1、佛甲草對小鼠實驗性肝損傷的保護作用                作者：周青 劉建新 周俐 熊小琴 趙海燕【關鍵詞】  ,佛甲草；實驗性肝損傷；保護作用；脂質過氧化摘要：目的:觀察佛甲草對小鼠實驗性肝損傷的保護作用。方法:分別采用四氯化碳（CCl4）、萘異硫氰酸酯（ANIT）一次性灌胃中毒致小鼠急性肝損傷及黃疸模型，測定血清谷丙轉氨酶（ALT）、總膽紅素（TBiL）含量及血清、肝組織中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）水

2、平和觀察肝組織病理變化，分析佛甲草對上述指標的影響。結果:佛甲草能明顯降低CCl4中毒性小鼠血清ALT、血清及肝組織中MDA含量（P0.01）,使SOD，NO水平顯著增高（P0.01，P0.001）; 能明顯降低ANIT中毒性小鼠血清TBil含量(P0.001); 肝臟病理組織學檢查表明佛甲草能明顯減輕肝細胞的變性和壞死。結論: 佛甲草對CCl4和ANIT所致的急性肝損傷有保護作用, 其機理可能與抗脂質過氧化及改善肝臟微循環, 恢復肝臟功能的作用有關。關鍵詞：  佛甲草；  實驗性肝損傷；  保護作用；  脂質過氧化Protective Effects&

3、#160; of  Sedum  Lineare  Thunb  on Experimental Acute   Hepatic  Injury in  Mice Abstract：Objective:To observe the protective effects of solution  isolated from sedum lineare  thunb on  experimental   acute  hepatic liver  i

4、njury in  mice. Methods:To observe the contents of total bilirubin and alanine aminotransferase (ALT)in serum ,the  contents of malondialdehyde(MDA) , activity of superoxide dismutase (SOD) , level of nitrogen monoxide in serum and  liver tissue ,hepato-pathohistologic  changes C

5、Cl4,naphthalin fluorescein isothiocyanate(ANIT) inducing  acute liver  injury and icterus  respectively in  mice  po, the effects of sedum  lineare  thunb on  the biochemical  changes  were analysed. Results:The results showed the extract of sedum li

6、neare thunb could significantly decrease the contents of ALT in serum  and  the contents of  MDA in serum and liver tissue respectively  in CCl4 toxicomice（P0.01）, increase  the activity of  SOD and  the level of NO  in serum and liver tissue respectively（P0.0

7、1，P0.001）;the extract could markedly reduce the contents of TBil in serum in ANIT toxicomice(P0.001). The result of hepatopathohistologic examination  showed   the extract effectively decreased degeneration and necrosis of liver cells. Conclusion:The  extract of sedum lineare thu

8、nb has the protective effects on acute liver injury in mice induced by  CCl4   and ANIT.The  mechanism is likely related to its ameliorating microcirculation and  anti-lipid  peroxidation.Key words：Sedum  lineare  thunb;  Experimental hepatic injury; 

9、; Protective effect;  Lipid  peroxidation   佛甲草（sedum  lineare Thunb）為景天科植物佛甲草的全草，性味甘寒，具有清熱、解毒、消腫等功效，民間用于治療黃疸、遷延性肝炎、咽喉腫痛、痢疾等癥1。有關佛甲草對小鼠實驗性肝損傷的保護作用目前尚未見報道，故而進行了初步研究并探討其機理。1  材料與方法1  材料1.1  佛甲草提取液的制備  佛甲草采自贛州,夏天采集，曬干后粉碎成粗粉，取適量蒸餾水加熱提取2次,30  min/次,過濾,合并2

10、次濾液并濃縮至適量,加入相當濃縮液3倍量的95%乙醇,放置冰箱48 h后減壓過濾,濾液回收乙醇至無醇味,用蒸餾水調整至含4 g/ml的生藥液。1.2  試劑  四氯化碳,分析純，上海長江化工廠； 萘異硫氰酸酯；化學純；北京通縣育才精細化工廠；谷丙轉氨酶試劑盒,衛生部上海生物制品研究所；總膽紅素試劑盒，四川邁克科技有限公司；丙二醛、超氧化物歧化酶、一氧化氮試劑盒，南京建成生物工程研究所提供。1.3  動物  昆明種小鼠，體重(20±2)g，雌雄兼用，贛南醫學院實驗動物中心提供。1.4  儀器   400型全自動生化儀

11、，日本奧林巴斯公司；721型分光光度計,上海精密科學儀器有限公司。2  實驗方法2.1  急性毒性實驗健康昆明種小鼠50只，均衡隨機分為5組，每組10只。按急性毒性實驗方法2設計藥物劑量的組間距為10.9。一次性ip0.2 ml/10g佛甲草提取液后,觀察小鼠運動、呼吸、皮毛反應、進食等情況并記錄3 d內死亡數。2.2  CCl4造模與檢測48只昆明種小鼠，每組12只，隨機分成4組，分別為對照組，CCl4模型組，治療組，治療組。對照組和模型組分別灌胃生理鹽水10 ml/kg；治療組小鼠灌胃佛甲草提取液4 g/kg；治療組灌胃佛甲草提取液5 g/kg。1次/d，連續

12、15 d。末次給藥后2 h，正常組腹腔注射等容量花生油，其余各組均腹腔注射0.1%CCl4花生油溶液10 ml/kg一次。禁食，自由飲水。16 h后各組小鼠斷頭取血。以12 000 r/min離心5min，取血清，采用400型全自動生化分析儀測定ALT活性；采用分光光度法測定MDA，SOD，NO穩定終產物硝酸鹽/亞硝酸鹽水平（NO3/NO2）。MDA 含量測定采用硫代巴比妥酸法，SOD活力測定采用黃嘌呤氧化酶法， NO測定采用硝酸還原酶法。取適量肝組織用冰冷生理鹽水沖洗，置冰浴中勻化制得10%肝勻漿，以3 500 r/min離心10min，取上清液測定MDA，SOD，NO3/NO2水平，蛋白定

13、量采用考馬斯亮蘭法,以牛血清白蛋白為標準。具體步驟均按各試劑盒說明書操作。另取各鼠相同部位的肝臟用10%福爾馬林溶液固定，采用常規石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察肝細胞變性壞死程度。分級標準：在1個肝小葉中，（+）表示只有幾個細胞發生相應的病理改變，分布散在；（+）表示50%左右細胞發生相應的病理改變，分布較廣；（+）表示絕大多數細胞發生相應的病理改變，分布彌散；（）表示未發生相應的病理改變。2.3  ANIT造模與檢測昆明種小鼠60只，每組15只，分組及用藥處理同前。除正常組外，其余各組分別于第13天給藥后2 h 灌胃ANIT花生油溶液60 mg/kg一次。所有小鼠在ANIT中毒前和

14、處死前分別禁食18 h，自由飲水。ANIT中毒48h后斷頭取血。離心，取血清，采用400型全自動生化分析儀測定TBil含量，具體步驟按試劑盒說明書操作。2.4  統計方法 數據以 ±s表示，采用雙側t檢驗進行統計處理。         1  江蘇新醫學院. 中藥大辭典,上冊M.上海：上?？茖W技術出版社，1990：11421142.2  李儀奎. 中藥藥理實驗方法學M.上海：上海科學技術出社，1990：529529.3  嚴奉祥，朱炳陽，鄭  興，等.金粉蕨

15、素對小鼠實驗性肝損傷脂質過氧化的保護作用J.南華大學學報，2002，30(1)：44.4  劉春宇，顧振綸，韓  蓉，等.沙苑子提取物對小鼠四氯化碳肝損傷的保護作用J.中草藥，2002，33(12)：11041104.5  李  鋒，李宣海，謝良民.維生素E和硒對CC1、大鼠急性肝損傷和抗氧化功能的影響J.胃腸病學， 2002，7（6）：338338.6  Marcelo NM, et al . Nitric oxide V Therapeutic potential of nitric oxide donors and  inhibitorsJ. Am J