1、前言大面積深度燒傷或其他創傷導致皮膚真皮成分缺損，通過刃厚小皮片或微粒植皮技術雖然能使創面愈合，但由于其缺乏真皮層，導致愈合后創面彈性差，凸凹不平， 易攣縮且不耐摩擦。移植自體皮瓣或全厚及中厚皮片固然是最好的方法，但大面積深度燒傷后，能作為供皮區的部位已很少，供皮區又將形成同等程度的缺損， 日后形成瘢痕。為解決這一問題，國內外學者致力于尋找一種理想的真皮替代品。1. 脫細胞真皮基質概述脫細胞真皮基質（acellulardermalmatrixADM ）是用物理、化學等方法將人或動物皮膚中的表皮層及細胞成分徹底去除僅保留真皮中含膠原網架的細胞外基質。脫細胞真皮基質由于完全沒有了細胞成分和I、 n

2、型細胞相容性抗原的主要免疫活性, 故一般不會誘發排斥反應。但脫細胞真皮基質保留有正常膠原的三維結構和真皮中含膠原支架的細胞外基質能為組織細胞的再生提供一個良好的支架結構，具有創面覆蓋、組織缺損填充、引導組織再生和支架等作用。脫細胞真皮基質中無細胞成分, 免疫活性低, 不會誘發免疫反應。它保留了表皮和真皮間的基底膜, 移植后可形成真皮面和基底膜面。基底膜面可支持斷層皮片的生長, 這對表皮細胞的增殖分化以及移植皮的外觀和功能起著重要作用, 同時也有利于種子細胞的點附增殖等。真皮面利于脫細胞真皮基質的快速血管化,為成纖維細胞的增殖提供支架, 有助于膠原成分改建, 促使成纖維細胞排列分布規則 , 形成

3、結構形態正常的膠原纖維, 此外 , 還有誘導、調節宿主細胞和新生血管長入 , 促進上皮形成等作用。此外, 細胞外基質蛋白也可以促進表皮細胞的再生。因此 , 脫細胞真皮基質可作為真皮替代品, 在為燒傷創面提供真皮的同時, 可明顯減少瘢痕形成。是一種理想的真皮替代材料。1.1 脫細胞真皮基質的制備方法根據來源的不同脫細胞真皮基質分為異體脫細胞真皮基質（來源主要為尸體 皮）和異種脫細胞真皮基質（來源為動物皮以豬皮和牛皮為主）兩種。制備過程都是盡可能的去除具有抗原性的細胞（ 表皮細胞、毛囊、皮脂腺、汗腺及真皮中血管內皮細胞、成纖維細胞等）, 保留完整的膠原纖維成分和組織基本結構。早期人們曾利用反復凍融

4、法、胰酶消化法等制備 ADM但由于這些方法不能完全去除 真皮內細胞成分，導致AD瞄植后引起宿主弓S烈的排異反應，而且制備過程也過于 復雜，因而并未廣泛開展。目前ADMJ制備方法主要有Dispasell-Triton 法、高滲 鹽-SDSt、高滲鹽-酶消化法、NaO消蝕法等。只要條件控制適度，這些方法均可 制備出合乎條件的ADMDispaseII-Triton 法皮 膚 標 本 先 經 DispaseII 處 理 （ 2.5U/ml 溶 液 ,4 下 作 用 48h）, 再 經 TritonX2100處理（0.5%溶液,室溫下作用48h）可將皮膚中的細胞徹底脫除。 Dispasell主要分解IV

5、型膠原和纖維粘蛋白，能裂解基底膜中的致密層。DispaseII是一種快速有效的分離表皮與真皮的酶。標本經DispaseII處理后，表皮真皮間的基底膜及皮膚附屬器官周圍結締組織成分均被破壞。DispaseII同時也破壞了纖維細胞和結締組織基質間的連結，更有利于TritonX2100的浸透。TritonX2100屬于非 離子型表面活性劑, 在溶液中穩定性高, 不易受強電解質無機鹽存在的影響, 能與生物膜中的磷脂等脂質結合形成復合物，溶解于溶液中。同時，ThtonX2100中的 疏水端也能和膜蛋白破壞生物膜, 從而使細胞溶解破壞。該方法細胞脫除徹底,但同時基底膜結構破壞大, 不利于上皮細胞底黏附生長

6、。高滲鹽-SDS法皮膚標本先經高滲鹽作用（1mol/LNaCl溶液,37c下作用24h）使錨著細絲與表 皮基底細胞的半橋粒分離, 從而完整地去除表皮。然后在未改變膠原結構的情況下，再用破膜劑十二烷基硫酸鈉（0.5%SDS容液，室溫下作用1h）將皮膚標本中的 細胞脫除。該方法細胞脫除也比較徹底，基底膜完整保留，但真皮中IV型膠原、纖 維結合素、彈力素、HLA-DR1含量較多，因此具有相對高的抗原性。高滲鹽 -NaOH 消蝕法該方法利用高滲鹽（1mol/LNaCl溶液,37 C下作用24h）去除表皮，同時再利用 NaOH（低濃度溶液，室溫下作用18h）中堿離子的吸水作用奪取組織細胞的水分 ， 使細

7、胞脫水而死亡; 最后使用超聲清洗儀清洗除去細胞。該方法細胞徹底脫除, 膠原纖維結構完整，排列較正常松散。但要注意控制NaOH的作用時間，如果過長（如：36h）會使膠原變性,蛋白裂解，得到的是真皮皮漿。酶消化 - 去垢劑法該 方 法 用 胰 蛋 白 酶 （0.25% 溶 液 ,4 下 作 用 24h）, 接 著 用 TritonX2100（0.1% 溶液 , 室溫下作用8h）, 最后用 Dispase（560units/L,4 下作用24h）°Ra冷7使用胰蛋白酶（0.25%溶液，室溫下作用18h）和SDS（0.1%§液，室溫 下作用 12h）, 然后用胰蛋白酶再作用12h,

8、 最后用 Dispase（560units/L,25 下作用 12h）, 制得的基質均無細胞成分, 膠原支架完整。脫細胞真皮基質的制備流程1.2 脫細胞真皮基質的作用機制脫細胞真皮基質保留了真皮與表皮之間的基底膜, 故在應用時可形成基底膜與真皮兩個面。基底膜面支持移植于其表面的斷層皮片的生長, 對表皮細胞的分化成熟和移植皮的外觀與功能起著非常重要的作用, 亦有利于組織工程中種子細胞或培養的角骯細胞的黏附、擴展等。真皮面有利于ADMfc宿主內快速血管化,為成纖維細胞的生長提供良好的支架, 有助于對脫細胞真皮膠原成分的改建, 促使成纖維細胞形成形態結構及排列分布正常的膠原纖維, 還具有調節、誘導、

9、促進宿主細胞長入, 促進纖維細胞增生、新生血管和上皮形成等作用。真皮成分的多寡是創面愈合后彈性、外觀是否良好的重要因素, 瘢痕形成的量及攣縮程度與所植皮片中真皮的含量成反比。真皮含量不足時成纖維細胞只能合成不成熟的基質 , 此種基質經改建后即成為瘢痕組織。脫細胞真皮基質作為一種真皮代替物能被宿主接納, 并被改建成為自體真皮組織, 減少皮片移植后的瘢痕形成及攣縮, 能與全厚皮片移植后的效果相媲美。1.3 脫細胞真皮基質的臨床應用范圍1. 腹壁外科（1） 嬰幼兒腹壁缺損（2）嵌頓性或絞窄性腹壁疝（ 3）腹壁缺損伴有污染或感染創面（4）食道裂孔疝（ 5）盆底腹膜修復（6）腹腔室間隔綜合癥腹腔關閉（

10、7）全腹壁切除或缺損的腹壁再造（8）其他復雜的腹壁修復情況2. 泌尿外科長段尿道狹窄或缺損、先天性尿道下裂、尿瘦、膀胱擴容、腎組織修補3 .結直腸、肛門外科(1)非急性期的單純性高位和低位肛瘦(2)陰道前庭瘦(3)對肛門括約肌功能影響大的肛瘦和肛周感染(4)管狀消化道瘦4 口腔科(1) 口腔黏膜缺損(2)牙周手術治療(3)腭裂修復術中修復軟組織缺損5整形外科(1)燒傷創面及燒傷后期瘢痕攣縮畸形的修復(2)慢性創面及病理性瘢痕的修復(3)面部整形及美容：矯正鼻畸形、眼瞼，結膜層缺損的修復、隆唇6耳鼻喉科(1)鼓膜穿孔的修補(2)鼻中隔穿孔的修補(3)咽部缺損的修復(4)腦脊液鼻漏修補及蝶鞍的修復

11、1.4產品性能要求和技術可行性檢測標準外觀目測規格型號企標單位面積重量企標酸堿度企標企標耐溫性企標熾灼殘渣企標重金屬含量GB/T14233.1-2008降解時間GB/T16886.13-2001抑菌性能GB/T20944.3-2008致熱性生皮內反應試驗物 遲發型超敏反應學避細胞毒性試驗評價全身毒性（急性）亞慢性毒性遺傳毒性植入血液相容性無菌試驗GB/T16886.11-2011 附錄 FGB/T16886.10-2005GB/T16886.10-2005GB/T16886.5-2003GB/T16886.11-2011GB/T16886.11-2011GB/T16886.3-2008GB/T

12、16886.6-1997GB/T16886.4-2003GB/T14233.2-2005注：以上產品性能指標需要進行檢測之后才能設定企業本身的產品性能要求。從質量控制角度，可從有脫細胞真皮生產能力的廠家采購真皮材料， 根據公 司制定的原材料檢驗標準對采購的真皮材料質量進行控制，質量合格方能進入生 產，然后利用公司現有分切設備，包裝等設備進行生產，經過滅菌后根據產品企 業標準進行檢驗，檢驗合格后方能出廠銷售。從關鍵技術控制角度，可對關鍵技術指標進行設定，要求供應商達到采購設定的 性能技術要求，并制定原材料檢驗標準，根據檢驗標準對采購的真皮材料進行關 鍵技術指標的檢驗，檢驗合格后方能入庫生產。因此

13、，終上所述，可吸收止血紗布技術可行，產品質量可控。2.國內外上市脫細胞真皮基質現況異體脫細胞真皮基質國內外上市的產品有美國 LifeCell公司推出的Allodern , 該產品的異體真皮來源于尸體皮。臨床上應用于燒傷，瘢痕切除創面取得良好的 效果。而國內上市的產品主要有北京桀亞萊福生物技術有限公司生產的J-1型異 體脫細胞真皮基質和北京清源偉業生物組織工程科技有限公司生產的脫細胞異體真皮基質醫用組織補片（商品名稱：瑞諾）。雖然異體脫細胞基質在臨床上的應 用效果較好但也存在著不可忽視的不足（1）異體皮供體來源有限；（2）有傳播 人類疾病的可能性；（3）存在著倫理問題；（4）需要低溫保存，保存運

14、輸不方 便。而目前，異種脫細胞真皮基質在國內以上市的有：（1）北京瑞克倍爾醫療器械有限公司出產的脫細胞真皮基質敷料，該產品 以豬皮為主要原材料，采用新型物理、化學及生化等方法除去了豬皮內的各種雜 質，完整地保留了真皮細胞外基質的形態，保持原有的三維立體網狀結構。主要 適用于1.外傷撕脫傷創面；2.骨外露、肌腱外露創面；3.慢性潰瘍、褥瘡及肉 芽創面；4.中厚皮供皮區創面；5.刃厚皮、郵票皮、微粒皮移植手術創面，6.燒傷創面、切削痂后的創面。（2）江蘇優創生物醫學科技有限公司生產的異種脫細胞真皮基質敷料（商品名：東慈真皮基質）同樣該產品也是以豬皮為原料，經病毒滅活與脫細胞等工藝 制備而成具有三維網狀結構，主要用于淺R度燒（燙）傷創面、供皮區創面、深度 燒傷切（削）痂創面，肉芽創面等創面的覆蓋治療。（3）江陰奔翔生物科技有限公司生產的豬皮脫細胞真皮基質敷料，同樣也 是以豬皮為原料經純化處理冷凍干燥后成型加工而成， 該產品適用于n度燒傷創 面、供皮區創面覆蓋。（4）煙臺正海生物技術有限公司生產的口腔修復膜 （商品名：海奧）和皮膚 修復膜（商品名：海孚）兩者均為牛的皮膚組織經一系列處理后制備的異種脫細胞 真皮