1、中藥制劑分析中藥制劑分析 第一章第一章 緒緒 論論 中藥制劑分析是以中醫(yī)藥理論為指導，運用現(xiàn)代分析理中藥制劑分析是以中醫(yī)藥理論為指導，運用現(xiàn)代分析理論和方法研究中藥制劑質(zhì)量的一門應用學科。論和方法研究中藥制劑質(zhì)量的一門應用學科。 第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述 一、中藥制劑分析的對象一、中藥制劑分析的對象 中藥制劑分析的對象應該是制劑組方中起主要作用的中藥制劑分析的對象應該是制劑組方中起主要作用的有效成分、毒性成分、或影響療效的化學成分，對其做出有效成分、毒性成分、或影響療效的化學成分，對其做出定性、定量等各方面的評價。定性、定量等各方面的評價。 二、中藥制劑分析的特點二、中藥制劑分析的特點 一）中

2、藥制劑分析的對象是復雜的混合物。一）中藥制劑分析的對象是復雜的混合物。 1.1.組成中成藥的組成中成藥的中藥材中藥材具有復雜性。具有復雜性。 中藥材的同名異物，同物異名現(xiàn)象普遍存在。中藥材的同名異物，同物異名現(xiàn)象普遍存在。有的中藥更由于形態(tài)相似，容易容易誤用。 2.2.中成藥中成藥化學成分化學成分的多樣性、復雜性。的多樣性、復雜性。 1 11 1）由多味中藥組成的復方制劑，其化學成分極為復雜多樣由多味中藥組成的復方制劑，其化學成分極為復雜多樣。 2) 2) 各種化學成分在中藥中的含量相差懸殊。各種化學成分在中藥中的含量相差懸殊。 3 3）中藥制劑由多種單味藥材組成，所含化學成分相互影響）中藥制

3、劑由多種單味藥材組成，所含化學成分相互影響。 3.3.中成藥的中成藥的劑型繁多劑型繁多，所用之輔料多種多樣，在測定前，樣所用之輔料多種多樣，在測定前，樣品必須經(jīng)過預處理，以排除各種輔料的干擾，必要時還須進行輔品必須經(jīng)過預處理，以排除各種輔料的干擾，必要時還須進行輔料的檢查和測定。料的檢查和測定。 4.4.工藝各異，很多在單味中藥鮮品中存在的化學成分，經(jīng)過炮工藝各異，很多在單味中藥鮮品中存在的化學成分，經(jīng)過炮制或制備工藝中經(jīng)加熱處理后已不復存在，或在制備過程中因揮制或制備工藝中經(jīng)加熱處理后已不復存在，或在制備過程中因揮發(fā)、分解、成鹽發(fā)、分解、成鹽 ( (沉淀沉淀) )反應等增加了中成藥分析工程的

4、困難。反應等增加了中成藥分析工程的困難。 二）首先進行組方分析，隨方?jīng)Q定測定主藥，選擇合適的檢測二）首先進行組方分析，隨方?jīng)Q定測定主藥，選擇合適的檢測指標，是目前質(zhì)量分析方法的特點之一。指標，是目前質(zhì)量分析方法的特點之一。 在進行質(zhì)量分析時首先以中醫(yī)理論和用藥原則為指導，進行組在進行質(zhì)量分析時首先以中醫(yī)理論和用藥原則為指導，進行組方分析，按功能主治分出主、輔、從、次藥味和藥群，選擇某合適方分析，按功能主治分出主、輔、從、次藥味和藥群，選擇某合適的化學成分為指標來說明其與質(zhì)量的關(guān)系。的化學成分為指標來說明其與質(zhì)量的關(guān)系。 三、影響中藥制劑質(zhì)量的因素三、影響中藥制劑質(zhì)量的因素 ( (一一) )原料

5、藥材的品種、規(guī)格、產(chǎn)地、藥用部位、采收季節(jié)、加原料藥材的品種、規(guī)格、產(chǎn)地、藥用部位、采收季節(jié)、加工方法的影響工方法的影響 (二二)炮制方法的影響炮制方法的影響 （三）（三）生產(chǎn)工藝的影響生產(chǎn)工藝的影響 (四四)中藥制劑的包裝、貯藏、保管的影響中藥制劑的包裝、貯藏、保管的影響 四、中藥制劑質(zhì)量控制的現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢四、中藥制劑質(zhì)量控制的現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢 一）國外藥物分析發(fā)展趨勢一）國外藥物分析發(fā)展趨勢 基本的方法主要為：分離分析法、電化學法、光譜法和聯(lián)用分基本的方法主要為：分離分析法、電化學法、光譜法和聯(lián)用分析方法等析方法等。 各種色譜及其聯(lián)用技術(shù)各種色譜及其聯(lián)用技術(shù)已成為占主導地位的常規(guī)分析方法，

6、已成為占主導地位的常規(guī)分析方法，如HPTLCHPTLC、HPLCHPLC、GCGC、HPCEHPCE、LC-MSLC-MS聯(lián)用等聯(lián)用等。 體內(nèi)藥物分析研究體內(nèi)藥物分析研究，趨向于采用在線的聯(lián)用微透析分析技術(shù)在線的聯(lián)用微透析分析技術(shù)，如on-line MD-CEon-line MD-CE、on-line MDon-line MDLCLC等。 手性藥物手性藥物作為化學藥物的特殊群體，以以HPLCHPLC和和CECE為主要拆分手為主要拆分手段的手性藥物分析段的手性藥物分析方興未艾，已成為全世界藥物分析的研究熱點。 二）國內(nèi)中藥制劑分析現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢）國內(nèi)中藥制劑分析現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢 1、國內(nèi)中藥制劑分

7、析現(xiàn)狀國內(nèi)中藥制劑分析現(xiàn)狀 1 1）光譜法的應用）光譜法的應用 A A 比色法比色法 如丹參素如丹參素/ /丹參注射液，阿魏酸丹參注射液，阿魏酸/ /當歸浸膏當歸浸膏-定量定量 B 紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法 單波長法單波長法 如蒽醌如蒽醌/何首烏，香豆素何首烏，香豆素/祖師栗膏祖師栗膏-定量定量 ； 雙波長法雙波長法 靛藍、靛玉紅靛藍、靛玉紅/喉痛消炎丸喉痛消炎丸-定量定量 ； 三波長法三波長法 小檗堿小檗堿/三黃片三黃片-定量定量 ； 一階導數(shù)光譜法一階導數(shù)光譜法 綠原酸綠原酸/感冒咳嗽沖劑，麻黃堿感冒咳嗽沖劑，麻黃堿/哮喘丸哮喘丸-定量定量 二階導數(shù)光譜法二階導數(shù)光譜法 膽酸

8、膽酸/清宮沖劑，血竭清宮沖劑，血竭/七厘散七厘散-定量定量； 三階導數(shù)光譜法三階導數(shù)光譜法 氫溴酸東莨菪堿氫溴酸東莨菪堿/中麻中麻2號注射液號注射液-定量定量。等。等 C 熒光法熒光法 丹參素丹參素/丹參注射液丹參注射液 D 紅外分光光度法紅外分光光度法 -體、體、 -體體/山道年；番木鱉堿、馬錢子堿山道年；番木鱉堿、馬錢子堿/馬錢子馬錢子 E 質(zhì)譜法質(zhì)譜法 F 核磁共振光譜法核磁共振光譜法 2）色譜法的應用）色譜法的應用 A 紙色譜法紙色譜法 已較少應用；已較少應用； B 薄層色譜法薄層色譜法 應用廣泛；應用廣泛； C 棒狀薄層色譜法棒狀薄層色譜法 小檗堿小檗堿/復方黃柏制劑、人參皂甙復方黃

9、柏制劑、人參皂甙/人參、人參、膽酸和去氧膽酸膽酸和去氧膽酸/熊膽熊膽-定量；定量； D 氣相色譜法氣相色譜法 揮發(fā)性成分定量揮發(fā)性成分定量 冰片冰片/復方丹參片復方丹參片/牛黃解毒丸牛黃解毒丸/冠心蘇合丸等；冠心蘇合丸等； 厚樸酚、和厚樸酚厚樸酚、和厚樸酚/藿香正氣水，麻黃堿藿香正氣水，麻黃堿/葛根湯；葛根湯； E 高效液相色譜法高效液相色譜法 應用廣泛，以反相應用廣泛，以反相HPLC為主；為主； 黃連素黃連素/半夏瀉心湯，紅景天甙半夏瀉心湯，紅景天甙/紅景天口服液，甘草酸紅景天口服液，甘草酸/千金升千金升白沖劑等白沖劑等。 3）電化學分析法的應用）電化學分析法的應用 A 庫侖法庫侖法 B 電

10、位法電位法 藥物電極測定法和電位溶出分析法藥物電極測定法和電位溶出分析法 4）其他）其他 A 原子吸收光譜法和冷原子技術(shù)原子吸收光譜法和冷原子技術(shù) B 原子發(fā)射光譜原子發(fā)射光譜 C X射線分析法射線分析法 目前，中藥體系存在的突出問題具體表現(xiàn)在：目前，中藥體系存在的突出問題具體表現(xiàn)在：(1)(1)定量分析指定量分析指標與其主要藥效作用間缺乏相關(guān)性；標與其主要藥效作用間缺乏相關(guān)性；(2)(2)與化學藥物相比，中藥是與化學藥物相比，中藥是一個由多成分、多因素構(gòu)成的復雜體系，目前還沒有建立起一套有一個由多成分、多因素構(gòu)成的復雜體系，目前還沒有建立起一套有效的中藥復雜體系定量分析標準。效的中藥復雜體系

11、定量分析標準。 2 2。國內(nèi)中藥制劑分析發(fā)展趨勢。國內(nèi)中藥制劑分析發(fā)展趨勢 (1)(1)中藥有效成分的篩選與確定；應用仿生學、基因組學等學中藥有效成分的篩選與確定；應用仿生學、基因組學等學科的理論和進展，發(fā)現(xiàn)新的藥物靶標，從分子、基因、受體、組織科的理論和進展，發(fā)現(xiàn)新的藥物靶標，從分子、基因、受體、組織和整體水平系統(tǒng)準確地確定中藥復雜體系中的藥效物質(zhì)；和整體水平系統(tǒng)準確地確定中藥復雜體系中的藥效物質(zhì)； (2)(2)中藥有效成分的提取與分析；中藥化學成分非常復雜，而中藥有效成分的提取與分析；中藥化學成分非常復雜，而且有效成分也具有相對性。為了高效率地提取中藥有效成分，應用且有效成分也具有相對性。

12、為了高效率地提取中藥有效成分，應用各種現(xiàn)代提取技術(shù)，如各種現(xiàn)代提取技術(shù)，如SFESFE、SWESWE、UAEUAE等，可用于中藥復雜體系中等，可用于中藥復雜體系中有效成分的提取，利用準確的儀器分析方法和計算機技術(shù)，通過因有效成分的提取，利用準確的儀器分析方法和計算機技術(shù)，通過因子分析方法對中藥復雜體系進行定性定量評價；子分析方法對中藥復雜體系進行定性定量評價； (3)(3)中藥藥效物質(zhì)與中醫(yī)藥理論相關(guān)性研究；利用現(xiàn)代分析方中藥藥效物質(zhì)與中醫(yī)藥理論相關(guān)性研究；利用現(xiàn)代分析方法研究中藥復雜體系中藥效物質(zhì)與中醫(yī)藥理論的定量關(guān)系，并結(jié)合法研究中藥復雜體系中藥效物質(zhì)與中醫(yī)藥理論的定量關(guān)系，并結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學

13、理論，闡明其作用機制，在此基礎上對中藥及其復方進行現(xiàn)代醫(yī)學理論，闡明其作用機制，在此基礎上對中藥及其復方進行全面質(zhì)量控制。全面質(zhì)量控制。 第二節(jié)第二節(jié) 中藥制劑分析工作的基本程序中藥制劑分析工作的基本程序 中藥制劑分析程序一般可分取樣、測試樣品溶液的制備和測定中藥制劑分析程序一般可分取樣、測試樣品溶液的制備和測定（包括定性鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測定）等。（包括定性鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測定）等。 一、一、 取樣取樣 1供試品要具有代表性：原則是均勻、合理。供試品要具有代表性：原則是均勻、合理。 2嚴格按照規(guī)定的取樣方法進行取樣：一般應從每個包裝的嚴格按照規(guī)定的取樣方法進行取樣：一般應從每個包裝的四

14、角和中央五處取樣，深度可達四角和中央五處取樣，深度可達1/3 2/3處。取得的樣品裝入清潔、處。取得的樣品裝入清潔、干燥、具磨口塞的容器或密封的塑料袋中，并注明品名、批號、數(shù)干燥、具磨口塞的容器或密封的塑料袋中，并注明品名、批號、數(shù)量、取樣日期及取樣人量、取樣日期及取樣人。 3抽取供試品的數(shù)量：各類中藥制劑取樣大致是至少夠抽取供試品的數(shù)量：各類中藥制劑取樣大致是至少夠3次檢次檢驗的用量。貴重藥品可酌情取樣。驗的用量。貴重藥品可酌情取樣。 粉狀制劑（散劑、顆粒劑）一般取樣粉狀制劑（散劑、顆粒劑）一般取樣100g，可從包裝的上、中、，可從包裝的上、中、下三層及周圍間隔相等部位取樣若干，將所得樣品混

15、勻，按四分下三層及周圍間隔相等部位取樣若干，將所得樣品混勻，按四分法從中取出所需供試量。法從中取出所需供試量。 液體制劑（口服液、藥酒、糖漿、酊劑等）一般取樣液體制劑（口服液、藥酒、糖漿、酊劑等）一般取樣200ml。同時須注意均勻取樣。同時須注意均勻取樣。 固體中成藥（丸劑、片劑）成品取樣一般為固體中成藥（丸劑、片劑）成品取樣一般為100g，壓片后取樣，壓片后取樣200片。丸劑一般取片。丸劑一般取10丸。丸。 膠囊劑膠囊劑 稱取不少于稱取不少于20個膠囊，傾出其中的藥料，稱定空膠囊個膠囊，傾出其中的藥料，稱定空膠囊的重量，由總重中減去，即為膠囊內(nèi)藥料的重量的重量，由總重中減去，即為膠囊內(nèi)藥料的

16、重量。依標示量及供試依標示量及供試量稱取部分藥料供分析。一般取樣量為量稱取部分藥料供分析。一般取樣量為100g。 注射液的取樣，灌注、熔封，滅菌前后應經(jīng)過兩次分析。灌封注射液的取樣，灌注、熔封，滅菌前后應經(jīng)過兩次分析。灌封前將注射液混合均勻，如前將注射液混合均勻，如 液體取樣原則取樣，再按標示量及供試量液體取樣原則取樣，再按標示量及供試量分別取部分進行檢驗；經(jīng)滅菌后的注射液須按原來的方法進行分析分別取部分進行檢驗；經(jīng)滅菌后的注射液須按原來的方法進行分析檢驗。已封好的安瓿，取樣量一般為檢驗。已封好的安瓿，取樣量一般為200支。支。 其它劑型的中成藥，可根據(jù)具體情況隨意抽取一定數(shù)量，作為其它劑型的

17、中成藥，可根據(jù)具體情況隨意抽取一定數(shù)量，作為隨機抽樣。隨機抽樣。 供試樣品檢驗完畢，應保留一半數(shù)量作為留樣觀察。供試樣品檢驗完畢，應保留一半數(shù)量作為留樣觀察。 二、二、 測試樣品溶液的制備測試樣品溶液的制備 中藥制劑測試樣品溶液的制備一般分為提取、分離、凈化等過中藥制劑測試樣品溶液的制備一般分為提取、分離、凈化等過程。程。 1.中藥制劑樣品的提取中藥制劑樣品的提取 冷浸法冷浸法，61020倍藥重溶劑，稱重，浸泡倍藥重溶劑，稱重，浸泡122448小時，稱重小時，稱重,，等分取樣或取總樣測定。適宜遇熱不穩(wěn)定的有效成分；等分取樣或取總樣測定。適宜遇熱不穩(wěn)定的有效成分； 連續(xù)回流法，樣品置索氏提取器中

18、，利用溶劑反復提取，提取連續(xù)回流法，樣品置索氏提取器中，利用溶劑反復提取，提取效率高，溶劑少，遇熱不穩(wěn)定的有效成分不宜用此法；效率高，溶劑少，遇熱不穩(wěn)定的有效成分不宜用此法； 超聲波提取法超聲波提取法，樣品置容器中，溶劑提取，效率高，一般樣品樣品置容器中，溶劑提取，效率高，一般樣品30min內(nèi)即可完成。內(nèi)即可完成。 2中藥制劑樣品的預處理中藥制劑樣品的預處理 液液-液萃取法液萃取法: 溶劑直接萃取、離子對萃取，操作繁，易乳化。溶劑直接萃取、離子對萃取，操作繁，易乳化。 沉淀法：沉淀法： 采用某些試劑沉淀雜質(zhì)或沉淀待測成分。采用某些試劑沉淀雜質(zhì)或沉淀待測成分。 蒸餾法：蒸餾法： 利用待測成分或其

19、分解產(chǎn)物具有揮發(fā)性的特點，采利用待測成分或其分解產(chǎn)物具有揮發(fā)性的特點，采用蒸餾法、收集餾液進行含量測定，必須明確測定成分的結(jié)構(gòu)才可用蒸餾法、收集餾液進行含量測定，必須明確測定成分的結(jié)構(gòu)才可用此法。用此法。 色譜法（液色譜法（液-固萃取法），固萃取法），常用凈化劑有三氧化二鋁、氧化鎂、凈化劑有三氧化二鋁、氧化鎂、硅膠、活性炭、大孔樹脂、離子交換樹脂、硅藻土、鍵合相硅膠硅膠、活性炭、大孔樹脂、離子交換樹脂、硅藻土、鍵合相硅膠C18、C8等等。 其中離子交換樹脂、硅藻土、鍵合相硅膠其中離子交換樹脂、硅藻土、鍵合相硅膠C18、C8等目前有較多等目前有較多商品預處理柱，使用方便，操作簡單，凈化效率高。商

20、品預處理柱，使用方便，操作簡單，凈化效率高。 三、定性鑒別、檢查和含量測定三、定性鑒別、檢查和含量測定 1定性鑒別定性鑒別 1）性狀鑒別系指中成藥的形狀、顏色、氣味等，凡藥典收載品，）性狀鑒別系指中成藥的形狀、顏色、氣味等，凡藥典收載品，在藥典中均有規(guī)定，可按要求進行檢查。在藥典中均有規(guī)定，可按要求進行檢查。 2）顯微鑒別）顯微鑒別 因為含有中藥原粉的中成藥均保留中藥材的顯因為含有中藥原粉的中成藥均保留中藥材的顯微特征?？梢酝ㄟ^這些特征，對中成藥進行定性鑒別。微特征。可以通過這些特征，對中成藥進行定性鑒別。 3）理化鑒別）理化鑒別 藥典中常用的方法有：熒光法、顯色法、沉淀藥典中常用的方法有：熒

21、光法、顯色法、沉淀法、微量升華法；紙色譜法、薄層色譜、液相色譜、氣相色譜等。法、微量升華法；紙色譜法、薄層色譜、液相色譜、氣相色譜等。 中藥定性鑒別應選擇其中主藥（君藥）、輔藥（臣藥）作為主中藥定性鑒別應選擇其中主藥（君藥）、輔藥（臣藥）作為主要對象要對象，其次應鑒別毒劇藥及貴重藥材。其次應鑒別毒劇藥及貴重藥材。 2檢查檢查 按我國藥典要求，中藥制劑需要檢查的項目大致可分為三類： 1）污染型）污染型 中成藥一般雜質(zhì)檢查項目有：異物、灰分、酸不溶中成藥一般雜質(zhì)檢查項目有：異物、灰分、酸不溶性灰分、重金屬、砷鹽等；衛(wèi)生學檢查：微生物細菌檢查；以及有性灰分、重金屬、砷鹽等；衛(wèi)生學檢查：微生物細菌檢查

22、；以及有的產(chǎn)品要求農(nóng)藥殘留量的檢測。的產(chǎn)品要求農(nóng)藥殘留量的檢測。 2）特殊雜質(zhì)型）特殊雜質(zhì)型 原料藥材摻假、有毒成分的限量檢查原料藥材摻假、有毒成分的限量檢查。 3）劑型的要求檢查類型（制劑通則要求檢查項目）劑型的要求檢查類型（制劑通則要求檢查項目） 中成藥一般質(zhì)量要求的檢查有：揮發(fā)油測定、水分測定（固體制中成藥一般質(zhì)量要求的檢查有：揮發(fā)油測定、水分測定（固體制劑）、乙醇含量測定、總固體、相對密度、劑）、乙醇含量測定、總固體、相對密度、pH值（酊劑、藥酒）、值（酊劑、藥酒）、裝量差異（片重差異）、崩解度（片劑、膠囊劑）、熔點測定、旋裝量差異（片重差異）、崩解度（片劑、膠囊劑）、熔點測定、旋光度

23、測定等。光度測定等。 3含量測定含量測定 中成藥含量測定所采用的方法除經(jīng)典的重量法、容量法中成藥含量測定所采用的方法除經(jīng)典的重量法、容量法(包括包括中和法、容量沉淀法、絡合滴定法、氧化還原法及非水溶液滴定法中和法、容量沉淀法、絡合滴定法、氧化還原法及非水溶液滴定法等等)外，還可采用電位法、庫倫滴定法、比色法、可見外，還可采用電位法、庫倫滴定法、比色法、可見-紫外分光光紫外分光光度法、紅外分光光度法、液相色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、度法、紅外分光光度法、液相色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法、雙波長薄層掃描法等。高效液相色譜法、雙波長薄層掃描法等。 1）對有效成分明確的中藥制劑要

24、進行有效成分的含量測定）對有效成分明確的中藥制劑要進行有效成分的含量測定。 2）大致明確有效成分，要求測定這些成分的總量。）大致明確有效成分，要求測定這些成分的總量。 3）對有效成分已知但無理想的測定方法的中藥制劑，可通過測）對有效成分已知但無理想的測定方法的中藥制劑，可通過測定其中某些化學成分的含量間接控制有效成分的含量。定其中某些化學成分的含量間接控制有效成分的含量。 4）對有效成分不明確的中藥制劑可采用以下方法：選擇可能的）對有效成分不明確的中藥制劑可采用以下方法：選擇可能的有效成分或主要成分（指示性成分）進行含量測定；測定藥物的總有效成分或主要成分（指示性成分）進行含量測定；測定藥物的

25、總固體量；選擇在原料加工炮制時或制備、貯存過程中易損失、破壞固體量；選擇在原料加工炮制時或制備、貯存過程中易損失、破壞的成分進行含量或限量測定。的成分進行含量或限量測定。 5）中藥制劑中含有劇毒性成分則要測定其含量。）中藥制劑中含有劇毒性成分則要測定其含量。 6）貴重藥材在制劑中投料量應加以測定。）貴重藥材在制劑中投料量應加以測定。第二章第二章 中藥制劑定量分析方法中藥制劑定量分析方法 第一節(jié)第一節(jié) 可見可見-紫外光譜法紫外光譜法 一、單一物質(zhì)的定量一、單一物質(zhì)的定量 定量依據(jù)是定量依據(jù)是Beer-Lambert定律，定律，A= lC。測定單一物質(zhì)時，先。測定單一物質(zhì)時，先測定物質(zhì)的吸收光譜，

26、然后選擇最大吸收峰的波長測定物質(zhì)的吸收光譜，然后選擇最大吸收峰的波長 max進行定量分進行定量分析。析。 一個物質(zhì)若有幾個吸收峰時，可選擇吸收峰較高，在此吸收峰一個物質(zhì)若有幾個吸收峰時，可選擇吸收峰較高，在此吸收峰處吸光度隨波長變化較小，并且其它物質(zhì)無吸收的波長作為定量條處吸光度隨波長變化較小，并且其它物質(zhì)無吸收的波長作為定量條件。件。 一般不選擇光譜最左邊的末端吸收峰作定量測定的波長。一般不選擇光譜最左邊的末端吸收峰作定量測定的波長。常用定量方法：常用定量方法： 1.對照法對照法 C樣樣=C標標 A樣樣/A標標；C標標 A樣樣/（A標標 C 樣樣）=樣品樣品%，C樣樣和和C標標分別為樣品濃度

27、和標準品濃度，分別為樣品濃度和標準品濃度，C 樣樣為樣品標示濃度。為樣品標示濃度。 2.標準曲線法：從標準品吸光度標準曲線法：從標準品吸光度-濃度曲線求得樣品濃度。濃度曲線求得樣品濃度。 二、二、 混合物的含量測定混合物的含量測定 一）一） 混合物中有混合物中有a，b兩種組分，若兩者的最大吸收峰不重合，兩種組分，若兩者的最大吸收峰不重合，且在且在a的的 1max處，處，b無吸收；在無吸收；在b的的 2max處，處，a無吸收?？煞謩e在無吸收?？煞謩e在 1max、 2max處用單一物質(zhì)的定量方法從混合物中測定處用單一物質(zhì)的定量方法從混合物中測定a、b的濃度。的濃度。 二）二） 混合物中有混合物中有

28、a，b兩種組分，吸收光譜部分重疊，在兩種組分，吸收光譜部分重疊，在a的的 1處，處，b無吸收；在無吸收；在b的的 2處，處，a有吸收。先在有吸收。先在 2處測定總吸收處測定總吸收Aa+b，再，再在在 1處測定處測定Aa 1；先從；先從Aa 1直接求出直接求出a的濃度，根據(jù)的濃度，根據(jù)a的濃度求出的濃度求出Aa 2。再從再從Aa+b減去減去Aa 2后求得后求得Ab 2，就可求得，就可求得b的濃度。的濃度。 （三）雙波長測定法三）雙波長測定法 中藥制劑分析中常用的方法為等吸收波長法和系數(shù)率法。中藥制劑分析中常用的方法為等吸收波長法和系數(shù)率法。 1等吸收波長法等吸收波長法 1）基本原理）基本原理 根

29、據(jù)左圖選出兩個波長根據(jù)左圖選出兩個波長 1與與 2，其選擇原則，其選擇原則 是干擾組分是干擾組分a在在 1與與 2處吸收度相等，即處吸收度相等，即 Aa 1= Aa 2。而待測組分。而待測組分b在在 1與與 2處的差吸處的差吸 收度收度 A應比較大，再在應比較大，再在 1與與 2處測混合組分處測混合組分 溶液的差吸度溶液的差吸度 A。 設設 1為參比波長，為參比波長， 2為測量波長，則為測量波長，則 等吸收波長法原理示意圖等吸收波長法原理示意圖 A=Aa+b 2 - Aa+b 1 =（Aa 2 + Ab 2）-（Aa 1 + Ab 1） =Ab 2 - Ab 1 =（ b 2 - b 1）Cb

30、L 2）應用舉例）應用舉例 喉痛消炎丸中靛藍、靛玉紅的測定喉痛消炎丸中靛藍、靛玉紅的測定 ）選擇等吸收波長：用）選擇等吸收波長：用28 g/ml的靛藍及靛的靛藍及靛 玉紅的氯仿溶液在分光光度計上掃描，并用同玉紅的氯仿溶液在分光光度計上掃描，并用同 法掃描出空白樣品溶液的吸收曲線。法掃描出空白樣品溶液的吸收曲線。 從左圖可知靛藍在從左圖可知靛藍在540nm、634.4nm處有合適處有合適 的等吸收波長；靛玉紅卻是在的等吸收波長；靛玉紅卻是在5142nm和和 566nm處有等吸收波長，而空白樣品液在上述處有等吸收波長，而空白樣品液在上述 波長處的吸收曲線幾乎成一條直線、不干擾測波長處的吸收曲線幾乎

31、成一條直線、不干擾測 圖圖2-1-3 靛藍、靛玉紅的吸收曲線靛藍、靛玉紅的吸收曲線 (1)靛藍靛藍(2)靛玉紅靛玉紅(3)無青黛樣品無青黛樣品 定，選取靛藍的測定波長定，選取靛藍的測定波長 s1566 nm、參比、參比波長波長 R1=514.2 nm。可選靛玉紅的測定波長?？蛇x靛玉紅的測定波長 s2=540nm、參比波長、參比波長 R2=634.4nm。 )標準曲線：精密吸取靛藍對照品溶液標準曲線：精密吸取靛藍對照品溶液0.25、0.50、2.0ml；靛玉紅對照品溶液靛玉紅對照品溶液0.20、0.40、1.40ml，分別放入，分別放入10ml量瓶中，量瓶中，用氯仿稀釋至刻度，分別在上述等吸收波

32、長處測其差吸收度：用氯仿稀釋至刻度，分別在上述等吸收波長處測其差吸收度： A1=A566nm - A514.2nm ； A2=A540nm - A634.4nm ； 然后用然后用 A對對C作標準曲線；并求出其一元回歸方程：作標準曲線；并求出其一元回歸方程： A10.02241C1 (r11.0000) A20.04060C2 + 0.0055 (r21.0000) )含量測定：精稱喉痛消炎丸細粉約含量測定：精稱喉痛消炎丸細粉約0.2g于索氏提取器中，用于索氏提取器中，用氯仿提取至無藍色，用氯仿定容于氯仿提取至無藍色，用氯仿定容于50ml量瓶中，再精密吸取量瓶中，再精密吸取5ml置置10ml量瓶

33、中，加氯仿至刻度即為樣品溶液。將樣品溶液在量瓶中，加氯仿至刻度即為樣品溶液。將樣品溶液在 s1與與 R1，處測出處測出 A樣樣1值，用以上值，用以上 A1式求出靛藍的濃度及樣品中靛藍的含量。式求出靛藍的濃度及樣品中靛藍的含量。同樣，在同樣，在 s2與與 R2處測出處測出 A樣樣2，用以上，用以上 A2式求出靛玉紅的濃度及式求出靛玉紅的濃度及樣品中靛玉紅的含量。樣品中靛玉紅的含量。 2 聯(lián)立方程法聯(lián)立方程法 A a+b 1=Aa 1+Ab 1= a 1 CaL+ b 1 CbL A a+b 2=Aa 2+Ab 2= a 2 CaL+ b 2 CbL （四）三波長測定法四）三波長測定法 此法要求在

34、任一吸收曲線上，能找出滿足下述條件的三個波長：此法要求在任一吸收曲線上，能找出滿足下述條件的三個波長：即在干擾組分的吸收曲線上，與三個波長相應的點，能在一條直線即在干擾組分的吸收曲線上，與三個波長相應的點，能在一條直線上。上。 1 1基本原理基本原理 左圖中左圖中 1 1、 2 2、 3 3為在任一吸收曲線上，任意為在任一吸收曲線上，任意 選擇的三個波長。選擇的三個波長。A A1 1、A A2 2、A A3 3為在三個波長處為在三個波長處 分別測出的吸收度。分別測出的吸收度。 根據(jù)相似三角形的等比性質(zhì)，可推導出下式，根據(jù)相似三角形的等比性質(zhì)，可推導出下式， A= AA= A2 2 - - （m

35、 Am A1 1+nA+nA3 3）/ /（m + nm + n） = 2 2 （m 1 1 + n 3 3）/（m + n）CL 三波長分光光度法的原理三波長分光光度法的原理 說明說明AA與待測組分濃度與待測組分濃度C C成正比。成正比。 2應用舉例應用舉例 二陳丸中陳皮甙的測定二陳丸中陳皮甙的測定 1 1）總干擾組分的制備及其吸收光譜）總干擾組分的制備及其吸收光譜 )除去陳皮甙后，陳皮其他組分提取液的制備：用溶劑除去陳皮甙后，陳皮其他組分提取液的制備：用溶劑( (含含0.10.1氫氧化鈉的氫氧化鈉的7575乙醇液乙醇液) )提取陳皮粉，提取液經(jīng)薄層分離，刮取提取陳皮粉，提取液經(jīng)薄層分離，刮

36、取除陳皮甙以外的所有斑點洗脫，得除陳皮甙以外陳皮其他組分提取除陳皮甙以外的所有斑點洗脫，得除陳皮甙以外陳皮其他組分提取液液( (I)I)。 )二陳丸空白粉提取液的制備：按處方比例二陳丸空白粉提取液的制備：按處方比例 配制除陳皮以外的二陳丸空白粉，用上述溶配制除陳皮以外的二陳丸空白粉，用上述溶 劑提取，得二陳丸空白粉提取液劑提取，得二陳丸空白粉提取液()()。 將將(I)(I)、()()按處方比例混合，得二陳丸總干按處方比例混合，得二陳丸總干 擾成分液擾成分液()()。分光光度計分別測定陳皮甙對。分光光度計分別測定陳皮甙對 照品和照品和()()的吸收光譜。見左圖。其他成分對的吸收光譜。見左圖。其

37、他成分對 陳皮甙的測定有干擾，用陳皮甙的測定有干擾，用6 6批不同來源的原料批不同來源的原料按上法制備按上法制備()()，并測其吸收光譜，結(jié)果譜形相似?？刹捎萌ㄩL，并測其吸收光譜，結(jié)果譜形相似?？刹捎萌ㄩL法消除干擾法消除干擾。 2 2）選擇三個測定波長）選擇三個測定波長 作圖法粗選，再計算精選在作圖法粗選，再計算精選在()()的的 A=0A=0處，即為精選的三個波處，即為精選的三個波長：長：1 1=318.0nm=318.0nm，2 2=286.0nm=286.0nm，3 3=275.0nm=275.0nm。 3 3）標準曲線）標準曲線 配制不同濃度的陳皮甙對照品溶液，在選出的配制不同濃度

38、的陳皮甙對照品溶液，在選出的三個波長處，分別測定吸收度，并算出三個波長處，分別測定吸收度，并算出AA值，對值，對AA值與濃度值與濃度C C進進行直線回歸，回歸方程為：行直線回歸，回歸方程為： A = 9.9059C 0.0024(r = 0.9990)A = 9.9059C 0.0024(r = 0.9990) 4 4）樣品測定）樣品測定 精密稱取二陳丸細粉約精密稱取二陳丸細粉約0.1g0.1g，加，加100.0ml100.0ml上述溶上述溶劑浸泡提取劑浸泡提取1515小時，過濾，取續(xù)濾液小時，過濾，取續(xù)濾液2.0ml2.0ml，用溶劑稀釋至，用溶劑稀釋至5.0ml5.0ml，在選出的三波長處

39、，分別測定吸收度，計算其在選出的三波長處，分別測定吸收度，計算其AA值，再按回歸方值，再按回歸方程算出陳皮甙含量。本法平均回收率：程算出陳皮甙含量。本法平均回收率：98.2898.28，RSDRSD：2.122.12。 （五）差示光譜法（五）差示光譜法 1 1基本原理基本原理 差示光譜法的關(guān)鍵有二，其一，提供一個近似理想的參比溶液。差示光譜法的關(guān)鍵有二，其一，提供一個近似理想的參比溶液。其二，使待測組分發(fā)生特征光譜變化，而賦形劑或其他共有組分卻其二，使待測組分發(fā)生特征光譜變化，而賦形劑或其他共有組分卻不引起光譜變化，因而可消除它們的干擾。不引起光譜變化，因而可消除它們的干擾。 設設A Ax x

40、、A Ay y分別代表兩種不同介質(zhì)中待測組分在測定波長處的吸收分別代表兩種不同介質(zhì)中待測組分在測定波長處的吸收度，度，A Az z代表背景和干擾組分的吸收度，其不受測定介質(zhì)改變的影響。代表背景和干擾組分的吸收度，其不受測定介質(zhì)改變的影響。根據(jù)吸收度加和性原理，則根據(jù)吸收度加和性原理，則 A=AA=A樣樣 - - A A參參=(=(A Ax x +A+Az z)-(A)-(Ay y + A+ Az z)= A)= Ax x - A- Ay y =( =(x x - - y y)CL )CL 差示光譜中的振幅，即最大吸收與最小吸收之差值，也可進行差示光譜中的振幅，即最大吸收與最小吸收之差值，也可進

41、行定量測定，這可提高本法的專屬性。定量測定，這可提高本法的專屬性。 2 2應用舉例應用舉例 差示光譜法測定含牛黃的中成藥中膽紅素的含量差示光譜法測定含牛黃的中成藥中膽紅素的含量 1 1）測定原理）測定原理 膽紅素具有高度共軛體系結(jié)構(gòu)，在波長膽紅素具有高度共軛體系結(jié)構(gòu)，在波長453nm453nm處處為最大吸收，在可見光照射下膽紅素易氧化成藍色產(chǎn)物，在為最大吸收，在可見光照射下膽紅素易氧化成藍色產(chǎn)物，在453nm453nm處吸收度顯著降低。處吸收度顯著降低。 2 2）選用日光下照射）選用日光下照射3030分鐘或在紅外燈下照射分鐘或在紅外燈下照射4 4小時測小時測AA值。值。 3 3）精密稱取膽紅素

42、）精密稱取膽紅素2mg2mg于于50ml50ml棕色量瓶中，棕色量瓶中， 加入適量冷加入適量冷(10(10以下以下) )的酸性氯仿的酸性氯仿(150ml(150ml氯氯 仿中含仿中含0.05ml0.05ml濃鹽酸濃鹽酸) )，于冰水浴中超聲振，于冰水浴中超聲振 蕩蕩2020分鐘，稀釋至刻度，制成儲備液。準確分鐘，稀釋至刻度，制成儲備液。準確 吸取吸取0 0，4 4、0 08 8、1 1，2 2、1.61.6、2.0ml2.0ml儲備液儲備液 于于10ml10ml量瓶中，加冷酸性氯仿至刻度，測其量瓶中，加冷酸性氯仿至刻度，測其 光照前后在光照前后在453nm453nm處的吸收度。回歸方程處的吸收

43、度?；貧w方程 膽紅素在酸性氯仿溶液中的吸收光譜膽紅素在酸性氯仿溶液中的吸收光譜 為為A=0.0804C + 0.00570(r=0.9995)A=0.0804C + 0.00570(r=0.9995)。 a a光照前光照前 b b光照后光照后 除光照反應外，其余操作均需避光。除光照反應外，其余操作均需避光。 4 4）分別制得六應丸、六神丸、牛黃消炎丸的空白樣品對照液，）分別制得六應丸、六神丸、牛黃消炎丸的空白樣品對照液，在在453nm453nm處測得各自光照前后的處測得各自光照前后的A A值，計算值，計算AA。實驗表明三種成藥。實驗表明三種成藥AA值為零或幾乎為零。說明其他干擾組分在以上光照條

44、件下不干值為零或幾乎為零。說明其他干擾組分在以上光照條件下不干擾膽紅素的測定。擾膽紅素的測定。 5 5）精密稱取六應丸、六神丸各）精密稱取六應丸、六神丸各60mg60mg，牛黃消炎丸，牛黃消炎丸120mg120mg置置10ml10ml帶塞的試管中，準確加入冷酸性氯仿帶塞的試管中，準確加入冷酸性氯仿10ml10ml，冰水浴中振蕩，冰水浴中振蕩2020分鐘，分鐘，過濾，棄去初濾液，測續(xù)濾液光照前后的過濾，棄去初濾液，測續(xù)濾液光照前后的A A值，算出值，算出AA值。由回歸值。由回歸方程算得樣品的含量。方程算得樣品的含量。 本法加樣回收率：六應丸為本法加樣回收率：六應丸為98.898.8，RSD=1.

45、8RSD=1.8；六神丸為；六神丸為100.7100.7，RSD=2.2RSD=2.2；牛黃消炎丸為；牛黃消炎丸為93.093.0，RSDRSD1.11.1。 （六）導數(shù)光譜法（六）導數(shù)光譜法 1 1導數(shù)光譜及其特征導數(shù)光譜及其特征 通常的吸收光譜，其吸收度是波長的函數(shù)通常的吸收光譜，其吸收度是波長的函數(shù) A=CA=CE=CE=C （）。對波長求導，將其微分系）。對波長求導，將其微分系 數(shù)（數(shù)（d dn nA A/d/dn n）對波長掃描可得導數(shù)光）對波長掃描可得導數(shù)光 譜圖。譜圖。 特征：特征： (1)(1)導數(shù)光譜的階數(shù)愈高，峰形愈尖銳且數(shù)導數(shù)光譜的階數(shù)愈高，峰形愈尖銳且數(shù) 量亦增多。量亦

46、增多。 (2)(2)在零階光譜的極大處，其相應的奇階光在零階光譜的極大處，其相應的奇階光 譜通過零點。在零階光譜的兩拐點處，奇階譜通過零點。在零階光譜的兩拐點處，奇階 導數(shù)光譜為極大或極小。導數(shù)光譜為極大或極小。 (3)(3)偶階導數(shù)光譜的形狀與零階光譜類似，偶階導數(shù)光譜的形狀與零階光譜類似， 零階光譜的峰值對應于偶階導數(shù)光譜的極值，零階光譜的峰值對應于偶階導數(shù)光譜的極值， 零階光譜的拐點在偶階導數(shù)光譜中通過零點。零階光譜的拐點在偶階導數(shù)光譜中通過零點。 (4)(4)導數(shù)光譜譜帶的極值數(shù)等于導數(shù)階數(shù)加導數(shù)光譜譜帶的極值數(shù)等于導數(shù)階數(shù)加1 1。 高斯曲線及其一至四階導數(shù)曲線高斯曲線及其一至四階導

47、數(shù)曲線 導數(shù)分光光度的優(yōu)點：導數(shù)分光光度的優(yōu)點：a a能檢出兩個或兩個以上的重疊吸收帶；能檢出兩個或兩個以上的重疊吸收帶； b b能分辨在強吸收曲線能分辨在強吸收曲線“肩部肩部”的弱吸收帶；的弱吸收帶； c c能精密確定單一吸收峰位置；能精密確定單一吸收峰位置； d d能消除基線（背景）的影響；能消除基線（背景）的影響； e e能進行定量測定。能進行定量測定。 2 2基本原理基本原理 吸收光譜服從吸收光譜服從BeerBeer定律：定律： A AC CL L 根據(jù)導數(shù)光譜的定義，對上式求導，則：根據(jù)導數(shù)光譜的定義，對上式求導，則： dAdA/d=/d=（d/dd/d）CLCL；d d2 2A/d

48、A/d2 2= =（d d2 2/d/d2 2）CLCL； d dn nA A/d/dn n= =（d dn n/d/dn n）CLCL； 式 中式 中 L L 為 定 值 ， 給 定 物 質(zhì) 在 特 定 波 長 處 的為 定 值 ， 給 定 物 質(zhì) 在 特 定 波 長 處 的 d / d d / d 、d d2 2/d/d2 2d dn n/d/dn n也是定值，因此，也是定值，因此，dAdA/dC/dC，d d2 2A/dA/d2 2CCd dn nA A/d/dn nCC。 常用的定量參數(shù)的選擇方法有：常用的定量參數(shù)的選擇方法有： 1 1）峰）峰- -谷法谷法 測量相鄰峰、谷之間的距離。

49、測量相鄰峰、谷之間的距離。 左圖中的左圖中的h h1 1h h2 2( (振幅，用振幅，用D D表示表示) )。 2 2）基線法）基線法 取相鄰二同向峰取相鄰二同向峰( (正或倒正或倒) )的的 公切線為基線，以中間的反向峰峰尖至基線公切線為基線，以中間的反向峰峰尖至基線 的距離為測量值。左圖中的距離為測量值。左圖中p p1 1。 3 3）峰）峰- -零法零法 測量峰值到零線間的垂直距測量峰值到零線間的垂直距 離，左圖中離，左圖中p p2 2。 4 4）面積法）面積法 根據(jù)一階或二階導數(shù)光譜面根據(jù)一階或二階導數(shù)光譜面 導數(shù)光譜的測量導數(shù)光譜的測量 積，積， 進行定量測定。進行定量測定。 3 3

50、共存組分干擾吸收的消除共存組分干擾吸收的消除 1 1）一階導數(shù)光譜法消除線性干擾吸收）一階導數(shù)光譜法消除線性干擾吸收 A=A= CL + a + bCL + a + b dA dA/d= /d= （d/ dd/ d）CL + aCL + a 說明線性干擾在一階導數(shù)光譜中對定量參數(shù)說明線性干擾在一階導數(shù)光譜中對定量參數(shù)D(D(振幅振幅) )沒有影響，沒有影響，D D只與待測組分濃度成正比。只與待測組分濃度成正比。 D=( dAD=( dA/d)/d)峰峰 -( -( dAdA/d)/d)谷谷 =( =( d/ d)d/ d) 峰峰- (- (d/ d)d/ d) 谷谷 CLCL 2 2）高階導數(shù)

51、光譜法消除非線性干擾吸收及用于重疊）高階導數(shù)光譜法消除非線性干擾吸收及用于重疊峰的分離，定量峰的分離，定量 若干擾組分吸收對波長呈非線性，為一近似的二次吸收曲線，若干擾組分吸收對波長呈非線性，為一近似的二次吸收曲線，則總吸收度為則總吸收度為 A=A= CL + eCL + e2 2 + f + g + f + g 對其求一階、二階導數(shù)得：對其求一階、二階導數(shù)得： dAdA/d=/d=（d/ dd/ d）CL +eCL +e + f + f d d2 2A/dA/d2 2= =（d d2 2/ d/ d2 2）CL +eCL +e 4.4.導數(shù)光譜法中的主要參數(shù)導數(shù)光譜法中的主要參數(shù) 1)1)微

52、分階數(shù)微分階數(shù)(n) n(n) n的選擇主要由干擾組分吸收曲線的形狀而的選擇主要由干擾組分吸收曲線的形狀而定。定。 n n越大，分辨力愈強，但信噪比將降低。越大，分辨力愈強，但信噪比將降低。 2)2)波長間隔波長間隔() () 愈大，測量靈敏度增大，但分辨率降愈大，測量靈敏度增大，但分辨率降低，通常低，通常選選1 12nm2nm為好。為好。 3)3)中間波長中間波長( (m m) ) 通常需選兩個通常需選兩個m m，即，即m1m1、m2m2 。其選擇。其選擇原則：待測組分的導數(shù)曲線在原則：待測組分的導數(shù)曲線在m1m1、m2m2處的形狀易辨認，較特征；處的形狀易辨認，較特征；而干擾組分在此處的導

53、數(shù)值相等或相近。而干擾組分在此處的導數(shù)值相等或相近。 5.5.應用舉例應用舉例 1)1)肺露中丹皮酚含量的測定肺露中丹皮酚含量的測定 ()()干擾丹皮酚測定情況的考察：干擾丹皮酚測定情況的考察： 按處方配比，分別取藥材，加水適按處方配比，分別取藥材，加水適量，蒸餾提制成量，蒸餾提制成2222味藥材的模擬液，以味藥材的模擬液，以水為空白，分別繪制紫外吸收光譜圖。水為空白，分別繪制紫外吸收光譜圖。 從圖中看出，牡丹皮蒸提液紫外吸從圖中看出，牡丹皮蒸提液紫外吸收很強，枇杷葉和蘆根蒸提液紫外吸收收很強，枇杷葉和蘆根蒸提液紫外吸收較弱，干擾丹皮酚的測定，實驗表明：較弱，干擾丹皮酚的測定，實驗表明：丹皮酚

54、在堿性溶液中的吸收光譜發(fā)生紅丹皮酚在堿性溶液中的吸收光譜發(fā)生紅移，移，= 35= 352nm2nm。 1 1牡丹皮牡丹皮 2 2枇杷葉枇杷葉 3 3蘆根蘆根 ()()選擇測定波長選擇測定波長 精取丹皮酚對照液精取丹皮酚對照液2ml2ml，枇杷葉和蘆根，枇杷葉和蘆根蒸提液各蒸提液各10ml10ml，分別于，分別于25ml25ml量瓶中，加量瓶中，加0.1mol/L0.1mol/L氫氧化鈉溶液至刻氫氧化鈉溶液至刻度，混勻。以度，混勻。以0.1mol/L0.1mol/L氫氧化鈉溶液為空白，繪制吸收光譜（零階）氫氧化鈉溶液為空白，繪制吸收光譜（零階）和一階導數(shù)光譜，如下圖。按中間波長選擇原則，選和一階

55、導數(shù)光譜，如下圖。按中間波長選擇原則，選330330和和370nm370nm為中間波長，則測定波長為為中間波長，則測定波長為328nm328nm和和332nm332nm，368nm368nm和和372nm372nm。蒸提液在蒸提液在0.1mol0.1molL L氫氧化鈉溶液中的光譜圖氫氧化鈉溶液中的光譜圖 一階導數(shù)光譜圖一階導數(shù)光譜圖1 1肺露肺露 2 2丹皮酚丹皮酚 3 3枇杷葉枇杷葉 4 4蘆根蘆根 1 1丹皮酚丹皮酚 2 2枇杷葉枇杷葉 3 3蘆根蘆根 ()()標準曲線標準曲線 精密量取丹皮酚對照液精密量取丹皮酚對照液(0.1(0.1mg/ml)0.5mg/ml)0.5、1.01.0、3

56、.0ml3.0ml，分別于，分別于25ml25ml量瓶中，加量瓶中，加0.1mol/L0.1mol/L氫氧化鈉溶液至刻度，氫氧化鈉溶液至刻度，混勻，以混勻，以0.1mol/L0.1mol/L氫氧化鈉溶液為空白，在測定波長處測吸收度，氫氧化鈉溶液為空白，在測定波長處測吸收度，計算一系列計算一系列AA值。值。A =(AA =(A328328 - A - A332332) - (A) - (A368368 - A - A372372) )。 標準曲線的回歸方程為：標準曲線的回歸方程為： A = -11.08C + 0.0009 A = -11.08C + 0.0009 （r = 0.9997r =

57、0.9997） ()()樣品測定樣品測定 取同一批號或不同批號樣品，分別精密量取取同一批號或不同批號樣品，分別精密量取10ml10ml于于25ml25ml量瓶中，加量瓶中，加0.1mol/L0.1mol/L氫氧化鈉溶液至刻度，混勻，以氫氧化鈉溶液至刻度，混勻，以0.1mol/L0.1mol/L氫氧化鈉溶液為空白，在測定波長處測其吸收度，算出氫氧化鈉溶液為空白，在測定波長處測其吸收度，算出AA，根據(jù)標準曲線的回歸方程，計算樣品中丹皮酚含量。，根據(jù)標準曲線的回歸方程，計算樣品中丹皮酚含量。 本法平均回收率本法平均回收率99.5799.57，RSD=0.82%RSD=0.82%。 2 2）清宮沖劑中

58、膽酸的二階導數(shù)光譜測定法）清宮沖劑中膽酸的二階導數(shù)光譜測定法 （）干擾情況的考察）干擾情況的考察 膽酸對照液與樣品的二階導數(shù)光譜膽酸對照液與樣品的二階導數(shù)光譜顯示，在顯示，在397nm397nm，386nm386nm波長處有相應的吸收峰和吸收谷。陰性樣品波長處有相應的吸收峰和吸收谷。陰性樣品二階導數(shù)光譜呈近乎平直線條，見下左圖。豬去氧膽酸的二階導數(shù)二階導數(shù)光譜呈近乎平直線條，見下左圖。豬去氧膽酸的二階導數(shù)光譜將光譜將360360420nm420nm區(qū)間的吸收消除為二次無關(guān)吸收，不干擾樣品中區(qū)間的吸收消除為二次無關(guān)吸收，不干擾樣品中膽酸的含量測定如下中圖。下右圖表明，膽酸二階導數(shù)光譜，其峰膽酸的

59、含量測定如下中圖。下右圖表明，膽酸二階導數(shù)光譜，其峰- -谷振幅值谷振幅值D D與濃度具有良好的線性關(guān)系，因此，可用與濃度具有良好的線性關(guān)系，因此，可用397nm397nm，386nm386nm兩波長的振幅兩波長的振幅D D為定量參數(shù)，用峰為定量參數(shù)，用峰- -谷法進行測定。谷法進行測定。 樣品，膽酸對照品溶樣品，膽酸對照品溶 膽酸、豬去氧膽酸二膽酸、豬去氧膽酸二 對照品溶液對照品溶液 液二階導數(shù)光譜液二階導數(shù)光譜 階導數(shù)光譜階導數(shù)光譜 二階導數(shù)光譜二階導數(shù)光譜A A樣品樣品 B. B. 膽酸對照品膽酸對照品 C.C.陰性樣品陰性樣品 1 1膽酸膽酸 2 2豬去氧膽酸豬去氧膽酸 ()()測定條

60、件測定條件 零階光譜掃描波長：零階光譜掃描波長：190190550nm550nm；二階導數(shù)；二階導數(shù)光譜掃描波長，光譜掃描波長，360360420420nmnm；=5nm=5nm。 ()()標準曲線標準曲線 精密稱定膽酸對照品約精密稱定膽酸對照品約30mg30mg，置，置100ml100ml量瓶中，量瓶中，加入加入6060醋酸稀釋至刻度，分別精密吸取醋酸稀釋至刻度，分別精密吸取0.10.1、0.20.21.0ml1.0ml于于15ml15ml具塞刻度試管中，加具塞刻度試管中，加6060醋酸至醋酸至1.0ml1.0ml，加入稀硫酸，加入稀硫酸14140ml0ml，搖勻，搖勻，7070水浴中放置水