1、針刺對血管性癡呆患者尿中氧化應激標志物的影響        【摘要】     目的 探討氧化應激與血管性癡呆(VD)的關系以及針刺的抗氧化作用機制。方法 通過對16例VD患者的觀察,分析針刺前后簡易精神狀態檢查(MMSE)分值和尿中氧化應激標志物8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)、8-異前列腺素(8-isoPGF2)以及硝基酪氨酸(NT)水平的變化。結果 針刺后VD患者MMSE分值較針刺前明顯提高,尿中8-OHdG含量明顯下降,而尿中8-isoPGF2和NT含量未見明

2、顯變化。結論 針刺可降低VD患者DNA氧化損傷標志物8-OHdG的水平,發揮抗氧化作用,改善VD患者的認知功能。     【關鍵詞】  針刺;氧化應激;標志物;血管性癡呆;簡易精神狀態檢查    Abstract：Objective To investigate the correlation between oxidative stress and vascular dementia (VD), and to explore the mechanism of the antioxidant effect

3、 of acupuncture. Methods A total of 16 VD patients were recruited. MMSE score and urinary levels of three biomarkers of oxidative stress including 8-hydroxydeoxyguanosine (8-OHdG), 8-iso-prostaglandin F2 (8-isoPGF2) and nitrotyrosine (NT) were examined before and after acupuncture. Results Significa

4、ntly higher MMSE score and lower urinary 8-OHdG level were detected in VD patients after acupuncture. However, no significant differences were found in urinary 8-isoPGF2 and NT levels between before and after acupuncture. Conclusion Acupuncture can decrease the oxidative DNA damage and increase the

5、antioxidant defense in VD patients.Key words：acupuncture;oxidative stress;biomarkers;vascular dementia;mini-mental state examination血管性癡呆(vascular dementia,VD)系由各種腦血管因素導致腦組織損害所引起的以高級認知功能障礙為主的臨床綜合征1。由于認知能力和社會行為能力下降,且病程持續數月至半年以上,嚴重影響了患者的生活質量2。在老年期癡呆中,VD是除阿爾茨海默病之外第2種最為常見的類型,約占10%50%3。伴隨著人口老齡化和心腦血管疾病的日益

6、增加,VD發病率可能躍居癡呆的首位4。自由基與DNA、蛋白質和脂類反應后的氧化產物可以作為反映自由基水平或者氧化應激的標志物5。其中,8-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy-2'-deoxyguanosine,8-OHdG)是活性氧自由基氧化損傷DNA后的產物,是公認的DNA氧化損傷生物標志物。8-異前列腺素(8-iso-prostaglandin F2,8-isoPGF2)被認為是目前判斷活體內脂質過氧化損傷程度最理想的生物學指標。硝基酪氨酸(nitrotyrosine,NT)是自由基引起蛋白質損傷的重要標志物6。本研究通過觀察針刺前后VD患者尿中8-OHdG、8-isoPGF2以及N

7、T的水平,探討針刺治療VD的抗氧化作用機制。1 研究對象1.1 一般資料來自2008年6月-2009年7月天津中醫藥大學第一附屬醫院和天津市天拖醫院針灸科門診及病房的16例VD患者。其中,男9例,女7例;年齡5080歲,平均(63.83±9.30)歲;既往病史有冠心病者7例(43.75%),有糖尿病者2例(12.50%),有高血壓者12例(75.00%),有腎病者1例(6.25%),有中風家族史者3例(18.75%)。1.2 診斷標準依據美國國立神經系統疾病與卒中研究所和瑞士神經科學研究國際協會(NINDS/AIREN)制定的很可能VD的臨床診斷標準7。1.3 納入標準符合VD診斷標

8、準;病程2周以上;年齡在5080歲之間;Hachinski缺血指數7分以上;輕中度癡呆簡易精神狀態檢查中文修訂版(mini-mental state examination revised,MMSE-R)評分1026分;對針刺研究的意義有正確認識,對研究人員的觀察和評價有良好的依從性;簽訂知情同意書。1.4 排除標準在腦血管病發生以前已有癡呆癥狀者;診斷為AD或其他類型癡呆者;合并嚴重心、肝、腎功能不全及造血系統、內分泌系統嚴重原發病者;嚴重失語、抑郁證、精神疾病者。2 研究方法2.1 針具漢醫牌一次性針灸針,規格為0.25×40 mm和0.25×25 mm,北京漢醫醫療器

9、械中心生產。2.2 處理方法主穴：百會、四神聰、神庭、內關、膻中、中脘、氣海、血海、足三里。配穴：腎精虧虛取懸鐘,痰濁阻竅取豐隆,瘀血阻絡取舌下(刺絡放血),肝陽上亢取太沖,火熱內盛取內庭,腑濁滯留取天樞,氣血虧虛取關元。操作：百會、四神聰,斜刺0.2寸,小幅度高頻率捻轉補法;神庭,平刺0.50.8寸,小幅度高頻率捻轉補法;內關,直刺0.51.0寸,平補平瀉捻轉手法;膻中,針尖向上平刺0.5寸,小幅度高頻率捻轉補法;中脘及氣海均直刺1.01.5寸,小幅度高頻率捻轉補法;血海,針尖向股內側斜刺0.51.0寸,大幅度低頻率捻轉瀉法;足三里,直刺0.51.0寸,小幅度高頻率捻轉補法。配穴中懸鐘、關元

10、行捻轉補法,太沖、豐隆、內庭、天樞行捻轉瀉法。留針30 min,隔日針刺1次,治療6周。2.3 觀察指標采用Folstein MMSE-R量表8評價受試者的定向力、計算力和注意力、即刻記憶和延遲記憶、語言等認知功能的變化。分別于針刺治療前和針刺治療6周后收集患者的晨尿,立即放入?80 冰箱中保存,待測。應用酶聯免疫法(ELISA)法測定尿8-OHdG及8-isoPGF2水平(試劑盒：Cayman Chemical Company,Ann Arbor,MI,USA)。應用化學發光法測定尿中NT水平(試劑盒：Millipore Corp., Bedford,MA,USA)。2.4 統計學方法采用S

11、PSS10.0統計分析軟件。計量資料用x±s進行描述。針刺前后的比較應用配對t檢驗進行統計。P<0.05被認為差異有統計學意義。3 結果3.1 針刺對血管性癡呆患者認知功能的影響VD患者針刺前MMSE-R得分為18.24±0.91,針刺后為20.62±0.99,較治療前明顯升高(P<0.05),提示針刺可明顯改善VD患者的認知功能。3.2 針刺對血管性癡呆患者尿中氧化應激標志物的影響與針刺前比較,針刺后VD患者尿中8-OHdG含量明顯下降(P<0.05)。但針刺前后尿中8-isoPGF2、NT含量未見明顯變化(P>0.05)。見表1。表1

12、16例VD患者針刺前后尿中8-OHdG、8-isoPGF2及NT水平變化情況4 討論化學性質高度活潑的自由基通過細胞運輸,破壞其他分子結構,導致細胞損害,是腦缺血-再灌注、腦動脈粥樣硬化和神經退行病變等神經系統疾病的重要病理基礎之一9-10。與其他組織相比,腦組織具有較低的抗氧化劑含量、高密度的膜不飽和脂肪酸、較高的氧化代謝率以及依賴完整的神經元突觸傳遞,特別易于遭受活性氧介導的損傷11。氧化應激與癡呆的病理生理學機制密切相關,被普遍認為是導致其神經功能損害的關鍵因素9,12。研究表明,在腦缺血、超氧自由基和空間認知功能損害之間存在著密切的關聯13-14。針刺療法作為一種安全有效的治療手段,被

13、廣泛應用于VD的預防和治療15。我們的前期研究表明,針灸可以通過超氧化物歧化酶/谷胱甘肽過氧化物酶抗氧化酶級聯途徑,減少VD大鼠自由基形成,提高機體抗氧化防御能力16-17。機體的氧化損傷廣泛存在,主要表現為生物大分子(如DNA、蛋白質、脂類等)結構功能的損傷,并由此導致基因突變、細胞癌變及個體衰老等現象。8-OHdG是活性氧自由基氧化損傷細胞核DNA或線粒體DNA后形成的產物。自由基攻擊DNA鏈上的鳥嘌呤堿基使C-8位發生羥化而生成加合物羥基脫氧鳥苷,故8-OHdG是DNA氧化損傷的主要產物之一18。目前機體8-OHdG水平已被廣泛接受為評價DNA氧化損傷的標志物,通過8-OHdG的檢測可以

14、評價體內氧化損傷和修復的程度、氧化應激與DNA損傷的相互關系,并用來估計氧化應激與疾病的相關性19。本研究發現針刺后VD患者尿中8-OHdG含量較針刺前明顯下降,表明針刺可改善VD患者的DNA氧化損傷程度。異前列腺素是自由基催化細胞膜上的花生四烯酸過氧化而形成的前列腺素樣化合物,其中F2-異前列腺素是體內含量最為豐富一種異前列腺素,8-isoPGF2是異前列腺F2的主要和穩定的成分,具有收縮血管以及促進血小板粘附和聚集等生物活性。8-isoPGF2最終可以經尿液排出體外,因此可以通過測定尿8-isoPGF2濃度研究脂質過氧化對神經系統病變的損傷機制20。自由基引起蛋白質損傷的一個重要標志物是N

15、T21。硝化酪氨酸殘基水平的升高,標志著蛋白質的氧化修飾22。當超氧陰離子自由基和一氧化氮同時存在時,可以自發形成一種更強的氧化劑過氧化亞硝酸鹽。過氧化亞硝酸鹽能夠作用于蛋白質分子中的酪氨酸殘基,其產物是NT,它可降低體內各種酶的活性,并阻止蛋白質激酶的活化。既往研究發現,NT的形成與腦損傷高度相關23。本研究發現,針刺前后VD患者尿中的8-isoPGF2和NT水平未見明顯差異,提示針刺可能對體內脂質過氧化損傷、蛋白質氧化損傷沒有明顯的影響。分析原因可能與尿樣本在檢測過程中出現自氧化有關。此外,生活方式、飲食、體能活動、吸煙等因素也可影響尿中的8-isoPGF2和NT水平24。本研究通過比較針

16、刺前后VD患者的認知功能評分和氧化損傷的降解代謝產物的水平,發現針刺可以明顯降低VD患者尿中DNA氧化損傷標志物的水平,發揮針刺抗氧化作用,改善VD患者的認知功能。但是,由于機體氧化損傷過程的復雜性,上述指標易受體內外因素的影響,本研究僅是從氧化應激標志物的角度闡釋針刺的抗氧化作用,今后將進一步檢測氧化與抗氧化之間的動態平衡狀態,全面、客觀地分析針刺改善認知功能的作用機制。    【參考文獻】  1 Black SE. Vascular cognitive impairment：epidemiology, subtypes, diagnosis

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