1、多藥耐藥基因在乳腺癌組織中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系 作者：張劍虹 張飛 劉軍超 趙秀芳 白睿【摘要】 目的：研究Pgp、ToPo、GST在乳腺癌中的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系。方法：乳腺癌標(biāo)本78例行SP法免疫組化法染色。結(jié)果：Pgp 陽性率為65.4%（51/78），期乳腺癌Pgp陽性率明顯高于、期，Pgp 陽性率與5年生存率呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。GST陽性表達(dá)率為70.5%（55/78），在乳腺癌臨床期中其陽性表達(dá)率高達(dá)76.2%，與臨床、期相比有顯著性差異（P<0.05），其陽性表達(dá)率與5年生存率呈明顯負(fù)相關(guān)（P<0.05）。ToPo的表達(dá)為64.1%

2、（50/78），臨床期表達(dá)明顯低于，期。結(jié)論：化療前檢測Pgp,ToPo,GST的耐藥基因蛋白，對判斷乳腺癌的預(yù)后及指導(dǎo)化療有一定的價值。 【關(guān)鍵詞】 乳腺腫瘤；多藥耐藥基因；P糖蛋白；DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶；谷胱甘肽S 轉(zhuǎn)移酶 【ABSTRACT】 Objective：To explore expression of Pgp,ToPo,GST in breast carcinoma and its relationship with prognosis.Methods：Routine section preparation from 78 cases with breast cancer were

3、 measured with SP Immunohistochemistry method.Results：The positive rate of Pgp is 65.4%（51/78）and that in stage of breast carcinoma was obviously higher than that of stageand stage,the positive rate was negative correlation with 5year survival rate（P<0.05）.The positive expression rate of GST

4、was 70.5%（55/78）,that in clinical stage of breast carcinoma was up to 90.9%,and there was significant difference among clinical stage and clinical stage ,（P<0.05）,the positive expression rate was obviously negative correlation with 5year survival rate（P<0.05）.The positive expression ra

5、te of ToPo was 64.1%（50/78）,and that in clinical stage was obviously lower than stageand stage.Conclusion：It is valuable to measure Pgp,ToPo,GST before chemotherapy for judging the prognosis of breast carcinoma and guiding the chemotherapy. 【KEY WORDS】 Breast Carcinoma,MDR,Pgp,ToPo,GST 乳腺癌是女性易患的惡性腫瘤

6、之一，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢，嚴(yán)重危害廣大婦女的健康。化療是臨床上常用的治療手段，但多藥耐藥（MDR）是導(dǎo)致乳腺癌化療失敗的重要原因之一。本研究應(yīng)用免疫組化染色方法檢測乳腺癌組織中的Pgp、GST及Topo的表達(dá),探討其與乳腺癌TNM臨床分期和預(yù)后的關(guān)系,為乳腺癌患者術(shù)后選擇合理的化療方案提供參考。 1 資料與方法 1.1 一般資料 河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院20072008年間經(jīng)病理證實(shí)的術(shù)前未接受化療的原發(fā)性乳腺癌78例，全部組織經(jīng)病理確診，均為女性患者,患者年齡在26 70歲之間（平均53.5歲）。50歲者31例，50歲者47例。其中浸潤性導(dǎo)管癌49例，浸潤性小葉癌19 例，導(dǎo)管內(nèi)癌6例，

7、印戒細(xì)胞癌4例。按國際臨床分期標(biāo)準(zhǔn)，期25例，期32例，期21例。 1.2 試劑及實(shí)驗(yàn)方法 即用鼠型抗人Pgp、ToPo、GST單克隆抗體及 SP試劑盒均為福州邁新生物技術(shù)公司產(chǎn)品。標(biāo)本以10%福爾馬林固定，石蠟包埋切片，分別作 HE 染色和 SP免疫組織化學(xué)染色，已知陽性片作陽性對照。 1.3 陽性結(jié)果判斷 Pgp 陽性顆粒分布于胞膜和胞漿，GST陽性顆粒分布于胞漿，ToPo定位于胞核。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：無陽性細(xì)胞反應(yīng)為陰性；切片中陽性細(xì)胞10%為陽性；陽性細(xì)胞25%：+；陽性細(xì)胞25%50%：+；陽性細(xì)胞50%：+。 1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)及相關(guān)性分析。

8、2 結(jié)果 2.1 乳腺組織免疫組化染色結(jié)果見表1。Pgp陽性表達(dá)陽性部位為胞漿和胞膜(見圖1)；GST表達(dá)陽性部位呈棕黃色顆粒分布于胞漿,極少數(shù)伴核染色(見圖2)；Topo表達(dá)陽性部位呈棕黃色分布于胞核上，陽性細(xì)胞分布無規(guī)律，呈灶狀或單個細(xì)胞散在分布(見圖3)。 2.2 乳腺癌組織中Pgp、GST、Topo的表達(dá)與乳腺癌的預(yù)后關(guān)系在隨訪的73例患者中，5年內(nèi)生存者Pgp、GST表達(dá)陽性率低于5年內(nèi)死亡者(P<0.05)，而5年內(nèi)生存者Topo表達(dá)陽性率高于5年內(nèi)死亡者(P<0.05) 見表2。2009年6月張劍虹等：多藥耐藥基因在乳腺癌組織中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系表

9、1 Pgp、GST、Topo在乳腺癌組織中的表達(dá)與臨床分期的關(guān)系注：與期比較*P0.05；與、期比較* P<0.05 表2 Pgp、GST、Topo與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系注：與5年組比較*P<0.05 3 討論 乳腺癌尤其是晚期乳腺癌化療成功的主要障礙是癌細(xì)胞對化療產(chǎn)生耐藥性1。越來越多研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌耐藥為多基因，多步驟耐藥，涉及Pgp、ToPo、及GST等24。許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)乳腺癌多藥耐藥基因及其編碼的糖蛋白，在乳腺癌多藥耐藥中起主要作用，具有重要臨床意義。它針對親脂類藥物，如阿霉素、長春新堿等多種藥物產(chǎn)生耐藥性。由于它們產(chǎn)生的機(jī)制相同，只要細(xì)胞對其中的一種藥物產(chǎn)生耐藥

10、性，同時對許多化學(xué)結(jié)構(gòu)不同的全部親脂類藥物產(chǎn)生耐藥性即多藥耐藥性,對化療極為不利。MDR可以在治療一開始就出現(xiàn)即天然耐藥性,也可以在治療過程中由一種藥物誘導(dǎo)而產(chǎn)生即獲得性耐藥,化療的應(yīng)用可導(dǎo)致MDR抗藥性腫瘤的出現(xiàn),這已經(jīng)成為臨床治療腫瘤的一大障礙。在治療前檢測腫瘤的耐藥性，對選擇合適的治療手段，尤其是行之有效的化療方案具有重要參考價值。 本研究涉及患者化療方案為，該方案中阿霉素即為Pgp耐藥藥物，Pgp陽性組年生存率明顯下降，說明Pgp 耐藥導(dǎo)致的化療失敗是年生存率下降的主要原因之一。本文資料中Pgp表達(dá)的陽性率達(dá)65.4%，說明Pgp是導(dǎo)致腫瘤耐藥的重要催化劑,也是導(dǎo)致化療失敗的重要原因之

11、一。在乳腺癌臨床期的病例中，Pgp陽性率與臨床、期相比有顯著性差異。而其年生存者Pgp表達(dá)的陽性率顯著低于5年內(nèi)死亡者，說明Pgp的陽性表達(dá)率是評估預(yù)后的重要指標(biāo)。 GST是GST 家族中的一種主要的同工酶，具有解毒功能。目前認(rèn)為是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥的一種標(biāo)記，所介導(dǎo)的抗癌藥物主要為順鉑等。GST是一種催化谷胱甘肽和各種親電子化合物（包括致癌劑和抗癌劑）結(jié)合的多功能酶系。在正常組織中低表達(dá)，而在許多耐藥細(xì)胞株中高表達(dá)，特別是在有多藥耐藥（MDR）表型的細(xì)胞系中。其作用是通過降解化療藥物的殺傷作用，造成癌細(xì)胞耐藥4。本研究其陽性表達(dá)高達(dá)70.5%，說明GST是導(dǎo)致腫瘤耐藥的重要催化劑，也是導(dǎo)致化療

12、失敗的重要原因之一。在乳腺癌臨床期中其陽性表達(dá)率高達(dá)90.9%，與臨床、期相比有顯著性差別。5年內(nèi)死亡者GST陽性表達(dá)率顯著高于5年生存者，提示GST表達(dá)越高，腫瘤分期越晚，對化療藥物的耐受性越高，預(yù)后越差。 Topo是一種核酶，參與DNA的轉(zhuǎn)錄、翻譯、復(fù)制及染色體分離等過程，能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞內(nèi)DNA合成，使增殖能力提高，與腫瘤的惡性程度有關(guān)；它是多種抗癌藥物如拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑作用的靶酶，不同的表達(dá)量和活性與耐藥表型的維持密切相關(guān)。表達(dá)水平下降則腫瘤對抗癌藥物敏感性下降，耐藥性增加5，6。本研究中Topo活性為64.1%(50/78)，在乳腺癌臨床、期組織中分別為72%和68.7%,兩者間無顯著

13、性差異，而在臨床期組織中Topo活性只為47.6%,與前兩者相比具有顯著性差別。因此Topo活性的下降是腫瘤耐藥的重要機(jī)制之一。 乳腺癌化療的耐藥性常常是多種耐藥基因參與不同機(jī)制共同作用的結(jié)果79。本文結(jié)果表明，Pgp、ToPo、GST等耐藥基因均參與了乳腺癌耐藥的形成，因此，在臨床耐藥逆轉(zhuǎn)時要同時考慮多方面的耐藥因素。Pgp、ToPo、GST的表達(dá)對臨床分期及預(yù)后有影響意義。通過檢測乳腺癌Pgp、ToPo、GST的表達(dá)，對乳腺癌化療方案的選擇有指導(dǎo)意義。【參考文獻(xiàn)】 1 Tsuruo T.Molecular Cancer the rapeutics recent progress and t

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