分離得到由 繁殖而來的肉眼可見的單個_。2菌落：概念： 。菌落特征包括 。3系列稀釋操作：（P19）1、2、3注意：移液管需要經(jīng)過 。操作時， 和 應(yīng)在離火焰 處。4涂布平板操作：將涂布器末端浸在體積分?jǐn)?shù)為 的酒精；取少量 滴加到培養(yǎng)基表面；將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，冷卻 S；涂布時可轉(zhuǎn)動 ，使菌液分布均勻。5培養(yǎng)基滅菌合格與否的方法：將接種后的培養(yǎng)基和一個 的培養(yǎng)基都放入 中，培養(yǎng)12 h和24 h后，分別記錄觀察。

6、P20培養(yǎng)12h和24h后，觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同嗎？如果不同，請分析產(chǎn)生差異的原因。 。如果你在培養(yǎng)基上觀察到了不同形態(tài)的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的嗎？ 。6如何記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果？ (三)菌種的保藏：（1）臨時保藏：將菌種接種到試管的 ，在 溫度下培養(yǎng)，當(dāng) 長成后，將試管放入 冰箱中保藏，以后每 個月，轉(zhuǎn)移到 培養(yǎng)基上。適用范圍：對于 的菌種，可以采用臨時保藏的方法。缺點(diǎn)是：保存時間 ，菌種容易被 或產(chǎn)生變異。（2）長期保存菌種的方法： 法，在 mL的甘油瓶中，裝入 mL甘油后 ，將 mL轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油 后，放在 冷凍箱中保存。P15旁欄思考題：無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)

7、物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？ 。P16旁欄思考題：請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管（3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手（1）、（2）需要 ；（3）需要 。P17倒平板操作的討論1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？ 。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 。4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 。P18平板劃線操作的討論1.為什么在操

8、作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？ 。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？P19涂布平板操作的討論涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？ 。P20課后練習(xí)題1、2、3專題二 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用答案課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)一、1、防止雜菌入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物。2、為培養(yǎng)的微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件，確保無處不在的其他微生物無法混入。二、1. 營養(yǎng)基質(zhì) 生長繁殖2. 液體培養(yǎng)

9、基 固體培養(yǎng)基水3、多糖 98 44 固態(tài) 固體 凝固4、 碳源 氮源 PH 特殊營養(yǎng)物質(zhì) 氧氣 維生素 酸性 中性 微堿性 無氧 5、動物原料 糖 維生素 有機(jī)氮 三、1.外來雜菌2、如何避免雜菌 空間 手 消毒 接種用具 培養(yǎng)基 滅菌 酒精燈火焰 周圍的物品3、實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來的微生物污染 操作者自身被微生物感染 4.溫和 表面或內(nèi)部 芽孢和孢子 強(qiáng)烈 內(nèi)外所有 芽孢和孢子5.煮沸消毒 100 5-6 巴氏 70-75 30 80 15 化學(xué)藥劑 酒精 氯氣 石碳酸 煤酚皂 物體表面 空氣 灼燒滅菌 接種環(huán) 金屬 干熱滅菌 160-170 1-2 耐高溫 需保持干燥 玻璃器皿 金屬

10、 高壓蒸汽滅菌 100 121 15-30 四、（一）1.配方 2.粘稠 稱量紙 迅速 蓋上瓶蓋 3.牛肉膏 加熱 稱量紙 蛋白胨 氯化鈉 瓊脂 瓊脂糊底 燒杯破裂 瓊脂 PH4、高壓蒸汽滅菌 干熱滅菌 5、50 酒精燈火焰（二）1.平板劃線法 稀釋涂布法 斜面接種 穿刺接種 雜菌的污染 培養(yǎng)物的純度 瓊脂固體 連續(xù)劃線 稀釋 菌液 梯度稀釋 稀釋度 分離 數(shù)次 稀釋度足夠高 一個細(xì)胞 菌落 2.在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體菌落的形狀，大小，隆起程度和顏色等 3、滅菌 試管口 移液管 1-2cm 4、70% 菌液 8-10S 培養(yǎng)皿 5、未接種 37恒溫

11、箱 不同 （三）（1）固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng) 合適的 菌落 4 3-6 新鮮 頻繁使用 不長 污染（2）甘油管藏法 3 1 滅菌 1 充分混勻 20P15無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。P16 滅菌 消毒 P17 1、可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板了。2、通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3、平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，將平板倒置，既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，又可以避免使培養(yǎng)基中的水分過快地地?fù)]發(fā)。4、空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。P181、操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)